水通道蛋白1在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)情況分析

吳美富 王燕(通訊作者)

100191北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

水通道蛋白1在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)情況分析

吳美富 王燕(通訊作者)

100191北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

目的：探討妊娠期高血壓患者胎盤組織中水通道蛋白1的表達(dá)情況。方法：收治妊娠期高血壓患者60例為研究組，以同期正常足月剖宮產(chǎn)孕婦60例為對(duì)照組。結(jié)果：各組孕婦胎盤組織中均有AQP1的表達(dá)；AQP1陽(yáng)性表達(dá)率：重度子癇前期組＞輕度子癇前期組＞妊娠期高血壓組＞對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)論：AQP1在胎盤組織中的表達(dá)與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生及病情輕重程度有關(guān)。

水通道蛋白1；胎盤；高血壓；妊娠期

妊娠期高血壓是妊娠期特有的并發(fā)癥，常發(fā)生在妊娠20周后，孕婦出現(xiàn)高血壓、蛋白尿、水腫，嚴(yán)重者出現(xiàn)以溶血(H)、肝酶升高(EL)和血小板減少(LP)為特點(diǎn)的HELLP綜合征，這是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒死亡的重要原因[1]。水通道蛋白1(AQP1)是水通道蛋白(AQPs)家族中唯一在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的蛋白，參與跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)水。有學(xué)者認(rèn)為胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞、胎膜的羊膜上皮細(xì)胞及平滑絨毛膜的滋養(yǎng)細(xì)胞是表達(dá)AQP1的主要細(xì)胞[2]。劉慧姝等運(yùn)用RT-PCR法、Western印跡和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)的結(jié)果與上述結(jié)果一致[3]，并提示AQP1在胎盤和胎膜中的表達(dá)對(duì)母胎液體交換及羊水平衡發(fā)揮重要的作用。目前關(guān)于AQP1與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性研究，國(guó)內(nèi)外只有少量報(bào)道。Aralla等認(rèn)為AQP1在胎盤和胎膜組織中的表達(dá)水平可能是影響妊娠期高血壓病情的因素之一[4]，可能在妊娠期高血壓的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮作用。本研究通過(guò)分析、比較妊娠期高血壓產(chǎn)婦與正常妊娠產(chǎn)婦的胎盤組織中AQP1的表達(dá)情況，探討其與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系。

資料與方法

納入標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)翁ァ⒃袐D無(wú)煙酒嗜好、無(wú)其他妊娠合并癥(研究組患妊娠期高血壓疾病)。排除孕前急慢性病史者。且此次妊娠無(wú)藥物服用史及縮宮素引產(chǎn)史。研究組：選取2013年1月-2014年1月在北京大興部分醫(yī)院產(chǎn)科定期產(chǎn)檢檢出患有妊娠期高血壓疾病的孕婦，且最終在該院產(chǎn)科住院，經(jīng)解痙治療后病情控制仍不滿意，最終行剖宮產(chǎn)分娩的產(chǎn)婦60例作為研究組，其中妊娠期高血壓21例、重度子癇前期20例、輕度子癇前期19例。依據(jù)《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版中妊娠期高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期高血壓：血壓≥140/90 mmHg，妊娠期首次出現(xiàn)，并于產(chǎn)后12周血壓恢復(fù)正常；尿蛋白(-)；可伴有上腹部不適或血小板減少，產(chǎn)后方可確診。②重度子癇前期：血壓≥160/110 mmHg；尿蛋白≥2.0 g/24 h或(++)；血肌酐＞106 μmol/L；血小板＜100×109/L；微血管病性溶血(血LDH升高)；血清ALT或AST升高；持續(xù)頭痛、其他腦神經(jīng)或視覺(jué)障礙；持續(xù)性上腹不適。③輕度子癇前期：孕20周后出現(xiàn)血壓≥140/90 mmHg；尿蛋白≥300 mg/24 h或(+)；可伴有上腹不適、頭痛等癥狀。對(duì)照組：選取同期正常足月妊娠，因頭盆不稱、漏斗骨盆、胎兒窘迫等因素行剖宮產(chǎn)分娩的產(chǎn)婦，并經(jīng)產(chǎn)婦和家屬知情同意，納入60例為對(duì)照組。

標(biāo)本采集：在產(chǎn)婦胎盤娩出后30 min內(nèi)剪取胎盤組織，應(yīng)避開(kāi)梗死、出血及鈣化區(qū)，生理鹽水漂洗去除血液，10%的中性福爾馬林固定24～48 h以上，石蠟包埋用于免疫組化檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)方法：采用免疫組化SP法對(duì)胎盤組織中的AQP1的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，一抗為濃縮型兔抗人AQP1多克隆抗體。切片脫蠟入水，組織抗原微波修復(fù)，先中高火7 min，停3 min，再中高火7 min，停5 min；PBS 5 min，2次；3%H2O2阻斷過(guò)氧化物酶活性10 min；PBS 3 min，3次；用正常山羊血清于室溫下孵育10 min；相應(yīng)的一抗4℃過(guò)夜，PBS 5 min，3次；生物素標(biāo)記二抗室溫孵育30 min，PBS 3 min，3次；DAB顯色，顯微鏡觀察，水洗終止；蘇木素復(fù)染1 min；梯度酒精脫水各3 min；透明二甲苯各5 min；中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。

結(jié)果判定：評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照Fromowitz等的綜合計(jì)分法進(jìn)行分析，細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)無(wú)著色或與背景顏色一致的為陰性細(xì)胞，被染呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：深棕褐色3分，棕褐色2分，淺棕褐色1分，不著色0分。每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)視野，高倍鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：＞50%為3分，26%～49%為2分，6%～25%為1分，＜5%為0分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和強(qiáng)度相加得出的結(jié)果：0～1分為(-)，2.0分為(+)，3～4分為(++)，5～6分為(+++)，將(+)、(++)、(+++)視為陽(yáng)性。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本研究所獲得的數(shù)據(jù)資料采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行處理和分析。用(±s)描述研究對(duì)象的年齡、孕期、胎次，采用趨勢(shì)χ2檢驗(yàn)比較對(duì)照組、妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組4組中AQP1的表達(dá)陽(yáng)性比例是否呈線性變化。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩組研究對(duì)象一般臨床資料比較(±s)

表1 兩組研究對(duì)象一般臨床資料比較(±s)

項(xiàng)目對(duì)照組研究組FP例數(shù)6060年齡(歲)27.7±2.728.5±2.40.6390.108孕期(d)268.0±10.2259.0±9.52.2600.135產(chǎn)次1.57±0.71.63±0.70.8200.620

表2 兩組之間AQP1陽(yáng)性率表達(dá)情況的比較(n)

結(jié)果

一般情況：研究組平均年齡(28.5± 2.4)歲，平均孕期(259.0±9.5)d，平均孕次(1.63±0.7)。對(duì)照組平均年齡(27.7± 2.7)歲，平均孕期(268.0±10.2)d，平均孕次(1.57±0.7)。比較兩組產(chǎn)婦的年齡、孕期和產(chǎn)次，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

AQP1分布及表達(dá)情況：AQP1主要分布于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，在胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)。且正常產(chǎn)婦胎盤組織的胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞正常，血管及毛細(xì)血管部分內(nèi)皮細(xì)胞的胞膜及胞質(zhì)中可見(jiàn)淺棕黃色染色，而重度子癇前期的胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞增生，血管及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì)呈深棕黃染色，見(jiàn)圖1和圖2。

研究組AQP1的陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組。進(jìn)一步分析表明，各子組胎盤組織中AQP1的陽(yáng)性表達(dá)率：重度子癇前期組＞輕度子癇前期組＞妊娠期高血壓組＞對(duì)照組，χ2=27.233，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

圖1 AQP1在正常產(chǎn)婦胎盤組織中的表達(dá)(SP染色×200)

圖2 AQP1在重度子癇前期產(chǎn)婦胎盤組織中的表達(dá)(SP染色×200)

討論

胎盤是維持妊娠和促進(jìn)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的重要器官，能夠分泌多種激素，進(jìn)行母體和胎體之間的物質(zhì)交換。而構(gòu)成胎盤的主要細(xì)胞是滋養(yǎng)細(xì)胞，維持胎盤的正常妊娠功能。胎盤功能異常會(huì)引發(fā)自然流產(chǎn)、妊娠期高血壓及胎兒生長(zhǎng)受限等[5]。妊娠期高血壓在產(chǎn)婦分娩后癥狀消失，提示胎盤與妊娠期高血壓存在關(guān)聯(lián)，但目前其病理機(jī)制尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究。

AQPs是細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)囊泡中具有透水功能的蛋白分子，其表達(dá)或功能不僅對(duì)妊娠期母胎之間的液體交換及羊水的生成和代謝密切相關(guān)水分子的傳輸產(chǎn)生影響，而且許多疾病如高血壓、心腎功能衰竭、腦水腫、肺水腫及視網(wǎng)膜水腫等均可能與AQPs功能異常或調(diào)節(jié)失控有關(guān)。

目前共發(fā)現(xiàn)了13種AQPs，即AQP0-AQP12[6，7]；在胎盤組織中已發(fā)現(xiàn)有表達(dá)的AQPs包括：AQP1、3、4、8、9，但是胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞只能表達(dá)AQP1。

本研究采用形同的方式(免疫組化法)檢測(cè)兩組孕婦妊娠期AQP1的表達(dá)水平，檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常妊娠孕婦組相比，妊娠期高血壓組孕婦胎盤組織具有更高的AQP1陽(yáng)性表達(dá)率，并且在研究組的3個(gè)子組中，發(fā)現(xiàn)隨著病情的加重，AQP1的陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)，重度子癇前期組AQP1的陽(yáng)性表達(dá)率最高，與國(guó)內(nèi)學(xué)者Chen等的研究結(jié)果相一致[8]；并同時(shí)應(yīng)用趨勢(shì)χ2檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明AQP1在胎盤組織中的表達(dá)情況與妊娠期高血壓相關(guān)。提示AQP1可能在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展中起了重要作用。推測(cè)可能的發(fā)病機(jī)制：①在妊娠期高血壓疾病中，隨著病情的加重，AQP1表達(dá)增高，導(dǎo)致胎盤局部組織缺血缺氧，降低胎盤抗凋亡基因表達(dá)，引起滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致胎盤血管生理性重鑄障礙，引發(fā)妊娠期高血壓；②AQP1的表達(dá)升高導(dǎo)致血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子減少，損傷血管內(nèi)膜完整性，從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，減少胎盤血管生成，導(dǎo)致胎盤血流灌注不足，血管舒縮因子失衡，引起子宮動(dòng)脈痙攣，引發(fā)妊娠期高血壓。

綜上所述，妊娠期高血壓患者胎盤組織中AQP1表達(dá)異常，可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但有待于進(jìn)一步深入的研究證實(shí)，以探索妊娠期高血壓疾病的防治新方法，這對(duì)減少圍產(chǎn)期母兒死亡有重要意義。

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Clinical analysis of AQP1 expression in placenta of the patients with hypertensive disorder complicating pregnancy

Wu Meifu,Wang Yan(Corresponding author)
School of Public Health of Peking University 100191

Objective:To investigate the expression of aquaporin 1(AQP1)in placenta tissue from the patients with different subsets of gestational hypertension.Methods:60 pregnant women who were diagnosed as gestational hypertension were enrolled in the study group,and 60 cases of the normal full-term cesarean section at the same period as the control group.Results:The expression of AQP1 in placental tissue of pregnant women in each group;the positive rate of AQP1 expression:the severe preeclampsia group＞mild preeclampsia group＞gestational hypertension group＞the control group(P＜0.05).Conclusion:The expression of AQP1 in placenta related to the incidence and severity of hypertensive disorder complicating pregnancy.

Aquaporin 1;Placenta;Hypertension;Gestation period

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.13.54