川西北高原2009-2016年牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷和整合子攜帶分析

陳朝喜，賀冬梅，湯承

（西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，成都 610041）

川西北高原2009-2016年牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷和整合子攜帶分析

陳朝喜，賀冬梅，湯承

（西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，成都 610041）

【目的】針對大腸桿菌耐藥性呈現(xiàn)逐年增加的趨勢和牦牛疾病防控中抗菌藥物使用存在的問題，對2009-2016年度采自川西北高原地區(qū)散養(yǎng)牦牛（包括健康和患病）的糞便、屠宰場宰殺牦牛的胃腸道內(nèi)容物和病死牦牛的臟器1 908株大腸桿菌進(jìn)行27種抗菌藥物敏感性試驗(yàn)和整合酶基因檢測，以了解川西北高原地區(qū)牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷規(guī)律和整合子攜帶情況，為牦牛安全用藥提供參考?！痉椒ā堪凑彰绹R床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(NCCLS)推薦的微量肉湯稀釋法對分離菌株進(jìn)行最小抑菌濃度(MIC)測定，利用WHONet 5.6軟件包對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理分析；采用常規(guī)PCR方法擴(kuò)增Ⅰ類和Ⅱ類整合酶基因以檢測分離菌株Ⅰ類和Ⅱ類整合子攜帶情況?！窘Y(jié)果】2009-2016各年度分離的大腸桿菌對27個(gè)藥物的耐藥水平表現(xiàn)出逐年增高的趨勢。除了 2014-2016年度分離菌株對土霉素的耐藥水平和 2015-2016年度分離菌株對磺胺類藥物的耐藥水平超過60.00%外，其他年度分離菌株對其余23個(gè)試驗(yàn)藥物的耐藥水平較低，其中對乙酰甲喹和利福平的耐藥率均在30.00%以下，對乙酰甲喹的敏感性高于利福平。不同年份的菌株整合子攜帶率也不同，788株攜帶至少一種類型整合子，占41.30%（788/1908），同時(shí)攜帶Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子的菌株共有140株，占7.34%（140/1908）。其中，攜帶Ⅰ類整合子的菌株共有582株，攜帶Ⅱ類整合子的菌株共有346株，分別占30.50%（582/1908）和18.13%（346/1908）?！窘Y(jié)論】川西北高原地區(qū)牦牛源大腸桿菌的耐藥性變遷和整合子攜帶情況分析結(jié)果，能夠?yàn)榇竽c桿菌的流行病學(xué)研究及其防治藥物的篩選提供理論依據(jù)和試驗(yàn)資料，保證抗菌藥物在川西北地區(qū)的正確合理應(yīng)用。

川西北高原; 牦牛; 耐藥性變遷；整合子

0 引言

【研究意義】牦牛是川西北高原地區(qū)牧民的經(jīng)濟(jì)來源和肉、奶等主要食品來源之一。長期以來，牧區(qū)常利用當(dāng)?shù)貎?yōu)勢藏藥資源來進(jìn)行牦牛疾病防治，很少使用到抗菌藥物等化學(xué)藥物。然而，近年來，隨著川西北高原地區(qū)旅游業(yè)的發(fā)展和人員流動(dòng)的增加，加上牦牛本身傳染病的肆虐，使得耐藥性革蘭氏陰性菌在川西北高原地區(qū)開始出現(xiàn)。因此, 對川西北高原地區(qū)牦牛源大腸桿菌進(jìn)行耐藥性變遷規(guī)律研究，對保證該地區(qū)牧民和畜禽的健康有著重要的意義。【前人研究進(jìn)展】大腸桿菌感染引起動(dòng)物發(fā)病率的不斷上升促使了不合理使用廣譜抗生素的惡性循環(huán)，導(dǎo)致對臨床抗菌藥物的敏感性降低，而生物被膜的形成使得大腸桿菌對抗菌藥物的耐藥性更加嚴(yán)重，常常引起感染的慢性發(fā)作和遷延不愈[1-3]。國內(nèi)外對牦牛源大腸桿菌耐藥性調(diào)查研究相對其他食品動(dòng)物如豬、雞和牛較少[4-6]。王紅寧課題組分別在2006年和2008年對川西北牦牛源致病性大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)菌株對常用抗菌藥物表現(xiàn)出不同程度地耐藥性[7-8]。貢嘎等對西藏6個(gè)地區(qū)的牦牛源大腸桿菌進(jìn)行的耐藥性分析結(jié)果顯示對氟喹諾酮類藥物高度敏感[9]。黑占珠和謝仲強(qiáng)對青海果洛州牦牛源大腸桿菌耐藥性調(diào)查發(fā)現(xiàn)對試驗(yàn)藥物最高耐藥率不超過 10.0%[10]。相關(guān)研究也表明，產(chǎn)志賀氏菌毒素大腸桿菌是引起牦牛腹瀉病的主要病原之一[11-12]。近年來，大腸桿菌耐藥性變遷演變的研究在人醫(yī)領(lǐng)域和獸醫(yī)領(lǐng)域都有報(bào)道，結(jié)果均提示大腸桿菌耐藥呈現(xiàn)逐年增強(qiáng)的趨勢[13-14]。然而，對川西北高原牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷和整合子攜帶情況的研究目前還沒有系統(tǒng)的報(bào)道?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】本研究結(jié)合抗菌藥物在川西北高原地區(qū)牦牛疾病防控中的使用情況和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果，于 2009—2016年度對川西北高原地區(qū)散養(yǎng)牦牛、病死和牦牛屠宰場牦牛的胃腸道內(nèi)容物和臟器等進(jìn)行樣本采集和大腸桿菌分離鑒定，分析其耐藥水平和耐藥性變遷規(guī)律，同時(shí)對其整合子攜帶情況進(jìn)行調(diào)查。【擬解決的關(guān)鍵問題】通過對2009—2016年度川西北高原大腸桿菌耐藥性變遷和整合子攜帶情況調(diào)查分析，以期為川西北高原地區(qū)牦牛源大腸桿菌的流行病學(xué)和防治藥物的篩選提供理論依據(jù)，確?？咕幬镌诖ㄎ鞅钡貐^(qū)的應(yīng)用正確合理。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源 大部分牦牛糞便樣本于 2009—2016年采自四川省甘孜藏族自治州和阿壩藏族羌族自治州各縣、鄉(xiāng)、鎮(zhèn)牦牛養(yǎng)殖場和散養(yǎng)牦牛，胃腸道內(nèi)容物和臟器樣本從病死的患病牦?；蛲涝钻笈２杉糠謽颖静勺詮拇ㄎ鞅备咴\(yùn)送到青白江屠宰場的牦牛（具體樣品來源信息見表 1）。樣本采集后運(yùn)送至西南民族大學(xué)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定等相關(guān)試驗(yàn)，大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC25922由西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院獸醫(yī)藥理實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 培養(yǎng)基和生化試劑 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美蘭培養(yǎng)基、蛋白胨大豆肉湯和MH肉湯等購自北京陸橋技術(shù)有限公司；腸桿菌科生化鑒定編碼管（15e）購自杭州天和微生物試劑有限公司；分子生物學(xué)試劑購自寶生物工程（大連）有限公司；整合子整合酶基因擴(kuò)增引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.1.3 抗菌藥物 27個(gè)抗菌藥物原料大多數(shù)購自中國獸藥監(jiān)察所或試劑公司，部分由獸藥企業(yè)提供，主要包括以下幾類：氨基糖苷類8個(gè)（慶大霉素、鏈霉素、妥布霉素、阿米卡星、大觀霉素、新霉素、卡那霉素和安普霉素）、氟喹諾酮類6個(gè)（萘啶酸、沙拉沙星、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星和達(dá)氟沙星）、β-內(nèi)酰胺類4個(gè)（阿莫西林、頭孢曲松、頭孢喹肟和頭孢噻呋）、磺胺類3個(gè)（磺胺嘧啶鈉、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺二甲嘧啶）、酰胺醇類2個(gè)（氯霉素和氟苯尼考）、四環(huán)素類2個(gè)（多西環(huán)素和土霉素）、利福霉素類1個(gè)（利福平）和喹啉類1個(gè)（乙酰甲喹）等。試驗(yàn)藥物根據(jù)其理化性質(zhì)配成 5 120 μg·mL-1或640 μg·mL-1備用，臨用前稀釋至試驗(yàn)用濃度。

1.2 方法

1.2.1 不同樣本來源大腸桿菌的分離和鑒定 參照大腸桿菌常規(guī)分離方法對不同年份采集的牦牛糞便、胃腸道內(nèi)容物和臟器等樣本進(jìn)行處理，采用麥康凱培養(yǎng)基和伊紅美蘭培養(yǎng)基交替培養(yǎng)方法反復(fù)純化，純化菌株利用15e腸桿菌科生化鑒定編碼管對之進(jìn)行生化鑒定。

表1 2009-2016年牦牛源大腸桿菌樣本采集信息表Table 1 Information table of E. coli isolated from yaks between 2009 and 2016

1.2.2 藥物敏感性試驗(yàn) 參照NCCLS（美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)）推薦的微量肉湯稀釋法操作程序?qū)? 908株大腸桿菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，每個(gè)藥物重復(fù)3次，同時(shí)設(shè)立陰性對照和陽性對照[15]。藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果利用 WHONet5.6軟件包進(jìn)行處理和分析。

1.2.3 2009-2016年川西北牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷分析 根據(jù)1.2.2的結(jié)果，分別對2009—2016年不同年度采集的大腸桿菌進(jìn)行耐藥水平統(tǒng)計(jì)和處理，分析不同年份大腸桿菌耐藥性變遷規(guī)律，以比較其耐藥譜型的差異和分析耐藥性變遷與耐藥譜型的相關(guān)性。

1.2.4 2009-2016年川西北牦牛源大腸桿菌整合子攜帶情況調(diào)查分析 參考文獻(xiàn)報(bào)道引物擴(kuò)增Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子整合酶基因[16-17]，對不同年份采集大腸桿菌的Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子攜帶情況進(jìn)行調(diào)查，分析其與耐藥性變遷的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 不同樣本來源大腸桿菌分離情況

從不同年份健康和患病牦牛的糞便、病死和宰殺牦牛胃腸道內(nèi)容物和臟器樣本中共分離到大腸桿菌1 908株（表1，按樣本來源統(tǒng)計(jì)結(jié)果為：健康牦牛糞便樣本來源446株，患病牦牛糞便樣本來源619株，屠宰場牦牛胃腸道內(nèi)容物樣本來源506株，病死牦牛臟器樣本來源337株）。

2.2 2009-2016年川西北牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷分析

1908株牦牛源大腸桿菌耐藥性分析結(jié)果如表2所示，從中可以得出以下結(jié)論：（1）2009—2016各年度分離的牦牛源大腸桿菌對 27個(gè)藥物的耐藥水平表現(xiàn)出逐年增高的趨勢；除了2014—2016年度分離菌株對土霉素的耐藥水平和2015—2016年度分離菌株對3個(gè)磺胺類藥物的耐藥水平超過60.00%外，其他年度分離菌株對其余試驗(yàn)藥物的耐藥水平均低于 60.00%。（2）氨基糖苷類的敏感性分析結(jié)果顯示：各年度分離菌株對妥布霉素和阿米卡星較敏感，其耐藥水平比其余6個(gè)氨基糖苷類藥物都低；分離菌株對鏈霉素和新霉素的耐藥率較高。（3）氟喹諾酮類的敏感性分析結(jié)果顯示：各年度分離菌株對萘啶酸的耐藥率最高，其中2015年度分離菌株的耐藥率達(dá)到為59.48%；各年度分離菌株對其余5個(gè)氟喹諾酮類藥物耐藥率都低于40.00%，且各年度的耐藥率差別不明顯。（4）β-內(nèi)酰胺類的敏感性分析結(jié)果顯示：各年度分離菌株對阿莫西林的耐藥率最高，其中2013和2014年的耐藥率分別高達(dá)54.98%和58.92%，對其余3個(gè)β-內(nèi)酰胺類的敏感性差異不顯著，除2014和2015年度頭孢曲松的耐藥率高于 40.00%外，其余各年度的耐藥率均在40.00%以下。（5）四環(huán)素類的敏感性分析結(jié)果顯示：各年度分離菌株對多西環(huán)素和土霉素的敏感性差別不明顯，對多西環(huán)素的耐藥水平比土霉素低，試驗(yàn)結(jié)果也表明從2013年開始，川西北牦牛源大腸桿菌對四環(huán)素類藥物的耐藥率已高達(dá)40.00%以上。（6）酰胺醇類的敏感性分析結(jié)果顯示：各年度分離菌株對氯霉素和氟苯尼考的敏感性差別不大。盡管氯霉素在獸醫(yī)臨床禁止使用，但2014和2016年度分離菌株對氯霉素的耐藥水平均超過50.00%，應(yīng)引起足夠的重視。（7）磺胺類的敏感性分析結(jié)果顯示：各年度分離菌株對磺胺嘧啶鈉的耐藥水平比磺胺間甲氧嘧啶和磺胺二甲嘧啶低，磺胺間甲氧嘧啶和磺胺二甲嘧啶的耐藥水平差別不大。值得注意的是，從2015年度開始，分離菌株對3個(gè)磺胺類藥物的耐藥率均超過60.00%。（8）利福霉素類和喹啉類的敏感性分析結(jié)果顯示：各年度分離菌株對兩個(gè)藥物的敏感性較高，各年度的耐藥率均在 30.00%以下，對乙酰甲喹的敏感性高于利福平。

2.3 2009-2016年川西北牦牛源大腸桿菌整合子攜帶情況調(diào)查分析

采用常規(guī) PCR技術(shù)對Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子的整合酶基因進(jìn)行擴(kuò)增，分析不同年份分離菌株的整合子攜帶情況。以菌株Y20130606為例，其擴(kuò)增結(jié)果如圖1所示，其余菌株的Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子的整合酶擴(kuò)增片段大小均與Y20130606一致。 2009—2016年川西北牦牛源大腸桿菌整合子攜帶情況調(diào)查分析結(jié)果見表3：1 908株細(xì)菌中，1 120株大腸桿菌不攜帶任何種類的整合子，占58.70%（1120/1908），其余 788株攜帶至少一種類型整合子，占 41.30%（788/1908）。從攜帶整合子類型統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果來看，攜帶Ⅰ類整合子的菌株共有 582株，占 30.50%（582/1908），攜帶Ⅱ類整合子的菌株共有346株，占18.13%（346/1908），同時(shí)攜帶Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子的菌株共有140株，占7.34%（140/1908）。不同年份統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示：分離菌株中Ⅰ類整合子攜帶率最高的年份是 2016年，Ⅰ類整合子攜帶率為40.06%（127/317）；Ⅱ類整合子攜帶率最高的年份是2011年，Ⅱ類整合子攜帶率為26.94%（52/193）；2014年分離菌株中，同時(shí)攜帶Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子的菌株有32株，攜帶率為10.77%（32/297），高于其他年份。

圖1 Y20130606整合子PCR擴(kuò)增Fig. 1 PCR amplification of Y20130606 integrons

3 討論

3.1 川西北牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷分析

?

本研究對川西北牦牛源大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)，樣品涉及健康和患病牦牛的糞便、病死和宰殺牦牛的胃腸道內(nèi)容物和臟器樣本，從中共分離到1 908株。盡管本研究的藥物敏感性結(jié)果表明大多數(shù)試驗(yàn)藥物的耐藥性變遷表現(xiàn)出逐年上升的趨勢，但仍存在的一定的不足，分析本試驗(yàn)?zāi)退幮宰冞w的影響因素主要有以下兩點(diǎn)：（1）試驗(yàn)菌株數(shù)量：試驗(yàn)中對2009—2016年度的大腸桿菌進(jìn)行耐藥性變遷演變分析，不同年份的菌株數(shù)量不同（其中2009年134株，2010年207株，2011年193株，2012年257株，2013年271株，2014年297株，2015年232株，2016年317株），樣本數(shù)量的差異會(huì)造成耐藥率有一定的偏差。盡管各年度的菌株數(shù)量均在100株以上，但筆者認(rèn)為從統(tǒng)計(jì)分析的角度來講，試驗(yàn)菌株數(shù)量越大其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義越有說服力，各年份之間菌株數(shù)量的相差越小越能保證各年度菌株耐藥性變遷的差異越小。在各年度大腸桿菌的分離鑒定過程中，雖然采樣樣本差別不大，但各年度的大腸桿菌分離率也不同，這可能與樣本自身特點(diǎn)有一定關(guān)系，比如糞便樣本幾乎都能保證分離到大腸桿菌，而其他樣本未必一定能分離到大腸桿菌。（2）菌株來源及其致病性：本研究中各年度分離菌株對相關(guān)藥物的耐藥水平均遠(yuǎn)低于相關(guān)報(bào)道[4]，其原因是樣本來源較廣，而文獻(xiàn)報(bào)道的樣本僅采自患病動(dòng)物，且動(dòng)物的種類也不同。各年度分離菌株對慶大霉素、新霉素、土霉素和恩諾沙星的耐藥水平均比王紅寧[7-8]報(bào)道的結(jié)果要高，而對阿莫西林和鏈霉素等耐藥率要低。與貢嘎等報(bào)道結(jié)果相比，除了卡那霉素的耐藥水平相差較小外，各年度分離菌株對阿莫西林、四環(huán)素、多西環(huán)素、鏈霉素、慶大霉素、阿米卡星和新霉素的耐藥水平均低于報(bào)道結(jié)果[9]。此外，牦牛用藥習(xí)慣不同、樣本的采集數(shù)量和動(dòng)物的健康狀況對菌株的耐藥水平也有一定的影響，這可能也是本研究的耐藥率高于芮亞培等的報(bào)道結(jié)果的原因[18-19]，而且耐藥性和毒力基因在不同菌株之間的傳播，也可能導(dǎo)致在抗生素壓力下，致病性菌株的耐藥性和毒力發(fā)生改變[4,20]。

表3 2009-2016年牦牛源大腸桿菌整合子攜帶情況表Table 3 Integron-carrying of E. coli isolated from yaks between 2009 and 2016

3.2 川西北牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷與整合子攜帶情況相關(guān)性分析

對不同年份采集的大腸桿菌耐藥水平進(jìn)行比較分析，分離菌株對27個(gè)試驗(yàn)藥物的耐藥性變遷表現(xiàn)出逐年增加的趨勢（表 3）。不同年份的分離菌株整合子攜帶率雖未表現(xiàn)出線性遞增的變化趨勢，但從一定程度也反映出耐藥性的逐年增加導(dǎo)致整合子的攜帶率增加。對試驗(yàn)菌株進(jìn)行整合子攜帶情況分析的結(jié)果表明，788株大腸桿菌攜帶至少一種類型整合子，占41.30%（788/1908）。其中Ⅰ類整合子的檢出率和同時(shí)攜帶Ⅰ類整合子和Ⅱ類整合子的檢出率均比相關(guān)報(bào)道的要低[17,21-23]。而本研究中1 908株大腸桿菌中Ⅱ類整合子的檢出率為 18.13%，高于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[24-28]。可以推測分離的牦牛源大腸桿菌Ⅱ類整合子攜帶率高可能與大腸桿菌生物被膜的形成有關(guān)，其整合子攜帶情況與生物被膜形成之間是否具有一定相關(guān)性還有待于進(jìn)一步研究。

3.3 川西北牦牛源大腸桿菌多重耐藥性分析及其應(yīng)對策略

在試驗(yàn)中筆者試圖對不同年份分離的實(shí)驗(yàn)菌株進(jìn)行優(yōu)勢耐藥譜型分析，但結(jié)果顯示耐藥譜型較為分散，分離菌株對27個(gè)試驗(yàn)藥物均表現(xiàn)出一定的耐藥性，且出現(xiàn)多重耐藥菌株。多重耐藥菌株的出現(xiàn)，與整合子的攜帶有一定的關(guān)系，整合子攜帶的基因盒元件能夠在整合酶的作用下將不同的耐藥基因整合，使得基因盒的大小和耐藥基因的種類有一定的差異。此外，整合子作為細(xì)菌的可移動(dòng)元件，能夠使耐藥基因在不同菌株個(gè)體之間進(jìn)行傳播，尤其是抗生素壓力下大腸桿菌生物被膜的形成導(dǎo)致耐藥性的廣泛傳遞和感染的遷延不愈，給臨床治療帶來一定的困難，必須引起高度的重視[20]。川西北牦牛源大腸桿菌耐藥性變遷規(guī)律，能夠?yàn)楹罄m(xù)研究中其多重耐藥性與生物被膜表型和毒力譜型之間的相關(guān)性提供參考。

革蘭氏陰性菌尤其是大腸桿菌、銅綠假單孢桿菌和鮑曼不動(dòng)桿菌的多重耐藥性問題已引起全球的關(guān)注[29-31]。針對細(xì)菌耐藥性廣泛傳播的現(xiàn)狀，采用植物藥物提取物來應(yīng)對耐藥性引起傳染病肆虐傳播和遷延不愈的棘手問題提供了一個(gè)的新的思路和方法[32-34]。此外，基于抗菌藥物作用機(jī)制的化學(xué)合成方法來尋求新構(gòu)型化合物也是解決細(xì)菌耐藥性問題的有效途徑之一[35]。這些研究內(nèi)容提示，在后續(xù)研究工作中，可以結(jié)合川西北獨(dú)特的藏獸藥資源優(yōu)勢，從中尋求對牦牛常見病和多發(fā)病起到防治作用的有效成分或藥物組合，不僅能夠?yàn)椴孬F藥的現(xiàn)代藥理學(xué)研究及其在藏區(qū)獸醫(yī)臨床的廣泛應(yīng)用開辟新的空間，而且對藏獸醫(yī)文化的傳承和保護(hù)也有一定的促進(jìn)作用。

4 結(jié)論

川西北高原地區(qū)分離的牦牛源大腸桿菌表現(xiàn)出一定的演變規(guī)律，分離菌株對試驗(yàn)藥物的耐藥水平呈現(xiàn)逐年增加的趨勢。此外，整合子攜帶情況分析結(jié)果也預(yù)示著耐藥性的增加導(dǎo)致多重耐藥性菌株的出現(xiàn)，耐藥性變遷和整合子攜帶存在一定的相關(guān)性。因此后續(xù)研究應(yīng)重點(diǎn)探討牦牛源多重耐藥大腸桿菌耐藥譜型與整合子攜帶相關(guān)性，從分子水平更加深入分析整合子-基因盒系統(tǒng)在川西北牦牛源細(xì)菌耐藥性傳播過程中的作用機(jī)理。同時(shí)，結(jié)合川西北藏區(qū)廣袤的藏獸藥資源優(yōu)勢，從中篩選針對牦牛常見病和多發(fā)病有效的主要化學(xué)成分或藥物組合，不僅為牦牛的健康養(yǎng)殖保駕護(hù)航提供一條嶄新的防治途徑和方法，而且能夠?yàn)椴孬F藥的推廣和發(fā)揚(yáng)光大提供更為廣闊的發(fā)展空間。

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（責(zé)任編輯 林鑒非）

Vicissitude of Drug Resistance and Integron-Carrying of Escherichia coli Isolated from Yak Between 2009 and 2016 in Northwest Sichuan Plateau

CHEN ChaoXi, HE DongMei, TANG Cheng
(College of Life Science and Technology, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041)

【Objective】Aiming at the trend of drug resistance of Escherichia coli increased year by year and the problem of antibacterial agents for diseases control and prevention in yak (Bos grunniens), 1 908 Escherichia coli isolates from feces of free-ranging yaks (including the healthy and ill yaks), gastrointestinal contents (slaughtered yaks) and viscera samples (dead yaks) were chosen for antimicrobial susceptibility testing to 27 antibacterial agents and integrase genes detection between 2009 and 2016 in this study. The results of the study will be helpful to investigation of the vicissitude of drug resistance and integron-carrying of Escherichia coli isolated from yak and provide a reference for safe medication for yak in northwest Sichuanplateau.【Method】Broth microdilution method and WHONet5.6 software were used, respectively, for minimum inhibitory concentration (MIC) determination according to the guidelines of Clinical and Laboratory Standards Institute (NCCLS) and the experimental data statistical analysis. Class 1 and class 2 integrase genes were amplified using conventional PCR for the detection of integron-carrying of class 1 and class 2 integrons. 【Result】 The results showed that: the drug resistance level to 27 antibacterial agents of the strains isolated between 2009 and 2016 kept a rising trend year by year. Except that the drug resistance level to oxytetracycline of the strains isolated between 2014 and 2016 and the drug resistance level to sulfonamides of the strains isolated between 2015 and 2016 were over 60.00%, all the other strains isolated in different years revealed lower drug resistance level to other 23 antibacterial agents and the drug resistance level to mequindox and rifampicin were lower than 30.00%, and the drug resistance rate to mequindox was lower than rifampicin between 2009 and 2016. Integron-carrying rate of Escherichia coli isolated in different years was different, 774 isolates carried at least one type of integron, accounting for 41.30% (788/1908) and 140 isolates carried both class 1 and class 2 integron, accounting for 7.34% (140/1908). Of which, 582 isolates carried class 1 integron and 346 isolates carried class 2 integron, accounting for 30.50% (582/1908) and 18.13% (346/1908), respectively.【Conclusion】The results of vicissitude of drug resistance and integron-carrying of Escherichia coli isolated from yak between 2009 and 2016 in northwest Sichuan plateau could provide a theoretical basis and experimental data for epidemiology study and screening for preventive drugs and ensure the reasonable application of antibacterial drugs in northwest Sichuan plateau.

Northwest Sichuan plateau; yak; vicissitude of drug resistance; integrons

2016-08-08；接受日期：2017-01-22

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2016YFD0500907）、四川省科技培訓(xùn)計(jì)劃項(xiàng)目（2016KZ0007）、西南民族大學(xué)中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金青年教師基金項(xiàng)目（2014NZYQN40）

聯(lián)系方式：陳朝喜，Tel：13980060375；E-mail：chaoxi8832 @163.com。通信作者湯承，Tel：028-85528276；E-mail：tangcheng101 @163.com