超高效液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中的金剛烷胺

張振宇 李 明

（濟源市畜產品質量監測檢驗中心，河南濟源 459000）

超高效液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中的金剛烷胺

張振宇 李 明

（濟源市畜產品質量監測檢驗中心，河南濟源 459000）

金剛烷胺又叫三環癸胺，是廣泛用于人類流感治療的抗病毒藥物，但是將它用于畜禽，不僅導致畜禽產品藥物殘留、動物機體產生免疫抑制和耐藥性等問題，還可影響人用抗病毒藥物的有效性。2005年我國農業部第560號公告規定金剛烷胺為禁用獸藥。

串聯質譜法；雞肉；金剛烷胺

目前我國測定雞肉中金剛烷胺的相關文獻較少，國家和行業標準也是空白，給此類藥物的監管帶來不便。而雞肉組織中殘留的金剛烷胺含量低，基質干擾大，急需有效的檢測技術，目前，檢測金剛烷胺有液相色譜法、氣相色譜-串聯質譜法、液相色譜-串聯質譜法。液相色譜法靈敏度較低且無法測定結構信息；氣相色譜-串聯質譜法需衍生后氣化，樣品處理方法復雜。液相色譜-串聯質譜法可檢測待測物的結構信息，具有較高的靈敏度，是測定金剛烷胺的理想方法。

本文利用1%乙酸乙腈作提取液，濃縮后用20%乙腈溶液溶解，再用正己烷除脂，高速離心后過PSA濾膜，用液相色譜-串聯質譜法測定，同位素內標法定量。該方法簡便快速，可節省檢測時間和成本。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

UPLC-Xevo TQ MS型超高效液相色譜-串聯質譜儀（美國Waters公司）；ULUP超純水系統（成都優普公司）；PSA微孔濾膜（0.22μm，Agela公司）超聲波清洗器（新苗儀器有限公司）；高速冷凍離心機（力康公司）。

金剛烷胺標準品（中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸金剛烷胺-D15（加拿大CDN公司）；甲酸（色譜級，美國TEDIA公司）；乙腈、甲醇（色譜純，美國Fisher公司）。

1.2 標準溶液的配制

準確稱取金剛烷胺10 mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得質量濃度為1 mg/ml的標準儲備液，準確稱取金剛烷胺-D151 mg于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得質量濃度為0.1 mg/ml的標準儲備液，于-18 ℃下避光存儲。

1.3 色譜質譜條件

色譜柱：Acquity UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μ m）。流動相A為乙腈，流動相B為0.1%甲酸溶液。柱溫40 ℃；進樣體積10.0 μl。質譜采用電噴霧正離子模式電離，多反應監測（MRM）模式進行檢測。

梯度洗脫程序

金剛烷胺特征離子參考質譜條件

1.4 樣品提取和凈化

稱取試料2.00g，置于50ml離心管內，加適量金剛烷胺-D15內標溶液，再加無水硫酸鈉3g，再加入1%乙酸乙腈10ml，渦旋1min后，震蕩提取10min。8000r/min離心8min，取5mL上清液于50℃下氮氣吹干。

加入20%乙腈溶液1.0mL，充分渦旋溶解，再加入20%乙腈溶液飽和的正己烷2ml，充分渦旋混合，然后室溫下靜置5min。吸取下層溶液0.5ml，轉移至1.5ml塑料離心管內，12000r/min離心5min，取下層清液適量，過0.22μmPSA濾膜后供超高效液相色譜-串聯質譜儀測定。

2 結果與討論

2.1 提取和凈化條件的選擇和優化

2·1·1 提取溶劑的選擇

本實驗選用乙腈、1%乙酸乙腈、甲醇、1%乙酸甲醇作為提取溶劑，進行了提取效率（回收率和信噪比）的比較，發現1%乙酸乙腈提取溶劑的提取效率最好，可以達到本方法的要求。

2·1·2 凈化方法的選擇

為了簡化樣品凈化操作，本方法使用含有PSA吸附劑的針式過濾器，該針式過濾器的引用可以簡化樣品凈化操作，只需一步操作即可將凈化和濾膜過濾整合完成，從而可以大幅提高樣品的前處理效率。

2.2 線性范圍、準確度、精密度及靈敏度

準確量取適量的金剛烷胺標準工作液，用甲醇溶液稀釋成金剛烷胺濃度分別為1、2、5、10、20、50μg/L，上高效液相色譜-串聯質譜法測定。按其所得峰面積的平均值與對應的金剛烷胺溶液濃度作標準曲線，相關系數為R2= 0.9984。

對于雞肉樣品，由于基質效應較強，因此采用相應的空白基質溶液稀釋金剛烷胺標準工作液，分別制成上述系列基質標準工作溶液，按同樣的方法進樣分析和繪制金剛烷胺在1～50.00 μg/L范圍內的標準曲線，相關系數為R2= 0.9994。

2.3 方法的準確度及精密度

本標準采用標準添加法，在雞肉中添加金剛烷胺三個添加濃度分別為0.3、1、2、10μg/kg的回收率測定，每個濃度5個樣品平行，計算樣品回收率和相對標準偏差。

金剛烷胺添加回收率實驗結果

2.4 方法的靈敏度

在空白樣品中添加一定量的金剛烷胺。按照提取凈化方法進行處理后，經過高效液相色譜-串聯質譜法檢測，當金剛烷胺添加濃度為0.3 μg/kg時，其信噪比在6左右，高于檢測限所需的信噪比為3的要求，因此方法的檢測限為0.3 μg/kg；當金剛烷胺添加濃度為1 μg/kg時，每種基質中其信噪比均大于10，因此方法的定量限為1 μg/kg。

3 結論

基于超高效液相色譜-串聯質譜技術，建立了一種快速、有效的雞肉中金剛烷胺的檢測方法，獲得了滿意的分離效果和檢測靈敏度。回收率、精密度和定量限均滿足殘留分析的要求。該檢測方法可節省人力、時間和經濟成本，提高了檢測效率。

[1] 云環，崔鳳云，嚴華，等.超高效液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中的利巴韋林和金剛烷胺[J].色譜，2013，31（8）：724-728.