50例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌聲像特征與PTEN、p53、VEGF表達(dá)的相關(guān)性研究①

鄭洪平，陳金鳳，張雅萍，劉靜華，裴元元，溫麗娟，魏鳳香

(深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院,廣東 深圳 518172)

50例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌聲像特征與PTEN、p53、VEGF表達(dá)的相關(guān)性研究①

鄭洪平，陳金鳳，張雅萍，劉靜華，裴元元，溫麗娟，魏鳳香

(深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院,廣東 深圳 518172)

目的：研究浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的聲像特征與PTEN、p53 、VEGF三種標(biāo)志物表達(dá)之間的關(guān)系。方法：回顧性分析經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)的浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌50例(共50個(gè)腫塊)，觀察腫塊的二維及彩色聲像圖特征，用免疫組化方法檢測(cè)腫塊標(biāo)本PTEN、p53 和VEGF表達(dá)情況，并分析腫塊聲像圖特征與PTEN、p53 和VEGF表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果：(1)邊緣毛刺征、腫塊內(nèi)回聲不均勻，微小鈣化、腫塊血供豐富，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等聲像圖特征與PTEN陽(yáng)性表達(dá)率減低、p53陽(yáng)性表達(dá)率增高、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率增高相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(2)腫塊大小、腫塊形態(tài)(縱橫比)與PTEN低表達(dá)、p53陽(yáng)性表達(dá)、VEGF陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)性分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：乳腺癌的超聲表現(xiàn)與分子生物學(xué)之間存在一定的相關(guān)性，聲像圖特征可作為對(duì)病灶預(yù)后評(píng)估的重要依據(jù)之一。

乳腺癌；超聲；分子生物學(xué)

2011年美國(guó)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，乳腺癌發(fā)病率為女性惡性腫瘤之首[1],國(guó)內(nèi)的統(tǒng)計(jì)資料也顯示乳腺癌發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì)(每年增加約2.5%)[2],廣大女性的身心健康遭受嚴(yán)重威脅。目前超聲檢查方法已成為影像學(xué)檢查乳腺疾病的重要方法，特征性的超聲表現(xiàn)可以對(duì)乳腺腫塊的良惡性進(jìn)行鑒別。乳腺癌的形成和進(jìn)展是多基因作用的結(jié)果。研究表明PTEN、p53 和VEGF三種標(biāo)志物與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，本研究將乳腺癌腫塊超聲特征與癌基因表達(dá)情況相結(jié)合，探討二者內(nèi)在聯(lián)系，以期通過(guò)乳腺癌聲像特點(diǎn)為臨床評(píng)估腫瘤預(yù)后提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2014-01～2016-03在深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院手術(shù)并確診為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，并且術(shù)后均進(jìn)行免疫組化的50例患者共50個(gè)腫塊，患者均為女性，均為單側(cè)發(fā)病 ，患者年齡24～75歲，平均48.3歲，腫塊大小1.6cm×1.7cm×1.1cm～6.8cm×6.2cm×1.5cm，術(shù)前均未接受放化療等治療。

1.2 超聲檢查方法

主要超聲診斷儀：采用西門子S2000彩色多普勒超聲診斷儀，線陣探頭頻率4～9MHz，選擇乳腺檢查條件，使圖像清晰顯示，觀察腫塊大小、縱橫比、邊緣毛刺征、內(nèi)部回聲、有無(wú)微鈣化、血供特點(diǎn)及有無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況。

1.3 病理檢查

所收集的乳腺癌腫塊病理結(jié)果均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。由有經(jīng)驗(yàn)的病理學(xué)醫(yī)師作出。

1.4 免疫組化檢測(cè)

標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋后4μm連續(xù)切片，采用SP二步法進(jìn)行免疫組化染色后進(jìn)行光鏡觀察。免疫組化SP二步法染色方法和步驟均嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行。試劑盒由福州邁新公司生產(chǎn)。陽(yáng)性結(jié)果判定：先按著色深淺評(píng)分：0分為不著色，1分為染色呈淡黃色，2分為染色呈棕黃色，3分為染色呈棕褐色為；再按染色細(xì)胞占有的百分?jǐn)?shù)評(píng)分： 0分為無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，1分為1%～10%，2分為11%～50%，3分為51%～80%，4分為81%～100%。將前兩項(xiàng)得分的乘積作為該病例得分，乘積在3分及3分以上定為陽(yáng)性(記做+)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)各組資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05認(rèn)為差異具有顯著性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 主要超聲表現(xiàn)

50例浸潤(rùn)性乳腺癌腫塊，腫塊直徑<2cm的占42%(21/50)，>2cm的占58%(29/50)，腫塊縱橫比>1的占18%(9/50)；有毛刺征的占62%(31/50)；內(nèi)部回聲不均的占86%(43/50)；有微小鈣化的占38%(19/50)；有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的占26%(13/50)；2～3級(jí)血供的占78%(39/50)。

2.2 乳腺癌超聲征象與PTEN、p53、VEGF表達(dá)的關(guān)系

見(jiàn)表1。有毛刺組與無(wú)毛刺組PTEN、p53、VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率分別為19.4%、83.9%、71.0%及63.2%、36.8%、26.3%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；內(nèi)部回聲均勻組與不均勻組中PTEN、p53、VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率分別為85.7%、14.3%、28.6%及27.9%、74.4%、58.1%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；有微小鈣化組與無(wú)微小鈣化組中PTEN、p53、VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率分別為10.5%、89.5%、73.7%及51.6%、51.6%、41.9%，兩組差異

有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中PTEN、p53 、VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率分別為7.7%、92.3%、92.3%及45.9%、56.8%、51.4%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；血供0～1級(jí)組及血供2～3級(jí)組中PTEN、p53 、VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率分別為72.7%、36.4%、27.3%及25.6%、74.4%、61.5%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腫塊<2cm組及腫塊>2cm組兩組中PTEN、p53 、VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率分別為33.3%、66.7%、52.4%及37.9%、65.5%、55.2%，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；腫塊縱橫比>1及縱橫比<1兩組中PTEN、p53 、VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率分別為55.6%、66.7%、44.4%及31.7%、65.9%、56.1%，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 乳腺癌超聲征象與PTEN、p53 、VEGF表達(dá)的關(guān)系

3 討論

浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌占所有乳腺癌分類中的70%，發(fā)病率最高，具有明顯的惡性超聲征象，即腫塊邊緣毛刺征、內(nèi)部回聲分布不均、微小鈣化征、血供豐富、伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，尤其是邊緣毛刺征尤為重要，是超聲診斷乳腺癌的經(jīng)典指標(biāo)，表明腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的特性，本組50例病例中具有邊緣毛刺征者有31例，占62%，遠(yuǎn)高于邊緣無(wú)毛刺征組(19例，占38%)。Dendorfer等[3]學(xué)者認(rèn)為乳癌內(nèi)部回聲以分布不均勻?yàn)橹鳎啾憩F(xiàn)為較雜亂的低回聲，若發(fā)生出血、壞死可見(jiàn)形態(tài)不規(guī)則的液性暗區(qū)，表明腫瘤生長(zhǎng)快速，血供相對(duì)不足所致，本組50例腫塊中回聲分布不均勻的43例(占86%)，占絕大部分。微小鈣化是指<1mm的強(qiáng)回聲點(diǎn)，多呈簇狀分布，是惡性腫瘤較可靠的指征,本組病例微小鈣化陽(yáng)性率為38%,陽(yáng)性率雖然不高，但一旦出現(xiàn)提示惡性可能。乳腺惡性腫塊的血流信號(hào)明顯多于良性腫塊，血管分布多位于腫塊的中央，而且走形彎曲，粗細(xì)不均，分布雜亂，本研究中腫塊2～3級(jí)血流者為39例(占78%)，明顯高于0～1級(jí)血流者(11例，占22%)。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌預(yù)后的重要因素，直接關(guān)系到外科手術(shù)方式的選擇及手術(shù)范圍的大小。本組病50例腫塊中發(fā)生腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有13例(占26%)。

PTEN是一種抑癌基因,在正常情況下具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移、分化等多種效應(yīng)[4]。乳腺癌的發(fā)生及進(jìn)展與PTEN基因的失活或基因突變密切相關(guān)，Lebok等[5]對(duì)2197例乳腺癌組織芯片進(jìn)行熒光原位雜交PTEN基因分析，結(jié)果顯示PTEN缺失發(fā)生在部分乳腺癌中且與腫瘤的惡性行為呈現(xiàn)相關(guān)性。Luo等[6]綜合PubMed、EMBASE等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行meta分析，結(jié)果顯示PTEN啟動(dòng)子甲基化阻礙基因表達(dá)，與乳腺癌高密切相關(guān)，可作為有價(jià)值的生物標(biāo)志物診斷乳腺癌。可見(jiàn)，PTEN基因的缺失或蛋白表達(dá)水平的下降, 可作為乳腺癌惡性程度高及預(yù)后差的觀察指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示PTEN在50例乳癌中陽(yáng)性表達(dá)率為36%(18/50), 與Vitolo等[7]研究報(bào)道一致。聲像圖表現(xiàn)為邊緣毛刺、內(nèi)部回聲不均勻、有微小鈣化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血供豐富等征象與PTEN表達(dá)率減低相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此可見(jiàn)上述超聲征象可作為乳腺癌惡性程度高，預(yù)后差的影像學(xué)依據(jù)。

p53基因存在兩種類型：野生型和突變型，野生型p53是一種抑制腫瘤基因[8]，突變型p53基因可與蛋白激酶等因子協(xié)同作用，通過(guò)刺激腫瘤新生血管生成而具有腫瘤基因的特性,突變型p53基因在臨床上可通過(guò)免疫組化的方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)到p53蛋白陽(yáng)性即可認(rèn)為存在p53 基因突變[9]。avidoff[10]等研究表明，在乳腺癌組織中p53蛋白的陽(yáng)性率為20%～60%，p53異常表達(dá)與和病程晚期、腫瘤轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，從而證明p53蛋白過(guò)度表達(dá)是乳腺癌預(yù)后不良的指標(biāo)之一。有研究[11]顯示，p53表達(dá)異常的腫瘤表現(xiàn)為惡性程度高，向周圍組織侵浸潤(rùn)能力強(qiáng)、遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移早等特性，且對(duì)放化療均不敏感，由此可見(jiàn)p53異常表達(dá)的腫瘤預(yù)后極差。上述多項(xiàng)研究均表明p53蛋白可作為腫瘤惡性程度高，預(yù)后極差的指標(biāo)之一。本組研究中p53的陽(yáng)性率為66%(33/50)，與avidoff等的研究結(jié)果一致，在有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、邊緣有毛刺征組、內(nèi)部回聲不均勻組、有微小鈣化組、血供2～3級(jí)組中p53表達(dá)的陽(yáng)性率明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此上述超聲征象可作為乳腺癌侵襲性強(qiáng)，預(yù)后差的影像學(xué)參考。

VEGF即血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，能正性刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，促進(jìn)新生毛細(xì)血管網(wǎng)的建立[12]。腫瘤的血管、淋巴管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵，VEGF參與了腫瘤的新生血管生成和淋巴管的形成，腫瘤血管增多，為腫瘤生長(zhǎng)提供更多的營(yíng)養(yǎng)支持，淋巴管的形成更有力于腫瘤細(xì)胞到達(dá)淋巴結(jié)而完成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此VEGF對(duì)乳腺癌腫塊的迅速增長(zhǎng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等具有極大的促進(jìn)作用。本研究結(jié)果顯示在50例乳腺癌中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為54%(27/50)，有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)92.3%，遠(yuǎn)高于較無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組病；血供2～3級(jí)組中VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率61.5%，遠(yuǎn)高于血供0～1級(jí)組病例；邊緣有毛刺、內(nèi)部回聲不均勻、微小鈣化組VEGF陽(yáng)性表達(dá)率高亦明顯增高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果再次說(shuō)明上述超聲征象可作為乳腺癌生長(zhǎng)迅速，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高的影像學(xué)參考。

綜上所述，腫塊的邊緣毛刺征，內(nèi)部回聲不均勻，微鈣化，血供豐富、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等征象與PTEN、p53、VEGF異常表達(dá)相關(guān)。乳腺癌的超聲特征在一定程度能夠反映出乳腺癌的分子生物學(xué)特性。因此上述超聲表現(xiàn)可作為評(píng)估乳腺癌不良的參考依據(jù)之一。由于本樣本量較少(50例)，得出的結(jié)果可能存在一定的偏差，在今后的研究工作中應(yīng)擴(kuò)大樣本量，繼續(xù)深入研究。

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深圳市龍崗區(qū)科創(chuàng)委資助項(xiàng)目,編號(hào)：LG20140606124437。

鄭洪平(1975～)女，黑龍江佳木斯人，副主任醫(yī)師。

魏鳳香(1974～)女，黑龍江佳木斯人，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:weifengxiang1974@163.com。

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1008-0104(2017)02-0061-03

2016-12-04)