棉酚對T2DM合并NAFLD大鼠肝臟的保護作用

王家員 樊建霜 吳亮 黃卡特 王蓉蓉

●論 著

棉酚對T2DM合并NAFLD大鼠肝臟的保護作用

王家員 樊建霜 吳亮 黃卡特 王蓉蓉

目的 探討棉酚對2型糖尿病（T2DM）合并非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝臟的保護作用。方法 將30只SD雄性大鼠隨機分為棉酚組、T2DM組和正常組，每組10只。高脂高糖飲食喂養4周后腹腔注射小劑量（30mg/kg）鏈脲佐菌素構建T2DM大鼠模型。棉酚組用棉酚混懸液灌胃12周，每次劑量為15mg/kg，前4周為1次/d，后8周為1次/周。實驗結束后檢測大鼠血清ALT、AST、白蛋白（ALB）及透明質酸（HA）水平；透射電鏡下觀察肝組織超微結構改變；經HE染色、Masson膠原纖維染色后，在光鏡下分別觀察肝組織形態學改變、纖維化病變；免疫組化染色檢測肝組織α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、肝臟Ⅰ型11β類固醇脫氫酶（11β-HSD1）及糖皮質激素受體（GR）蛋白表達；采用半定量RT-PCR法檢測肝組織葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、瘦素受體（Leptin R）、胰島素受體（Insulin R）mRNA表達水平。結果 與正常組相比，T2DM組血清ALT、AST、HA水平均明顯升高（均P＜0.05），ALB水平明顯降低（P＜0.01）；肝臟α-SMA、11β-HSD1、GR蛋白表達均明顯增強（均P＜0.05）；肝組織Leptin R、Insulin R mRNA表達均明顯升高（均P＜0.01）；臨床病理學表現主要為肝細胞水腫、脂肪變性、氣球樣變、炎癥細胞浸潤及纖維組織增生，肝組織內可見較多活化的肝星形細胞。與T2DM組相比，棉酚組血清ALT、AST、HA水平均明顯降低（均P＜0.05），ALB水平明顯升高（P＜0.05）；肝臟11β-HSD1、GR蛋白表達均明顯降低（均P＜0.05）；肝組織G6Pase、PEPCK、Insulin R、Leptin R mRNA表達均明顯下降（均P＜0.01）；臨床病理學表現主要為肝細胞水腫、脂肪變性、氣球樣變及炎癥現象稍有減輕，肝內纖維組織明顯減少，肝組織內活化的肝星形細胞數量明顯減少。結論 低劑量棉酚可明顯減輕T2DM合并NAFLD大鼠纖維化病變，其機制可能與其抑制組織11β-HSD1、Leptin R、Insulin R mRNA表達有關。

棉酚 2型糖尿病 非酒精性脂肪性肝病 Ⅰ型11β類固醇脫氫酶 瘦素受體 胰島素受體

【 Abstract】 Objective To investigate the hepatoprotective effect of gossypol in type 2 diabetic (T2DM)rats complicated with non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD). Methods Thirty male Sprague-Dauley rats were divided randomly into normal control group,T2DM group and gossypol-treated group with 10 in each group.After being fed with high-fat feeding for 4 weeks, the latter two groups were injected with strepozotocin(30mg/kg)intraperitoneally to induce T2DM.The rats in gossypol treated group were given gossypol at a dose of 15mg·kg-1·d-1for 4 weeks by gavage,then at a dose of 15mg·kg-1·d-1until the end of week 12.At the end of the experiment all animals were sacrificed,the concentration of serum ALT,AST,ALB and HA were measured.The ultrastructural changes of liver were observed by transmission electron microscopy(TEM),the pathologic changes and fibrosis of liver were observed by light microscopy(LM)with HE staining and Masson staining respectively.Additionally,the activated hepatic stellate cells(HSCs)and the protein expression of 11 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1(11β-HSD1) and glucocorticoid receptors(GR)was assayed by immunohistochemistry(IHC),the mRNA expression of phosphoenolpyruvate carboxykinase(PEPCK),glucose-6-phosphatase(G6Pase),insulin receptor and leptin receptor in liver tissue was assayed by semi-quantitative RT-PCR. Results The levels of serum ALT,AST,HA increased(P＜0.05),serum ALB decreased(P＜0.05),the 11β-HSD1 and GR protein expression increased(P＜0.05),the mRNA expression of insulin receptor,leptin receptor increased (P＜0.05)in liver tissue of T2DM group compared with normal control group.Clinical pathology showed obvious liver hydropicdegeneration,fatty degeneration,ballooning degeneration,inflammatory infiltration,fibrosis,a great number of activated HSCs in liver tissue of T2DM group.The levels of serum ALT,AST,HA decreased (P＜0.05),serum ALB increased (P＜0.01),the 11β-HSD1 and GR protein expression decreased(P＜0.05),the mRNA expression of PEPCK,G6Pase,insulin receptor and leptin receptor decreased (P＜0.05)in liver tissue of gossypol treated group compared with diabetic group.The hydropic degeneration,fatty degeneration,ballooning degeneration,inflammatory infiltration in liver tissue were improved slightly but the hepatic fibrosis was attenuated and the number of activated HSCs was reduced in gossypol treated group significantly compared with T2DM group. Conclusion Low dosage gossypol can attenuate fibrosis of NAFLD in diabetic rats.Down regulation of mRNA expression of 11β-HSD1,insulin receptor and leptin receptor may be involved in it.

【 Key words】 Gossypol Type 2 diabetes Nonalcoholic fatty liver disease 11beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 Leptin receptor Insulin receptor

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一種以肝細胞內脂肪沉積為特征但無過量飲酒史的慢性肝臟疾病[1]。NAFLD包括非酒精性單純性脂肪肝（NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及相關肝硬化、肝細胞癌[1]。在這一組由輕至重的疾病譜中，纖維化對疾病的發展起著關鍵的作用。NAFLD發病機制復雜，目前較為公認的觀點是胰島素抵抗導致的糖脂代謝紊亂是其啟動因子與中心事件。糖皮質激素（GC）是潛在的胰島素拮抗劑，它對靶組織的作用依賴于局部組織Ⅰ型11β類固醇脫氫酶（11β－HSD1）調節的受體前代謝[2]。棉酚是從棉籽中提煉出來的一種黃色脂溶性多酚化合物，曾被證實是一種非常有效的男性避孕藥[3]。相關研究表明，棉酚能抑制大鼠睪丸11β－HSD1活性[4]。本課題組前期研究發現棉酚可以降低2型糖尿病（T2DM）大鼠的血糖、血脂、血胰島素水平[5－6]，抑制大腦皮層與海馬組織內11β－HSD1蛋白表達[6]。國外研究證實棉酚具有拮抗肺纖維化的功能[7]。目前關于棉酚對T2DM大鼠肝臟11β－HSD1的表達及肝臟形態、功能的影響，國內外未見文獻報道。故本課題組構建T2DM合并NAFLD大鼠模型，觀察棉酚對糖尿病大鼠肝臟形態與功能的影響，檢測肝組織α－平滑肌肌動蛋白（α－SMA）、11β－HSD1、糖皮質激素受體（GR）的蛋白表達，以及葡萄糖－6－磷酸酶（G6Pase）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、瘦素受體（Leptin R）、胰島素受體（Insulin R）基因mRNA表達水平，探討棉酚對T2DM合并NAFLD大鼠肝臟的保護作用機制。

1 材料和方法

1.1 實驗材料 SPF級雄性SD大鼠，體重140～180g [由溫州醫科大學實驗動物中心提供，SCXK（浙）2015－0004]；鏈脲佐菌素（廈門星隆達化學試劑有限公司）；ALT、AST、白蛋白（ALB）、透明質酸（HA）試劑盒（上海海研醫學生物技術有限公司）；鼠抗單克隆抗體α－SMA（北京中杉金橋生物試劑有限公司），兔抗多克隆抗體11β－HSD1（由美國洛克菲勒大學人口委員會葛仁山教授惠贈），兔抗多克隆抗體GR（美國圣克魯斯生物技術有限公司），二抗（北京中杉金橋生物試劑有限公司）；Triol（美國Invitrogen公司），M－MLV逆轉錄酶（美國Promega公司），PCR試劑[大連寶生物（TaKaRa）公司]；所用引物由上海Invitrogen公司合成。

1.2 方法

1.2.1 動物造模[8]將30只雄性SD大鼠隨機分為棉酚組、T2DM組和正常組，每組10只。棉酚組、T2DM組用高糖高脂飼料（飼料配方：10.0%豬油、20.0%蔗糖、2.5%膽固醇、1.0%膽酸鹽、66.5%常規飼料）喂養4周后，禁食12h，按照30mg/kg的劑量單次腹腔注射鏈脲佐菌素（溶于0.1mmol/L枸椽酸緩沖液內，pH 4.0）；72h后檢測空腹血糖≥8mmol/L，即造模成功。正常組大鼠腹腔注射等容積枸櫞酸緩沖液。

1.2.2 藥物治療[8]將棉酚溶于2%羧甲基纖維素混合制成棉酚混懸液，棉酚組用棉酚混懸液灌胃12周，每次劑量為15mg/kg，前4周為1次/d，后8周為1次/周[5]。T2DM組、正常組用等容積2%羧甲基纖維素灌胃。實驗期間，T2DM組、棉酚組繼續用高糖高脂飼料喂養。

1.2.3 血清檢測 股動脈放血處死大鼠，采集血清10ml，2 200r/min離心10min，取上清液；使用日立7600大型生化分析儀檢測血清ALT、AST、ALB水平，采用放免法檢測血清HA水平。

1.2.4 肝臟病理學檢查 （1）HE染色：取10mm×10mm× 2mm的新鮮肝臟組織1塊，置于10%中性甲醛溶液中固定6h，經脫水、透明、浸蠟、包埋成蠟塊，用切片機制成厚度約3μm切片，行HE染色。隨機選擇5個高倍視野（× 200）進行NAFLD活動度積分（NAS）[1]：①肝細胞脂肪變性＜5%為0分，5%～＜34%為1分，34%～66%為2分，＞66%為3分；②小葉內炎癥（200倍鏡下壞死灶計數）無為0分，1個為1分，2～4個為2分，＞4個為3分；③肝細胞氣球樣變“無”為0分，“少見”為1分，“多見”為2分。（2）Masson膠原纖維染色：肝組織石蠟切片，脫蠟至水，蘇木素染色5min，1%鹽酸乙醇分化數秒，置于Masson液染色5min，水洗數次，置于亮綠液中染色1min，經低濃度到高濃度梯度乙醇脫水，石碳酸－二甲苯中紅綠分化數秒，入二甲苯透明，中性樹膠封固。結果判斷：膠原纖維藍綠染，肝細胞胞質紅染，肝細胞核紫色；光鏡下隨機選擇5個低倍鏡視野（×100）觀察膠原纖維的分布，按以下標準進行肝組織纖維化分期評分[1]：無纖維化為0分；肝小葉3區竇周或匯管區周圍纖維化為1分；肝小葉3區竇周合并匯管區周圍纖維化為2分；橋接纖維化為3分；高度可疑或確診肝硬化為4分。

1.2.5 肝臟超微結構檢查 取新鮮肝組織1小塊，約1mm×1mm×1mm，立即置于2.5%戊二醛4℃固定1h；餓酸后固定，行常規PBS漂洗，丙酮梯度脫水；用Epon812包埋，半薄切片定位，用LKB－V型超薄切片機切片；行鉛鈾雙重染色，在H－600A型透射電鏡下觀察。

1.2.6 免疫組化染色 根據Envision二步法進行染色。將石蠟標本切成厚度5μm切片，在60℃水浴箱內展貼于防脫膠APES處理的載玻片上，常規脫蠟、脫水至蒸餾水；用3%過氧化氫甲醇溶液阻斷內源性過氧化物酶10min；將切片置于0.01mol檸檬酸緩沖液中（pH 7.2～7.4）高壓抗原修復10min；分別滴加一抗α－SMA（稀釋濃度1∶100）、11β－HSD1（稀釋濃度1∶300）、GR（稀釋濃度1∶160），置于4℃冰箱過夜；用0.01mol PBS（pH 7.2～7.4）漂洗數次，滴加二抗及HRP復合物，反應20min；DAB顯色；蘇木素復染；以0.01mol PBS代替一抗作為陰性正常。結果判定：α－SMA、11β－HSD1定位于細胞質，GR定位于細胞核，棕黃色為陽性表達；光鏡下隨機選擇5個低倍鏡視野（×100），按以下標準評估α－SMA蛋白表達[9]：無著色為無表達；＜10%為輕度表達；10%～25%為中度表達；＞25%～50%為重度表達；＞50%為極重度表達。應用Image－Pro Plus 6.0圖像處理軟件計算累積吸光度（OD），以評估11β－HSD1、GR蛋白表達。

1.2.7 半定量RT－PCR －80℃超低溫冰箱內取出冷凍肝組織100mg，碾碎后加入1ml Triol，提取總RNA。應用Beckman Coulter DU800紫外分光光度儀進行RNA純度、濃度檢測。取2μg OD260/OD280比值1.8～2.0的RNA在M－MLV逆轉錄酶下合成cDNA。取1μl cDNA作為模板，在Taq DNA聚合酶催化下行目的基因G6Pase、PEPCK、Insulin R、Leptin R和內參基因RPS16的PCR同管擴增。PCR引物及反應條件見表1。PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳（含0.5μg/ml Goldview染色劑），應用Gel－pro31凝膠分析系統分析PCR產物條帶累積光密度，以各目的基因與內參照基因的比值反映目的基因的相對mRNA水平。

表1PCR引物及反應條件

1.3 統計學處理 應用SPSS 19.0統計軟件。計量資料用表示，3組間比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 3組大鼠血清肝功能指標及HA水平比較 與正常組比較，T2DM組大鼠血清ALT、AST、HA水平均明顯升高，ALB水平明顯降低，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。與T2DM組比較，棉酚組大鼠血清ALT、AST、HA水平均明顯降低，ALB水平明顯升高，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表2。

2.2 3組大鼠肝臟病理學評分比較 正常組大鼠肝小葉以中央靜脈為中心，肝索呈放射狀整齊排列，肝血竇清晰可見；T2DM組大鼠肝索紊亂、肝血竇消失，肝細胞廣泛水腫伴部分氣球樣變、明顯脂肪變性，多灶區肝細胞點狀壞死伴炎癥細胞浸潤、小膽管增生；棉酚組肝細胞水腫、氣球樣變、脂肪變性、肝細胞壞死、炎癥細胞浸

潤略有減輕，見圖1（插頁）。Masson膠原纖維染色：僅正常組見血管壁少許膠原纖維綠染；T2DM組見肝小葉3區竇周隙區域或氣球樣變、嚴重脂肪變性的肝細胞外周有“雞爪樣”的膠原纖維增生為主的NASH特征性的纖維化病變，嚴重者肝小葉3區膠原纖維與匯管區膠原纖維相互連接并形成橋接纖維化，甚至個別肝小葉內纖維組織增生將其分割形成假小葉；棉酚組膠原纖維增生程度較T2DM組明顯減輕，兩組纖維化分期評分比較差異有統計學意義，見圖2（插頁）和表3。

圖1 3組大鼠肝組織形態學改變（a.：正常組；b：T2DM組；c：棉酚組；HE染色，×200）

圖2 3組大鼠肝組織膠原纖維分布（a：正常組；b：T2DM組；c：棉酚組；Masson染色，×100）

表2 3組大鼠血清肝功能及HA水平比較

2.3 3組大鼠肝臟超微結構比較 正常組大鼠肝細胞核呈圓形、居中，胞質內有豐富的線粒體、粗面內質網，未見脂滴，見圖3a（插頁）；T2DM組大鼠肝細胞核固縮、偏位，胞質內見大量脂滴，粗面內質網數目減少，線粒體體積變小、數目減少、密度增高，狄氏竇膠原纖維增生，見圖3b（插頁）；棉酚組大鼠肝細胞核固縮減輕，胞質內脂滴略有減少，線粒體數目增多、密度降低，板狀嵴變清晰，粗面內質網與正常組相近，狄氏竇未見明顯膠原纖維增生，見圖3c（插頁）。

圖3 3組大鼠肝臟超微結構（a：正常組胞質內可見豐富的線粒體、內質網，透射電鏡，×6 000；B：T2DM組胞質內見脂滴（↑），狄氏竇示膠原纖維增生（←），透射電鏡，×12 000；C：棉酚組線粒體密度降低，板狀嵴較清晰，透射電鏡，×20 000）

表3 3組大鼠肝臟病理學評分比較

2.4 3組大鼠肝臟α-SMA、11β-HSD1、GR蛋白表達正常組肝星形細胞不表達α-SMA，僅肝小葉中央靜脈、小葉間靜脈、小葉間動脈血管壁的平滑肌細胞表達α-SMA，肝臟α-SMA蛋白表達水平為0；T2DM組肝組織內可見局灶表達α-SMA的增生、活化的肝星形細胞，高倍鏡下星形細胞胞漿呈星狀或棱狀突起，主要分布于肝小葉3區竇周纖維組織增生區域及纖維組織增生的匯管區及其周圍，其分布與膠原纖維增生區域基本一致，其α-SMA蛋白表達水平為1.60±1.35，與正常組比較差異有統計學意義（P＜0.05）；棉酚組肝組織內陽性表達α-SMA的肝星形細胞明顯減少，部分肝組織未見表達α-SMA的肝星形細胞，其α-SMA蛋白表達水平為0.40±0.52，與T2DM組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見圖4。

圖4 3組大鼠肝組織α-SMA蛋白表達（a：正常組；b：T2DM組；c：棉酚組；Invision法，×400）

正常組肝臟11β-HSD1呈弱陽性表達，其蛋白表達水平為4 316.57±1 330.35，主要在中央靜脈周圍區；T2DM組肝臟11β-HSD1蛋白表達水平為9 857.37±5 762.49，明顯高于正常組（P＜0.05）；棉酚組肝臟11β-HSD1蛋白表達水平為5 651.48±3 345.21，明顯低于T2DM組（P＜0.05），與正常組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見圖5。

正常組肝臟GR呈中等強度表達，其蛋白表達水平為3 319.11±1 462.39，多數肝細胞核呈棕黃色；T2DM組GR蛋白表達水平為8 922.95±2 324.85，明顯高于正常組（P＜0.05），肝細胞核略顯棕黑色；棉酚組GR蛋白表達水平為4 576.68±2 136.43，明顯低于T2DM組（P＜0.05），與正常組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見圖6。

2.5 3組大鼠肝組織G6Pase、PEPCK、Leptin R、Insulin R mRNA表達 T2DM組肝組織Leptin R、Insulin R mRNA表達均明顯高于正常組（均P＜0.05）；G6Pase、PEPCK mRNA表達有升高趨勢，但與正常組比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。與T2DM組相比，棉酚組肝組織PEPCK、G6Pase、Insulin R、Leptin R mRNA表達均明顯下降（均P＜0.05），見表4和圖7（插頁）。

3 討論

NAFLD是T2DM的一種常見并發癥，其發病率高達50%[10]。多數患者僅表現為肝細胞內脂肪沉積的單純性脂肪肝，臨床預后良好；但仍有20%～30%的患者伴肝內炎癥、纖維組織增生的NASH。NASH若不進行早期干預治療，纖維組織持續增生，將發展為不可逆轉的肝硬化甚至肝功能衰竭[11]。因此，有效地治療糖尿病性NAFLD具有重要的臨床意義。

圖5 3組大鼠肝臟11β-HSD1蛋白表達（a：正常組；b：T2DM組；c：棉酚組；Invision法，×400）

圖6 3組大鼠肝臟GR蛋白表達（a：正常組；b：T2DM組；c：棉酚組；Invision法，×400）

表4 3組大鼠肝組織G6Pase、PEPCK、LeptinR、InsulinRmRNA表達

圖7 3組大鼠肝組織G6Pase、PEPCK、Leptin R、Insulin R mRNA的表達（M：100bp分子量標準；a：正常組b：T2DM組；c：棉酚組）

GC是潛在的胰島素拮抗劑，可在多個水平參與調節葡萄糖－胰島素之間的平衡，如抵抗胰島素的外周作用、抑制胰島素的釋放、促進糖異生等[12]。11β－HSD1是GC的代謝酶，具有脫氫/氧化還原兩種活性，催化局部器官、組織內無生物活性的GC可的松與有生物活性GC皮質醇的相互轉換。在肝臟，11β－HSD1以還原酶活性為主，催化可的松轉換為皮質醇[13]。肝臟是糖代謝的重要靶器官，肝臟通過糖異生的方式合成肝內葡萄糖，G6Pase、PEPCK是糖異生的關鍵酶[14]。PEPCK催化草酰乙酸是磷酸烯醇式丙酮酸，G6Pase催化葡萄糖－6－磷酸分解成葡萄糖、磷酸，引起血液中葡萄糖水平升高，主要生理意義在于保證饑餓情況下的血糖濃度相對恒定。G6Pase、PEPCK的表達受到胰島素的抑制與胰高血糖素的激活。Insulin R是一種廣泛分布于各組織與器官的跨膜蛋白，胰島素通過與其結合發揮生物學效應，其中肝臟是Insulin R的主要靶器官，Insulin R的數目受到血胰島素水平的調節。胰島素與受體的結合程度隨糖尿病嚴重程度而增加，發生糖尿病時肝細胞Insulin R數目可增加180%，但Insulin R的酪氨酸激酶活性降低，由胰島素介導的葡萄糖利用率反而減少[15]。瘦素是由肥胖基因編碼白色脂肪組織合成的一種分泌型蛋白質，它通過與靶器官上的Leptin R結合而發揮生物學效應。瘦素及其受體在葡萄糖代謝過程中具有重要作用。在生理情況下，胰島素與瘦素之間是一個雙向的反饋調節，即胰島素刺激瘦素分泌、瘦素抑制胰島素分泌，一旦這種平衡被破壞，胰島素對瘦素的靈敏度減弱，則引起胰島素抵抗。

本實驗結果顯示T2DM組血清AST、ALT、HA水平均明顯升高，ALB水平明顯降低；臨床病理學表現主要為肝細胞水腫、脂肪變性、點狀壞死伴炎癥細胞浸潤、肝纖維組織增生等。肝臟11β－HSD1、GR蛋白表達明顯升高；肝組織Insulin R、Leptin R mRNA表達明顯升高。筆者認為發生T2DM時肝內11β－HSD1蛋白表達增強并激活GC活性，GC通過與肝細胞內GR受體的結合發揮拮抗胰島素的作用，使肝組織對胰島素的靈敏度降低，從而使胰島素刺激瘦素分泌的功能下降；可見機體通過上調肝組織Insulin R、Leptin R mRNA表達是一種改善胰島素抵抗的代償反應。棉酚組血清AST、ALT、HA水平均明顯下降，ALB水平明顯升高，肝纖維化程度明顯減輕；提示棉酚具有保護T2DM大鼠肝臟的作用。同時，肝臟 11β－HSD1、GR蛋白表達明顯下降，PEPCK、G6Pase mRNA表達亦明顯下降，提示棉酚可抑制肝臟11β－HSD1蛋白表達，一方面降低肝內有活性的GC濃度，從而使肝內GR表達亦相應減少，改善肝組織對胰島素的靈敏度；另一方面減弱了GC刺激糖異生的作用，使血糖降低，糖異生關鍵酶PEPCK、G6Pase mRNA表達減少。此外，棉酚還能抑制肝組織Insulin R、Leptin R mRNA表達水平，可能參與降低糖尿病胰島素水平、改善胰島素抵抗的作用。在NAFLD發病過程中，高糖致線粒體內超氧陰離子產生過多導致組織細胞內發生氧化應激是關鍵因素[16]。肝內氧化應激增加，肝星形細胞被激活并分裂增殖，使肝星形細胞具有肌纖維母細胞分泌膠原纖維的功能，促進肝纖維化[17]。本實驗發現棉酚組大鼠活化的肝星形細胞數目明顯減少，肝纖維化程度明顯減輕，可能與棉酚改善胰島素抵抗、減少糖異生有關。

本課題組前期研究發現[6]，T2DM大鼠大腦皮層、海馬組織內GR蛋白表達明顯升高，經棉酚治療后，GR蛋白表達明顯下降，與本實驗中肝臟GR蛋白表達結果相反。筆者考慮原因在于兩者形成機制不同：（1）肝組織局部有活性的GC增多主要是刺激GR蛋白表達使之與過多的GC結合以發揮拮抗胰島素的作用，而棉酚可抑制11β－HSD1的表達，使無活性的GC轉化成有活性的GC的量減少，因此GR也相應減少。而在腦內GC與GR結合的作用主要是對HPA軸起負反饋調節作用，局部有活性的GC對神經元的損害導致神經元數目減少、GR減少，使GC對HPA的抑制作用減弱，因此HPA對應激反應持久亢進，分泌GC水平升高，從而進一步加重了腦神經元的損害，形成惡性循環。棉酚通過抑制11β－HSD1的表達，使局部有活性的GC減少，可減輕GC對神經元的損害，因此，大腦皮層、海馬組織內GR蛋白表達增強。

棉酚曾是一種實用的男性口服避孕藥而被廣泛應用臨床，但高劑量（20～30mg/kg）會抑制11β類固醇脫氫酶－2而出現低血鉀，因此逐步停止使用；后來有研究證實低劑量（15mg/kg）無低血鉀的不良反應[18]，本課題組前期研究結果亦與其一致[5－6]。因此，低劑量棉酚可明顯減輕T2DM合并NAFLD大鼠纖維化病變，其機制可能與其抑制組織11β－HSD1、Leptin R、Insulin R mRNA表達有關。

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Heptoprotective effect of gossypol in type 2 diabetic rats complicated with non-alcoholic fatty liver disease

WANG Jiayuan,FAN Jianshuang,WU Liang,et al.Pharmacy of Chinese Medicine,Wenzhou Chinese Medical Hospital,Wenzhou 325015,China

2017-02-21）

（本文編輯：陳丹）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.9.2017-326

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