高效液相色譜法測定銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量

汪玉萍 李傳響

高效液相色譜法測定銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量

汪玉萍 李傳響

目的建立銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法(HPLC)進行連翹苷的含量測定, 色譜柱為SHIMADZU VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm ), 流動相：水—乙腈—甲醇(60∶30∶10), 在277 nm波長處檢測。結果在0.1～0.5 mg/ml濃度范圍內連翹苷呈良好的線性關系(r=0.9998), 平均回收率為100.2%,RSD=1.12%(n=5)。結論本含量測定快速準確, 可用于本制劑的質量控制。

銀翹解毒顆粒 ；連翹苷；高效液相色譜法

銀翹解毒顆粒為臨床常用中成藥, 為解表劑, 具有辛涼解表、清熱解毒之功效。主治風熱感冒, 癥見發熱頭痛, 咳嗽口干, 咽喉疼痛。經分析其處方組成, 作者認為連翹苷也是藥效的重要成分之一, 為更好地控制該品種的質量, 應對其含量進行質量控制, 而現版藥典未對其進行含量控制［1］,為此作者研究其含量測定的方法, 報告如下。

1 儀器與試劑

LC—20AT型高效液相色譜儀(日本島津公司)；LC solution色譜工作站。連翹苷對照品(中國藥品生物制品檢定所, 批號：110821-201213, 含量：95.3%)；銀翹解毒顆粒(規格：15 g/袋, 160203;160721;160815)；試劑均為分析純。

2 方法與結果

2. 1 處方組成金銀花、連翹、薄荷、荊芥、淡豆豉、牛蒡子(炒)、桔梗、淡竹葉、甘草。

2. 2 含量測定經處方分析, 本方中金銀花、連翹為主要藥材, 綠原酸與連翹苷是該制劑兩個主要成分。連翹苷本文實驗條件下與樣品中其他成分間分離很好, 在277 nm有最大吸收［2］, 重現性好, 見圖1～3。現行版藥品標準［1］只確定了綠原酸的含量測定, 不能夠全面控制該制劑質量, 作者增加連翹苷作為質控指標之一, 應用HPLC法全面有效控制銀翹解毒顆粒的質量。

圖1 連翹苷紫外吸收圖譜

圖2 連翹苷對照品色譜圖

圖3 銀翹解毒顆粒樣品色譜圖

2. 3 系統性實驗 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS柱(150 mm× 4.6 mm, 5μm )；水—乙腈—甲醇(60∶30∶10), 檢測波長：277 nm；流速：1 ml/min, 柱溫：30℃；進樣量20μl。

2. 4 配制對照品溶液 精取連翹苷對照品約10 mg置于10 ml容量瓶中, 用甲醇溶解并稀釋至刻度制成1 mg /ml的對照品溶液［4］。

2. 5 制備供試品溶液 加氯仿分3次水浴回流萃取［1］20 min銀翹解毒顆粒20 g加水溶解過濾后的濾液, 合并氯仿液, 水浴蒸干, 用1 ml甲醇溶解得供試品溶液。

2. 6 制備陰性對照溶液 依照處方比例, 自制不含連翹的陰性對照樣品, 按2.3項下要求同法制備。

2. 7 繪制標準曲線精密吸取2.4項下溶液1、2、3、4、5 ml, 分置10 ml容量瓶中, 用甲醇稀釋至刻度, 制成不同濃度的溶液, 分別6次進樣20 μl, 以平均色譜峰面積(A)與連翹苷濃度(C)繪制標準曲線, 得回歸方程為C=7.1638×10-7+ 6.0212×10-4,r=0.9998, 表明結果呈線性關系。

2. 8 精密度試驗 精密吸取2.4項下對照品溶液, 按2.3項下色譜條件測定含量, 測定5次峰面積, 結果RSD=1.12%。

2. 9 回收率實驗 將已知含量的供試品樣品2 ml和1 ml的標準品溶液混合均勻, 按上述條件測定其中連翹苷的含量,結果平均回收率為100.2%,RSD=1.1%(n=5)。見表1。

表1 回收率實驗(n=5)

2. 10 樣品測定按上述方法, 測定3批樣品(規格15 g/袋, 160203；160721；160815)連翹苷的含量分別為6.2103、6.1376、6.2201 mg。

3 討論

3. 1 經不同流動相, 如氯仿—甲醇(70∶30)、水—乙腈(85∶15)、水—乙腈—甲醇(60∶30∶10)等多種流動相反復試驗, 結果以水—乙腈—甲醇(60∶30∶10)為流動相, 以VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm, 5μm)為分離柱的情況下, 分離的效果最佳。

3. 2 參考有關文獻資料［3-5］, 采用本法測定銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量, 穩定可靠, 重現性好, 可作為本制劑質控方法的重要補充。

［1］ 國家藥典委員會 . 中華人民共和國藥典(一部). 北京:化學工業出版社, 2015:附錄48.

［2］ 李芳美, 林朝展, 甄松峰, 等. RP-HPLC法測定抗病毒口服液中芒果苷和連翹苷的含量. 中藥新藥與臨床藥理, 2009, 20(1):47-49.

［3］ 孫曉佳, 紀宏宇, 蘭恭贊, 等. HPLC法測定乳癖消顆粒中連翹苷的含量. 中國藥師, 2016, 19(1):184-186.

［4］ 孟和, 朱艷紅, 吳學軍. HPLC法測定保和丸中連翹苷的含量.中國藥事, 2013, 27(3):312-314.

［5］ 陳國輝. 高效液相色譜法測定雙黃連口服液中連翹苷含量. 海峽藥學, 2015, 27(10):70-71.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.08.099

2017-03-03］

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