應用EP15-A2指南文件驗證AU2700型全自動生化儀檢測項目的精密度性能

王 赟歐渤苒洪海波張云霞

應用EP15-A2指南文件驗證AU2700型全自動生化儀檢測項目的精密度性能

王 赟①歐渤苒①洪海波①張云霞①

目的：對生化檢測系統的20項常規檢測項目的精密度性能進行評價，以確定其是否滿足臨床需要。方法：應用美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)EP15-A2“精密度和真實度性能的用戶驗證指南”文件，選用2個不同批次、不同濃度水平的室內質控物，采用AU2700生化儀連續測定3～5 d，計算批內精密度(σ批內)和總的室內精密度(σ總)，并與廠商聲明的精密度進行比較，同時也分別與衛生與計劃生育委員會臨檢中心室間質量評價標準(EQa)、WS/T403-2012：“臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標”進行比較。結果：所檢測的20個常規項目的σ批內和σ總100%小于廠商聲明的精密度。同時，σ批內均＜1/4的衛生與計劃生育委員會臨檢中心室間質量評價標準，σ總均＜1/3的衛生與計劃生育委員會臨檢中心室間質量評價標準，也小于臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標中規定的不精密度。結論：應用EP15-A2指南文件驗證廠商聲明的精密度性能操作簡便，經濟實用，適合臨床實驗室對精密度進行核實，所評價的檢測系統的精密度性能既符合廠商聲明的精密度，也符合國家相關規定要求，該生化檢測系統精密度可以滿足臨床需要。

精密度；EP15-A2指南文件；生化檢測系統；性能驗證

精密度是指在規定條件下對同一或類似被測對象重復測量所得示值或測得值間的一致程度[1]。精密度性能是檢測系統的基本分析性能之一，也是其他方法學評價的基礎。ISO15189“醫學實驗室質量和能力認可準則”和“醫療機構臨床實驗室管理辦法”均要求檢測系統在用于常規工作前應對其分析性能進行驗證確認或分析評價，以證實其能夠滿足預期用途。

美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)頒布了EP15-A2“精密度和真實度性能的用戶驗證指南”，為實驗室較為簡便地驗證廠商做出的精密度提供了實用的方法[2]。本研究按照EP15-A2指南的方案，對“醫學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明”(CNAS-CL38)中要求組合認可的20個常規生化項目采用AU2700型全自動生化儀進行精密度驗證。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Beckman-Coulter AU2700型全自動生化儀(美國貝克曼)；所有檢測項目均采用Beckman-Coulter原裝配套試劑(美國貝克曼)；校準液(批號0116F)、日常質控物(批號 0029，0030)為Beckman-Coulter提供；采用與日常質控物不同批號的Beckman-Coulter質控物驗證精密度(批號 0031，0032)。

1.2 精密度檢測方法

根據廠商聲明的批內精密度(σ批內)和總的室內精密度(σ總)比例關系分為以下兩種情況。

(1)如果σ批內＜2/3σ總：每日分析1個批次，2個濃度，每個濃度重復測定4次，連續5 d。總蛋白(TP)、總膽紅素(Tbil)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素(Urea)、尿酸(UA)、肌酐(Cr)、葡萄糖(Glu)、總膽固醇(TCHO)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、鈣(Ca)、無機磷(P)以及谷氨酰轉肽酶(GGT)采用該方式驗證。

(2)如果σ批內＞2/3σ總：每日分析1個批次，2個濃度，每個濃度重復測定3次，連續3 d。白蛋白(Alb)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、鉀(K)、鈉(Na)、氯(Cl)以及乳酸脫氫酶(LDH)采用該方式驗證。

每日應進行常規質量控制程序。如果某一批因為質量控制或操作困難而被拒絕，需在找到并糾正原因后重新進行一批實驗。按照廠商說明書進行校準，如果廠商指出在其聲明中的精密度數據是在多個校準周期下所產生，則在實驗期間內應選擇重新校準[3]。

1.3 統計學方法

按照EP15-A2文件進行試驗數據的統計學處理，計算σ批內和σ總，并與廠商聲明的精密度進行比較。如果廠商聲明的精密度以變異系數(CV)表示，按公式1轉換為分析物所有檢測結果均值的標準差(公式1)：

式中CV為廠商聲明的CV值，x-為所有結果的均值。

如果估計的標準差小于廠商聲明的標準差，則核實精密度與廠商聲明的一致。

如果估計的標準差大于廠商聲明的標準差，可進一步計算驗證值并與之比較，其驗證值為公式2：

式中C為自由度為v(批內)或T(總)時百分位點(1-α/1)的x2分布值。

如果標準差小于驗證值，廠商聲明的精密度通過核實[3]。所有統計學處理在Excel上進行。

2 結果

2.1 σ批內結果

在40個測試結果中，有13個結果小于廠商聲明的σ批內；有27個測試結果大于(或等于)廠商聲明的σ批內，但經驗證后均小于廠商聲明的σ批內。

批內變異系數是實驗中由批內標準差及均值計算得出，廠商聲明的σ批內由其試劑說明書提供，1/4室間質量評價標準(EQa)是衛生與計劃生育委員會臨檢中心EQa的1/4。CV/%是衛生與部發布的衛生行業標準WS/T 403-2012“臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標”[4]中規定的不精密度，各項目的σ批內驗證結果見表1和表2。

2.2 σ總結果

在40個測試結果中，有23個結果小于廠商聲明的σ總；有17個測試結果大于(或等于)廠商聲明的σ總，但經驗證后均小于廠商聲明的σ總。

批內變異系數是實驗中由批內標準差及均值計算得出，廠商聲明的σ批內由其試劑說明書提供，1/3EQa是衛生與計劃生育委員會臨檢中心EQa的1/3。CV/%是國家衛生行業標準WS/T 403-2012“臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標”[4]中規定的不精密度，各項目的總精密度驗證結果見表3和表4。

3 討論

ISO15189：2012對驗證(verification)定義為：通過提供客觀證據對規定要求已得到滿足的認定，其中5.5.1.2檢驗程序驗證，強調未經修改而使用的已確認的檢驗程序在常規使用前應經實驗室的獨立驗證[6]。CNAS-CL38要求性能驗證內容至少應包括正確度、精密度和可報告范圍，所以在一個檢測系統投入使用前應對其性能進行驗證，而為了保證檢驗結果符合使用要求，在檢測系統使用過程中也應對其性能進行驗證[7]。

表1 中值質控物σ批內結果

表2 高值質控物σ批內結果

表3 中值質控物σ總結果

表4 高值質控物σ總結果

精密度可以反映分析過程中隨機誤差的大小，而CLSI EP文件是目前最為規范的檢驗方法或檢測系統分析性能評價工具，涉及精密度的指南文件有EP5-A2、EP10-A2及EP15-A2。EP5-A2指南是最全面的系統方案，但其實驗過程和統計過程較復雜，在許多情況下實用性不強，主要適用于新建立的檢驗方法或檢測系統分析性能評價；EP10-A2指南僅用于初步研究；EP15-A2指南是針對臨床實驗室而設計，實驗和統計過程均較簡單，主要用于檢驗方法或檢測系統的精密度性能，該指南簡便實用，能在不同實驗室應用，而且其提供的統計學結論也足夠嚴密，但其應用范圍有限，僅用于核實研究[8]。本研究實驗所涉及的20個臨床生化常規檢測項目均使用配套的試劑盒及校準液，是已確認的檢測系統，屬于核實研究，可以使用EP15-A2指南驗證其精密度是否符合廠商聲明的精密度要求[9]。

通常廠商均會給出2種精密度的聲明，即σ批內和σ總。因此EP15-A2指南主要通過實驗得到估計的批內標準差(S批內)和總標準差(S總)，并與廠商聲明比較[3]。本研究實驗室參照該方案對Beckman-Coulter AU2700型全自動生化分析儀檢測20個常規生化項目的2種精密度進行了驗證，這些常規生化項目是CNAS-CL38中要求組合認可的項目，是臨床上使用廣泛，方法成熟的項目。此外，在驗證廠商的精密度性能時，應盡可能選擇與廠商聲明的精密度評價性能接近的樣本。為此，本研究選擇了2個濃度水平的質控物進行實驗，研究中所有項目均可通過驗證，表明以上項目在AU2700型全自動分析儀的檢測系統中可以滿足臨床要求。

除了按照EP15-A2指南文件驗證廠商提供的精密度外，本研究還使用國際上推薦的總不精密度來評價檢測系統的誤差。國際上為了更好地檢出不穩定的誤差，已明確提出檢測系統的S批內應為美國的臨床實驗室室間質量評估允許誤差的1/4，批間標準差應為允許誤差的1/3(若允許誤差以%表示，則批內變異系數CV小于允許誤差的1/4，批間變異系數CV小于允許誤差的1/3)。目前，國內大多采用衛生與計劃生育委員會臨檢中心EQa作為總誤差來評判一個系統的不精密度[10]。本研究中，所有項目的CV批內均＜1/4EQa，而CV總均＜1/3EQa，也能夠表明檢測系統的不精密度屬可接受水平。而能達到此要求的檢測系統，可認為其隨機誤差屬于可接受的低水平。

2012年底原衛生部發布了衛生行業標準WS/T 403—2012“臨床生物化學檢驗常規項目分析質量指標”，并于2013年8月1日起實施。該文件對總誤差、不精密度和偏倚作出了具體規定，明確指出總誤差、不精密度和偏倚主要用于室間質量評價、室內質量控制管理和正確度驗證，3種方法可共同用于方法性能評價等[4-5]。這些指標的設定主要根據檢驗項目的個體內生物學變異和個體間生物學變異，同時考慮目前可實現的分析質量水平，在質量規范層次模型中屬于第二層次[11]。而在本研究中，所有項目的CV批內和CV總均小于該質量指標規定的不精密度(CV/%)，則進一步表明本實驗室使用的AU2700生化分析儀檢測系統檢測常規項目的不精密度屬可接受水平[12]。

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Verification of the precision performance for AU2700 by the application of EP-15A2 file/

WANG Yun, OU Bo-ran, HONG Hai-bo, et al//China Medical Equipment,2017,14(6):21-25.

Objective: To evaluate the performance precisions of 20 routine test items

of biochemical analyzer system so as to confirm whether they can meet clinical demands.

Methods: 2 quality control materials ( different concentration, different lot) according to "verification guidance of precision and validity for user " of EP15-A2 were continuously detected 3-5d by using AU2700, and the within-run precision(σw) and total precision (σt)were calculated and compared with the declarations of manufacturers. At the same time, it also be compared with National Center for Clinical Laboratories's EQa standard and WS/T403-2012: Analytical quality specification for routine analytes in clinical biochemistry. Results: The within-run precisions and total precisions of the 20 routine items were less than that of the declaration of manufacturers. At the same time, all of the within-run precisions were less than 25% of EQa standard, and all of total precisions were less than one third of EQa standard. Besides, they also less than the relative standards of WS/T403-2012. Conclusion: It is easy and economic in practice that EP15-A2 is applied to verify the precisions of the declaration of manufacturer, and it suits to the verification for precision of clinical laboratory. As this method, the precision performance of the detection system not only accords with the precision of the declaration of manufacturers, but also accords with the national requirements. Finally, the precision of this biochemistry detection system can satisfy the clinical demands.

Precision; EP15-A2 guidance file; Biochemical analyzer; Performance verification

Center of Testing, Hematonosis Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Tianjin 300020,China.

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2017.06.007

1672-8270(2017)06-0021-05

R197.39

A

王赟,女,(1975- ),本科學歷，主管技師。中國醫學科學院血液病醫院檢測中心，從事臨床生化檢驗工作。

2017-03-07

①中國醫學科學院血液病醫院檢測中心 天津 300020