HIV抗體單試劑反應性獻血者的確認及回歸策略*

霍寶鋒 張天弼 劉智敏 林奕斌 溫芳丹

HIV抗體單試劑反應性獻血者的確認及回歸策略*

霍寶鋒①張天弼①劉智敏①林奕斌①溫芳丹①

目的：探究人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體單試劑反應性獻血者的確認及回歸策略。方法：選擇2014年1月-2016年6月本站獻血經兩種試劑檢測的80 876人次獻血者，篩選HIV抗體檢測單試劑反應性為146例，屏蔽3～6個月后，對其進行召回，分別留取血液樣本后，對其進行復查。結果：召回的146例單試劑反應性獻血者經HIV抗體酶聯免疫吸附法（ELISA）試劑檢測顯示，仍表現為單試劑陽性9例，雙試劑陽性1例。對雙試劑陽性進行檢測，顯示其為核酸和確證試驗均為陽性。結論：對單側反應性的獻血者采用ELISA、NAT檢測進行隨訪，獻血者的權益能得到有效保障，減少獻血者流失，緩解用血緊張局面。對無償獻血前獻血者具體情況征詢，并實施血液篩查，對低危固定的無償獻血者建立長期檔案，加強檢測管理，有效降低血液報廢率，保證血液安全。核酸檢測有助于提高無償獻血者的血液質量，降低經血傳播HIV等病毒的風險，保障臨床安全用血；同時，臨床應加強兩種檢測方式的聯合應用，最大限度的避免病毒感染漏檢現象。

HIV抗體； 單側反應性； 獻血者； 確認； 回歸

HIV的傳播途徑有血液、性接觸、母嬰傳播等，為保障用血安全，我國將HIV檢測作為常規血液篩查項目之一[1-2]。目前，臨床對HIV檢測主要為ELISA及核酸兩種。ELISA具有特異性好、靈敏度高、操作簡單、成本低、易于自動化等優勢，在檢測無償獻血標本傳染標志物中被普遍應用[3-4]。因為不同廠家的ELISA試劑敏感性和特異性有所差異，所以出現了單試劑反應性。因而，檢測結果顯示為假陽性的情況時有發生，不僅對獻血者的權益和熱情造成傷害，給其造成困惑和恐慌，還會導致血源浪費[5]。本研究選擇在本站獻血且經檢測顯示為單試劑陽性的146例獻血者為研究對象，對其進行≥6個月的屏蔽后實施追蹤檢測，分析此類獻血者歸隊可行性。現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月-2016年6月在本站獻血經兩種試劑檢測的80 876人次，其中單試劑反應性為146例，抗-HIV單試劑呈反應性的有146例。分別進行酶聯免疫法試驗（ELISA）和病毒核酸檢測（NAT）檢測進行確認。

1.2 儀器和試劑 儀器：全自動加樣酶免一體機、離心機、全自動生化分析儀、熒光定量PCR儀、匯集與核酸提取儀、核酸檢測系統、數據分析系統。乙肝表面抗原（HBsAg）試劑由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供（批號：201305231、201504031等）、丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）試劑由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供（批號：201305021、201509021等）、艾滋病抗體（抗-HIV）試劑由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供（批號：201306021、201508021等）、梅毒螺旋體抗體（抗-TP）試劑由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供（批號：201308051、201507026等）（酶聯免疫法）；HBsAg試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號：2013025819、2015063823等）、抗-HCV試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號：2013025814、2015063813等）、艾滋病抗體（抗-HIV）試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號：201306025、201508039等）、梅毒診斷試劑盒（酶聯免疫法）試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號：201306011、201508031等）；中山大學達安基因股份有限公司的核酸血篩試劑（批號：20130621、201508016等）；檢驗所使用試劑均為中國藥品生物制品檢定所批檢合格，所有試劑均在有效期內進行使用，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 方法 屏蔽3個月后對146例單試劑反應性獻血者進行追蹤檢測，其中有129例經信息和電話成功召回，召回率為88.36%。對召回的獻血者實施靜脈取血，分別留取血清學檢測樣本和核酸檢測樣本各5 mL，分離血漿和血清，將其保存在2～8 ℃和-18 ℃以下的冰箱中備用。ELISA檢測：實施HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP 4項檢測，分別進行雙試劑檢測，當雙試劑存在反應性可將其判斷為陽性，單試劑存在反應性需進行雙孔復查（采用相同試劑），結果顯示單孔或雙孔存在反應性可將其判斷為陽性，反之則為陰性。HIV核酸檢測：核酸檢測時以8樣本混樣模式進行，如8樣本混樣檢測顯示為陽性，拆分混樣的各樣本，對其進行單份標本檢測，如檢測結果為陰性，則判斷核酸檢測陰性，反之則為陽性。對目標獻血者屏蔽6個月后留取標本，進行ELISA和NAT檢測，決定是否歸隊。

2 結果

召回的129例單試劑反應性獻血者經抗HIV抗體ELISA試劑檢測顯示，抗-HCV、HBsAg、抗-TP均顯示為陰性，抗-HCV仍然表現為單試劑陽性的有9例，雙試劑陽性有1例。對雙試劑陽性進行檢測，顯示其為核酸陽性，且確證試驗陽性。見表1。

表1 追蹤所召回的129例獻血者的檢測結果 例

3 討論

輸血是一種通過靜脈經血液輸注給患者的治療方法，目前已廣泛應用于臨床，且具有無可替代的地位。但受血液安全性影響，輸血治療存在著較大風險，血液質量對治療效果亦具有顯著影響。無償獻血是輸血治療的主要血液來源，降低經血傳播風險，尤其是HIV感染，是醫療部門關注的重要話題，同時也是采血站持續改進工作質量的首要目標[4，6]。我國目前獻血的相關法律法規和標準中均沒有涉及血液篩查呈反應性時如何進一步給予確認的法律規定以及標準。只是臨床對獻血者屏蔽和獻血者淘汰有原則性的規定，對于呈反應性的獻血者均未涉及對血液篩查假陽性獻血者再次獻血資格的保留和重新回歸獻血隊伍的規定。近年來，為了更好地降低獻血者與輸血者兩者之間經輸血傳播的病毒性疾病的風險，有效保證血液質量，我國采供血機構都在致力于如何提高血液安全的檢測方法和檢測手段。隨著血液檢測技術的發展，HIV、HCV感染“窗口期”明顯縮短，而窗口期是指病原感染開始至可采用檢測方法檢測出病原時間。因此，血站工作人員一直將確保血液安全、減小血液傳播疾病風險，尤其是HIV感染作為工作質量持續改進的目標。對獻血者所獻的血液進行篩查主要目的在于確保血液安全。ELISA檢測是目前國內常用于輸血傳染病標志物的檢測方式之一，具有高特異性和高靈敏性，且成本較低。隨著ELISA檢測靈敏性的提高，難免會出現假反應性等情況[7-8]。篩查輸血傳染病標志物，當確證實驗確認標本陽性的為真陽性，如確證實驗確認標本陰性則其為假反應性。當血液檢測顯示為假反應性，會對獻血者造成不同程度的心理負擔，出現恐慌等不良情緒，還會造成血液資源浪費，甚至會屏蔽獻血者，使其永久無法獻血[9-10]。孟毓等[11]通過比較分析4種不同的HIV試劑，結果顯示，單試劑假反應性比例為89.53%～96.19%，其中97.6%（33/34）為HIV單試劑假反應性。ELISA檢測結果受多種因素的影響，包括試劑批間穩定性、試劑靈敏性、人為操作、實驗方法學、標本狀態等。此外，ELISA檢測過程中也會受到其他抗體的影響，如自身免疫、風濕因子、細菌或病毒感染等[12-13]。因此，血站有必要對此類獻血者進行召回，實施再次檢測。歐盟、澳大利亞、美國等地區均發布并建立了針對獻血者經抗-HIV、抗-HCV、HBsAg等檢測結果為假反應性的歸隊指南[14-15]。我國也在2013年對獻血呈假反應性者提供了歸隊檢測的指導。

本研究結果顯示，召回的129例單試劑反應性獻血者經抗HIV抗體ELISA試劑檢測顯示，仍表現為單試劑陽性的有9例，雙試劑陽性有1例。對雙試劑陽性進行檢測，顯示其為核酸和確證實驗均為陽性。9例單試劑陽性經進一步檢查，其核酸和確證實驗均顯示為陽性。陜柏峰[15]研究中，在對單試劑反應性獻血者實施召回檢測，結果顯示，HIV確證實驗陽性出現1例，這與本研究結果一致，可見對單試劑反應性獻血者實施歸隊檢測的重要性。臨床調查顯示，艾滋病流行態勢已逐漸向一般人群擴散，其中廣西、云南、四川、河南、廣東、新疆等6省區艾滋病感染累計人數在全國總數中約占77.10%[16]。其中艾滋病感染率較高的為廣東省[17]。在獻血者中艾滋病病毒感染率以每年0.002%的比例逐漸上升。由此可見，對無償獻血者加強相關知識宣傳，告知HIV的傳播途徑，促進其在獻血前咨詢，對存在高危行為的獻血者予以甄別排除具有極其重要的意義。

目前對獻血者檢測單試劑和雙孔復查均呈反應性，就會將此獻血者的各血液制品全部報廢，包括該獻血者血液制品尚未發出的，如普通冰凍血漿或新鮮冰凍血漿等，并永久屏蔽該獻血者，以確保用血者的安全[18-19]。該做法不僅會對獻血者獻血熱情造成極大打擊，還會給其家庭帶來精神困擾，甚至將原本就緊張的血源浪費。因而，實施既能使假反應性獻血者權益得以保護，又能確保用血者安全的歸隊程序尤為重要。本研究建議對呈單試劑反應性的獻血者實施更加人性化的措施，包括以下幾點：（1）報廢單試劑反應性的獻血者的血液制品，對其進行暫時屏蔽。（2）專業人員通過電話將檢測結果告知單試劑反應性的獻血者，對其進行衷心的感謝，并耐心向單試劑反應性獻血者進行解釋，對其進行心理安撫，避免其出現心理負擔，告知其在可在3個月之后進行歸隊再次抽血檢測。（3）屏蔽期滿后，安排專人進行電話或短信通知，告知單試劑反應性獻血者可到血站進行抽血檢測，采集兩管靜脈血，通過核酸和確證檢測者，可將其屏蔽解除，使其歸隊。并及時通過電話與其進行溝通，解除假反應性對其造成的心理負擔，安撫其情緒。并歡迎獻血者進行再次獻血；如經檢測獻血者仍顯示為單試劑陽性，對其繼續進行屏蔽觀察，6個月之后并將其安排為二次歸隊流程中，進行再次檢測；如獻血者檢測結果為核酸陽性或雙試劑陽性，則對其進行永久屏蔽。（4）安排同一工作人員全程對獻血者進行解釋和溝通工作，避免使獻血者產生不被尊重心理。雖然會將科室的工作量增加，但仍需盡力對獻血者實施關愛。此外，選擇合理的檢測試劑與檢測方法，將因假反應性所導致的血源與血液浪費最大限度的降低。

綜上所述，對抗-HIV抗體單側反應性的獻血者進行隨訪檢測，既能有效的保障獻血者的權益，又能減少獻血者流失，緩解臨床用血緊張的局面。對無償獻血前獻血者具體情況征詢，并實施血液篩查，對低危固定的無償獻血者建立長期檔案，加強檢測管理，有效降低血液報廢率，保證血液安全。核酸檢測有助于提高無償獻血者的血液質量，降低經血傳播HIV等病毒的風險，保障臨床安全用血；同時，臨床應加強兩種檢測方式的聯合應用，最大限度的避免病毒感染漏檢現象。

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Confirmation and Regression Strategy of HIV Antibody Positive to Single Reagent/

HUO Bao-feng，ZHANG Tian-bi，LIU Zhi-min，et al.//
Medical Innovation of China，2017，14（18）：141-144

Objective：To explore the human immunodeficiency virus （HIV） antibody to confirm single reagent reaction of blood donors and regression methods.Method：80 876 people who had

monitoring for donating blood by two reagents in our hospital from January 2014 to June 2016 were selected，out of which 146 cases positive to single reagent were screened out and isolated for 3 to 6 months，then they were recalled for blood specimen analysis，and reviewed.Result：Out of the 146 donors positive to single reagent，there were still 9 cases positive to single reagent and 1 case positive to double reagents as shown by enzyme linked immunosorbent assay for HIV antibody.Double reagents detection was applied，and the results showed that it was positive to both nucleicacid and confirmatory test.Conclusion：For donors positive to single reagent，ELISA detection for anti-HIV antibody can help to better safeguard the rights and interests of blood donors，reduce the loss of blood donors，thus ensure the safety of clinical blood transfusion.For voluntary blood donor，specific consultation and blood screening given before the donation，establishment of long-term records for low-risk regular blood donors，improvement of the technical level of the staff，and rigorous detection management can help to effectively reduce the blood scrap rate and ensure the safety of blood transfusion.Nucleic acid detection helps to improve the quality of blood donated voluntarily，reduce the risk of transfusion transmitted virus such as HIV，ensure clinical safety of blood utilization；at the same time，the two kinds of detection methods should be combined together to minimize undetected virus infection.

HIV antibody； Unilateral reactivity； Donor； Confirmation； Regression

Shaoguan Center Blood Station，Shaoguan 512026，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2017.18.040

2017-03-07） （本文編輯：張爽）

韶關市衛生計生科研項目（Y17130）

①廣東省韶關市中心血站 廣東 韶關 512026

霍寶鋒