豬籠草組織培養(yǎng)

廖偉+王勝男+劉勤云

[摘 要] 本實驗選用攀枝花常見的豬籠草幼嫩莖和幼嫩葉柄為外植體進行組織擴繁研究，探究豬籠草組織培養(yǎng)各階段的理想培養(yǎng)基成分。結果表明，豬籠草在1/2MS+ 6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-3周生長的幼芽最多，效果最好。以1/2MS+ 6-BA2.2mg/L +NAA0.1mg/L培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其增殖率最高。而理想的生根培養(yǎng)基為1/4MS+ 6-BA0.1mg/L +NAA0.5mg/L，培養(yǎng)3-4周后生根率能達到94%。

[關鍵詞] 豬籠草，培養(yǎng)基，細胞分裂素，萘乙酸

[中圖分類號] S682 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650（2017）05-0061-02

豬籠草是多年生草本食蟲植物，又名食蟲草，屬于豬籠草科（Nepenthaceae）豬籠草屬（Nepenthes）。有1個屬，85個種[1]，起源于亞洲東南部、馬達加斯加島及澳大利亞.其中大多數(shù)的種分布于蘇門答臘島和婆羅洲[2]，屬于熱帶食蟲植物，其擁有一個獨特的吸取營養(yǎng)的器官——捕蟲籠，捕蟲籠呈圓筒形，下半部稍膨大，籠口上具有蓋子，因其形狀像豬籠而得名。

豬籠草葉片的構造比較復雜，分為葉身，卷須和葉柄。其卷須尾部擴大并向上反卷形成瓶狀的捕蟲籠，可捕食幼小的昆蟲。豬籠草的花序為總狀，開有紫色或綠色小花，捕食昆蟲的工具是葉頂?shù)钠繝铙w。瓶狀體的瓶蓋復面能分秘香味，引誘昆蟲。利用光滑的瓶口，使昆蟲滑落瓶狀內(nèi)，昆蟲被瓶底分泌的液體淹死，并被分解為對豬籠草生長有用的營養(yǎng)物質，逐漸消化吸收。

就目前所發(fā)現(xiàn)的豬籠草的品種而言，其具有較高的藥用價值和觀賞價值。因而豬籠草受到大多數(shù)人喜愛。由于豬籠草具有很高的價值，市場對豬籠草的需求量也在日益增加，但豬籠草種子發(fā)芽率極低，主要采用扦插繁殖 [3] ，難以滿足市場需求，需要尋求一種快速繁殖的方法，才能滿足市場的需求。

1 實驗方案

選用攀枝花本地1-2年生的豬籠草幼苗莖段，首先用自來水反復沖洗，沖洗中可加適量的洗衣粉，洗去莖，葉上的泥沙。去除葉片，在超凈工作臺上用75%的酒精進行20-30S浸泡消毒，之后立即用無菌水沖洗2-3次，然后用0.1%的升汞溶液消毒8-10min，然后無菌水沖洗4-5次，切除莖段與消毒液接觸面，每個小莖段保留1-2個芽點。將處理好的莖段接種到1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1gm/L的培養(yǎng)基上，每5-6天跟換一次新的相同培養(yǎng)基，減少褐化。大概2周后長出側芽，切取帶有1-3個節(jié)點的側芽作為外植體接種到設置好不同激素配比的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)實驗。

培養(yǎng)基篩選：基本培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA+NAA，生根培養(yǎng)基選用 1/4MS+6-BA+NAA，PH均為為5.8。然后分別用不同濃度配比的6-BA和NAA對不同階段分別處理。每種激素濃度配比接種30個外植體，

2 結果與分析

2.1 不同濃度6-BA對芽增殖的影響

在附加濃度分別為1.0mg/L、1.5 mg/L、1.8mg/L、2.0 mg/L、2.2mg/L、2.5mg/L以及3.0mg/L的6-BA培養(yǎng)基上，由表2.1可得，都可以使外植體增殖，只是增殖率不同。隨著6-BA濃度的增加，增殖率增加。當6-BA濃度為2.0mg/L時，最高到達270%。

2.2 不同濃度NAA對芽增殖的影響

在附加濃度分別為0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.08mg/L、0.1 mg/L、0.12 mg/L、0.15mg/L以及0.2mg/L的NAA培養(yǎng)基上，由表2.2可得，都可以使外植體增殖，只是增殖率不同。隨著NAA濃度的增加，增殖率增加。當NAA濃度達到0.1mg/L時增殖率達到最高243%，隨著NAA濃度進一步增加，增殖率反而降低。

據(jù)表2.1和表2.2數(shù)據(jù)可以看出，豬籠草芽增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基與NAA和6-BA的理想組合為：1/2MS+6-BA2.2mg/L+NAA0.1gm/L

2.3 不同激素濃度配比對芽增殖的影響

選取帶有2-3個節(jié)點的側芽，使用相同的方法接種到不同激素配比的培養(yǎng)基上，每周記錄一次芽增殖數(shù)目，培養(yǎng)4周左右增殖數(shù)達到最大。混合激素培養(yǎng)基培養(yǎng)的外植體比單一激素培養(yǎng)的外植體生長較快，長勢較好，增殖倍數(shù)明顯增加。據(jù)表2.3數(shù)據(jù)顯示，當培養(yǎng)基激素配比為1/2MS+6-BA2.2mg/L+NAA0.1gm/L時最適合芽的繼代培養(yǎng)，其增殖率最高達到323%。

2.4 不同濃度的生長素對生根培養(yǎng)的影響

選取長度為2-3cm，長勢較好的繼代培養(yǎng)叢生芽，接種到1/4MS+6-BA0.1mg/L+NAA培養(yǎng)基上，添加不同濃度的NAA進行培養(yǎng)，培養(yǎng)3-4周后，絕大部分均能長出幼根。幼跟剛長出是為乳白色，大約一周后長出黑色須根。據(jù)表3.4數(shù)據(jù)顯示，隨著NAA濃度的不斷增加，新生跟的數(shù)量也在增加，當NAA濃度達到0.5mg/L時生根數(shù)和生根率達到最大。隨著NAA濃度進一步增加，生根數(shù)和生根率反而降低。因此可選用1/4MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5gm/L作為理想的生根培養(yǎng)基。

2.5 移栽

當幼跟長至2.0cm以上時，將培養(yǎng)箱中的幼苗轉移到自然光照下煉苗，煉苗周期為1-2周，再打培養(yǎng)瓶蓋煉苗2-3天，然后用鑷子從培養(yǎng)瓶中小心取出幼苗，放入盛有無菌水的大燒杯中，輕輕洗去跟部附著的殘留培養(yǎng)基，但一定不要對根系造成傷害，根系出現(xiàn)損害會影響成活率。野生豬籠草能適應于各種生長基質，而人工栽培時宜選用疏松肥沃、排水透氣性好、微酸性的混合基質[4]。所以我們選用由沙和珍珠巖各半混合成的基質進行移栽，注意保持水分、進行適當?shù)恼谑a和保溫處理，成活率可達85%以上。

3 結論與討論

3.1 結論

豬籠草幼莖作為離體培養(yǎng)材料，利用組織培養(yǎng)技術，大量獲取植株國類外的研究均不完整，本實驗初步探討了豬籠草組織培養(yǎng)各階段培養(yǎng)基成分，利用實驗結果可以在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質植株。實驗表明，影響豬籠草組織培養(yǎng)的因素很多，但是首先要控制的就是污染情況，在控制污染率的情況下，不同激素濃度配比對豬籠草幼莖生長也有較大的影響，本次實驗初步探究了6-BA和NAA不同濃度配比對培養(yǎng)的影響。添加不同濃度NAA能夠獲得不同情況的增殖率，并且在與6-BA配比的使用情況下增殖效果更佳。通過實驗得出，誘導幼芽生長的理想激素配比為6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L且1/2MS比MS誘導效果更好。而6-BA和NAA混合使用，對豬籠草芽的增殖率提高也有明顯效果，芽增殖效果最好的培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA2.2mg/L +NAA0.1mg/L。而生根效果最理想培養(yǎng)基為1/4MS+6-BA0.1mg/L +NAA0.5mg/L生根率最高能達到94%

3.2 討論

當前世界花卉產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，人們對于花卉的需求也越來越高。豬籠草因具有獨特的捕蟲籠，因其可愛、獨特的外形深受盆栽市場偏愛，豬籠草在現(xiàn)代生活當中，其可以算是一種裝飾性、觀賞性能非常強的一種植物，適合做吊盆裝飾家居。吊掛在走廊、室內(nèi)窗邊、或者庭院的小樹上，象征著無憂無慮美好的生活。而且豬籠草莖葉均可入藥，對于感冒咳嗽，甚至是高血壓、糖尿病都有一定療效。但用種子來繁殖豬籠草并不容易。因為豬籠草是雌雄異株的植物，要豬籠草結種子，必須要擁有兩種性別的植株。然而，雌性的豬籠草數(shù)量較少，因此少量種植的栽培者不易使豬籠草結出種子。所以利用植物組織培養(yǎng)技術使豬籠草大量快速的繁殖具有很好的研究意義

本實驗在試驗期間出現(xiàn)明顯的褐變現(xiàn)象，謝怡青，謝雄輝等人利用多次轉瓶縮短轉瓶周期，有效的降低了褐變現(xiàn)象[5]。此次實驗使用6-BA與NAA初步探究了豬籠草培養(yǎng)各階段的培養(yǎng)基，如需進一步探究則需再使用其他激素，如ZT，IAA，2，4-D等，且還應更加細化激素濃度梯度，從而尋找最適培養(yǎng)基成分。除了激素影響外，還有如外植體取材部位、外植體年份、培養(yǎng)箱培養(yǎng)溫度、光照強度、光照時長、濕度、各種材料處理方法等各方面都對豬籠草生長有待探究。

參考文獻

[1]Clark C.A Guide to the Pitcher Plants of Peninsula Malaysia[M].Borneo：Natural History Publications，2002.

[2]Mokkamul P，Chaveerach A，Sudmoon R，et a1.Species Identification and Sex Determination of the Genus Nepenthes[J].Pakistan Journal of Biological Sciences，2007，10（4）：561—567.

[3]王清連.植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 2002.

[4]徐遲默.豬籠草[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學，2003.23（5）.

[5]謝怡青，謝雄輝，丘亮偉，黃愉光.豬籠草組培快繁技術研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學，2007.28（2）