翁莧顆粒對雞白痢IL-2和IFN-γ的影響

魏 薇 ， 莫孔源 ， 劉 娟 , 陳 曉

(西南大學榮昌校區獸醫科學工程研究中心中藥創新研究室 ， 重慶榮昌402460)

翁莧顆粒對雞白痢IL-2和IFN-γ的影響

魏 薇 ， 莫孔源 ， 劉 娟 , 陳 曉

(西南大學榮昌校區獸醫科學工程研究中心中藥創新研究室 ， 重慶榮昌402460)

為了探討翁莧顆粒對雛雞感染雞白痢后療效及IL-2、IFN-γ的影響， 采用腹腔注射雞白痢沙門菌菌液的方法人工復制雞白痢的病理模型， 通過在飼料中添加一定比例的翁莧顆粒， 于試驗前、 攻毒后、 試驗后各組隨機取雛雞抽取心血， 分離血清檢測雛雞IL-2、 IFN-γ的含量。 結果翁莧顆粒高劑量組、 陽性藥物組對雛雞白痢的治愈率、 有效率最高。 與空白組比較， 模型組雛雞IL-2的含量升高， 差異極顯著(P<0.01)， IFN-γ的含量無顯著性差異； 與模型組比較， 翁莧各組雛雞IL-2的含量降低， 差異極顯著(P<0.01)， IFN-γ的含量無顯著性差異。 表明翁莧顆粒能防治雛雞白痢， 其作用與促進雛雞體液免疫水平， 增強其非特異性免疫功能有關。

翁莧顆粒 ； 雞白痢 ； IL-2 ； IFN-γ

雞白痢是危害養雞業最嚴重的細菌性疾病之一。其傳播范圍廣，感染雞只多，嚴重地威脅集約化養雞業的發展，給養雞業帶來巨大的經濟損失。本試驗在本教研室前期工作的基礎上，通過篩選和比較，將白頭翁等中草藥按照一定比例進行配伍組成方劑翁莧顆粒。前期試驗證實了翁莧顆粒對雞白痢沙門菌有很好的抑菌作用，為進一步用于臨床，筆者等探討了翁莧顆粒對雛雞感染雞白痢后IL-2、IFN-γ及血液生理指標的影響，為臨床用藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物和菌種 120只健康三黃雞，購自四川劉氏種禽場，雌雄各半，體質量45.4～46.0 g。雞白痢沙門菌臨床分離株由西南大學榮昌校區微生物實驗室提供。

1.2 試驗藥品及儀器 翁莧顆粒：由西南大學榮昌校區獸醫科學研究中心中藥創新研究室研制；雞痢靈散：廣東省天寶生物制藥有限公司，批號：20141101。雞IL-2酶聯免疫分析試劑盒：上海瑤韻生物科技有限公司，批號：201606。雞IFN-γ酶聯免疫分析試劑盒：上海瑤韻生物科技有限公司，批號：201606。Model 680酶標儀(BiO-Rad)、BA 200光學顯微鏡(麥克奧迪實業集團有限公司)；SW-CJ-1BU型潔凈工作臺(蘇凈集團蘇州安泰空氣技術有限公司)。

1.3 試驗分組及處理 將120只1日齡雛雞隨機分為空白組，模型組，翁莧顆粒高、中、低劑量組和陽性藥物組，每組20只。空白組、模型組給予生理鹽水，翁莧顆粒高、中、低劑量組分別給予0.5g/只，0.3g/只與0.1g/只的用量拌料飼喂，陽性藥物組給予0.5g/只雞痢靈散拌料飼喂，2次/d，連續7 d后，各藥物組與模型組雛雞腹腔注射含4.9×107CFU雞白痢沙門菌的菌液進行體內攻毒。隨后，各藥物組繼續用藥7 d。

模型建立判定標準，參考文獻[1]，攻毒12 h后雛雞閉眼昏睡,呆立或趴臥不起,或擁擠成一團,兩翅下垂,精神委頓；攻毒后24～48 h雛雞大量死亡,死亡雞的肛門被白色糞便污染。剖檢死亡雛雞發現肝臟充血腫大,甚者變黑,有的表面有灰白色壞死點，直腸膨脹,有白色稀糞存積，卵黃吸收不良。細菌學檢查：在麥康凱瓊脂平板上長成較密集的圓形、光滑、濕潤和半透明的無色小菌落。顯微鏡下可見粉紅色、兩端鈍圓的小桿菌,無莢膜和鞭毛,沒有運動性。

療效判定標準，參考《中醫病癥診斷療效標準》與文獻[1]，(1)有效率：在試驗期間,給藥后雞的精神狀態好轉、食欲恢復；(2)治愈率：在試驗期間,給藥后雞的精神狀態、食欲恢復正常,不再出現白色稀糞等臨床癥狀；(3)無效率：在試驗期間,出現雞白痢的臨床癥狀及糞便鏡檢無改善。

1.4 采樣及檢測 各試驗組雛雞在試驗前、攻毒后、試驗后隨機抽取4只，取雛雞心血離心血清備用，用雞IL-2、IFN-γ酶聯免疫分析試劑盒檢測雛雞血清中IL-2、IFN-γ的含量。

1.5 數據處理 試驗數據用SPSS20.0統計軟件進行顯著性檢驗和方差分析。

2 結果

2.1 模型建立與防治效果 試驗結果顯示，攻毒后模型組雛雞排出白色下痢糞便，抽取雛雞病理剖檢和細菌學檢查均符合造模成功的標準。陽性藥物組與翁莧顆粒高、中劑量組雛雞未出現典型雞白痢癥狀，翁莧顆粒低劑量組少數雛雞精神、食欲不佳。翁莧顆粒高劑量、陽性藥物組對雞白痢雛雞有效率、治愈率最高，均為91.7%。翁莧顆粒中劑量、低劑量組有效率均為83.3%，治愈率分別為83.3%、75%。

2.2 翁莧顆粒對雛雞感染雞白痢后血液中IL-2含量的影響 試驗結果顯示，模型組雛雞血液中IL-2的含量升高，與空白對照組相比，差異極顯著(P<0.01)。翁莧高、中劑量組、陽性藥物組雛雞血液中IL-2的含量無異常變化，與模型組相比，差異極顯著(P<0.01)，與空白對照組相比，差異不顯著(P>0.05)。翁莧低劑量組雛雞血液中IL-2的含量升高，與空白對照組、模型組相比，差異極顯著(P<0.01)。結果證實，翁莧顆粒能抑制雞白痢感染雛雞IL-2的過度分泌,見表1。

表1 對雛雞感染雞白痢后血液中IL-2含量的影響 (ng/L,X±SD)

注：同列數值有相同字母者差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母之間差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母之間及大小寫字母之間差異極顯著(P<0.01)

2.3 翁莧顆粒對雛雞感染雞白痢后血液中IFN-γ含量的影響 試驗結果顯示，模型組雛雞血液中IFN-γ含量與空白對照組相比，差異不顯著(P>0.05)。翁莧各組雛雞血液中IFN-γ含量與模型組、空白對照組相比，差異不顯著(P>0.05)。結果說明雛雞在感染雞白痢后，IFN-γ的含量不受影響，未通過IFN-γ介導免疫應答的途徑,見表2。

3 討論與結論

TLRs受體通過識別不同病原微生物上的保守序列病原相關分子模式，激活先天性免疫系統產生親炎癥細胞因子[2]。不同的TLRs特異性結合自身配體 /PAMP 后，通過MyD88依賴性或非依賴性途經激活下游一系列蛋白級聯反應，將刺激信號轉導至細胞核內，誘導相應細胞因子如IL-2、干擾素等合成與釋放[3]。其中TLR4可識別LPS并誘導參與特異性免疫應答的主要抗原遞呈分子樹突細胞DC的成熟，其在樹突細胞上的活化及表達將決定Th細胞的生成類型，即Th1或Th2。細胞因子可誘導Th1和Th2為主的T細胞的增殖和分化，啟動機體的后天免疫系統。細胞因子IL-2是T細胞生長因子，主要由Th1產生[4]。IL-2具有多種免疫增強效應，在眾多細胞因子網絡中起重要作用，能維持活化的T細胞、巨噬細胞和NK細胞的生長及增殖，誘生分泌多種細胞因子，對細胞免疫和體液免疫均有重要作用。因而雛雞感染雞白痢后，IL-2的含量會在一定程度上受到影響[5]。IFN-γ是由活化的NK細胞和T淋巴細胞等分泌的一種低分子可溶性糖蛋白，可以激活血管內皮細胞、NK細胞和巨噬細胞，能直接作用于T、B淋巴細胞，促進分化。此外，IFN-γ是一種免疫調節的多效性因子，哺乳動物和禽IFN-γ被用作感染機體的細胞介導免疫的指示器[6]。Th1細胞通過分泌IFN-γ，在一定程度上促進細胞介導的免疫應答[4]。本研究顯示，雛雞感染沙門菌后LPS激活免疫系統，誘導了IL-2的產生，IL-2的含量升高。翁莧高、中劑量組IL-2的含量降低，推測翁莧顆粒能夠抑制沙門菌內毒素引起的細胞因子過度分泌，對雛雞體液免疫具有顯著增強作用，能提高其非特異性免疫功能。各組雛雞血液中IFN-γ的含量均無顯著性差異，可能試驗雛雞在感染雞白痢后，沒有通過Th1細胞分泌IFN-γ介導免疫應答的途徑。

表2 對雛雞感染雞白痢后血液中IFN-γ含量的影響 (ng/L,X±SD)

綜上所述，翁莧顆粒能防治雛雞白痢，其作用與促進雛雞體液免疫水平，增強其非特異性免疫功能有關。

[1] 肖永霞,劉煥琦,鄒明.白痢凈口服液對人工誘發雛雞白痢的臨床效果觀察[J].黑龍江畜牧獸醫,2009(23):117-118.

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[4] 楊漢春.動物免疫學[M].2版.北京：中國農業大學出版社,2003:99.

[5] 王自力,魯琳,朱曉宇,等.中藥復方對雞免疫器官指數及IL-2表達的動態影響[J].中國獸醫科學,2007,37(6):543-546.

[6] 欒維民,楊樹寶,顧玉寶,等.雞腸相關性淋巴組織中IFN-γ和IL-2 mRNA表達的動態變化[J]. 中國獸醫科學,2011,41(3):292-297.

Effect of Weng Xian Granule on IL-2 and IFN-γ for Pullorosis

WEI Wei , MO Kong-yuan , LIU Juan , CHEN Xiao

(Traditional Chinese Medicine Innovation Laboratory,Veterinary Science Engineering Research Center,Southwest University,Chongqing 402460,China)

To investigate the Weng Xian granule on the expression of IL-2 and IFN-γ after chicks infected with salmonella. Healthy chicks were infected with pullorosis salmonella bacteria though intraperitoneal injection to develop pullorosis, and Weng Xian granule was supplemented into feed in certain ratio. Chicks were randomly selected to draw blood samples from hearts to detect the content of IL-2 and IFN-γ before and after treatment. The cure rate and efficient of pullorosis were the highest in Weng Xian granule high dose group,positive drug group. Compared with the blank group, the content of IL-2 was significantly higher in model group, but(P< 0.01), there was no significant difference for IFN-γ. Compared with the model group, the content of IL-2 lower significantly in Weng Xian each group(P< 0.01), but there was no significant difference for IFN-γ content.Weng Xian granule can prevent and treat pullorosis, and its action is likely to promote humoral immune level in chicks and strengthen the nonspecific immune function.

Weng Xian granule ; pullorosis ; IL-2 ; IFN-γ

LIU Juan

2016-11-01

國家公益性行業(農業)科研專項(201303040-05)；農業部科技基礎性專項(2013FY110600-03)

魏薇(1991-)，女，碩士，從事中獸醫藥研究，E-mail：1587291514@qq.com

劉娟，E-mail：liujrc@163.com

S858.31

A

0529-6005(2017)05-0069-03