直腸癌肝轉移患者腫瘤組織CD44、CD166陽性表達的臨床意義

李幸

【摘要】 目的：探討直腸癌肝轉移患者腫瘤組織中CD44與CD166陽性表達的臨床意義。方法：選取筆者所在醫院2013年1月-2016年12月筆者所在醫院收治146例直腸癌患者的腫瘤組織標本，其中32例為肝轉移患者（轉移組），另外114例為未轉移患者（對照組），分別對各組樣本進行SP免疫組化染色法進行檢測，觀察兩組標本組織中CD44、CD166陽性表達情況，并初步探討其陽性表達與患者腫瘤浸潤深度、腫瘤分化程度的相關性。結果：對照組和轉移組CD44陽性表達率分別為42.98%和71.87%，差異有統計學意義（P<0.05）；對照組和轉移組CD166陽性表達率分別為36.84%和81.25%，差異有統計學意義（P<0.05）；肝轉移患者中CD44和CD166陽性表達與浸潤深度有密切關系，腫瘤浸潤深度越深其陽性表達率越高，差異有統計學意義（P<0.05）；而與分化程度無密切關聯。結論：CD44和CD166高陽性表達可作為直腸癌肝轉移的標志性指標，對直腸癌肝轉移患者的早期診斷具有積極的作用，并且CD44和CD166高陽性表達與患者浸潤深度有密切的關系。

【關鍵詞】 直腸癌； 肝轉移； CD44； CD166； 陽性表達

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.17.014 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）17-0031-03

直腸癌是發生在齒狀線至直腸乙狀結腸交界處之間的癌，屬于消化道最常見的惡性腫瘤之一[1]。近年來隨著人們生活水平及飲食習慣的改變，直腸癌發病呈現出上升及年輕化趨勢，并且由于直腸癌發病位置較低且深入盆腔，雖較易診斷，但其解剖關系較為復雜，手術不易徹底清除，術后復發率和轉移率較高，肝臟是直腸癌發生遠處轉移的主要靶器官之一，發生肝轉移后的直腸癌患者不僅病情更加復雜而且嚴重影響患者的治療及預后[2]。臨床研究顯示，單純直腸癌5年生存率約66%，而直腸癌肝轉移患者3年生存率約12%[3]。早期的診斷與標志物監測對直腸癌肝轉移患者的臨床治療與生命安全具有重要的意義與作用。CD44、CD166與直腸癌的發生、發展和轉移關系密切，為進一步探討二者在直腸癌肝轉移患者腫瘤組織陽性表達的臨床意義，筆者針對146例直腸癌患者的腫瘤組織標本（32例為肝轉移患者）進行研究探討，以為后期直腸癌患者肝轉移的臨床診斷提供基礎參考，現匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫院2013年1月-2016年12月筆者所在醫院收治的146例直腸癌患者的腫瘤組織標本，其中32例為肝轉移患者（轉移組），另外114例為未轉移患者（對照組），納入所有標本對應患者留取標本前均未進行相關對應治療，其中轉移組（32例）對應患者男女比例（5∶3），年齡35～69歲，平均（58.29±9.46）歲，病程5～40個月，平均（20.63±10.96）個月；原發腫瘤大小：小于2 cm為6例，2～5 cm為11例，大于5 cm為15例；浸潤深度：T2 9例，T3 12例，T4 11例；分化程度：低分化腺癌17例，中分化腺癌10例，高分化腺癌5例；肝轉移部位：左側單葉4例，右側單葉11例，雙葉17例；轉移灶數量：單個6例，多個26例。對照組（114例）對應患者男女比例（73∶41），年齡36～70歲，平均（56.87±8.92）歲，病程7～40個月，平均（21.47±11.58）個月；原發腫瘤大小：小于2 cm為15例，2～5 cm為32例，大于5 cm為67例；浸潤深度：T2 66例，T3 34例，T4 14例；分化程度：低分化腺癌63例，中分化腺癌39例，高分化腺癌12例。兩組患者性別、年齡、病程及浸潤深度等一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標準

納入標準：（1）診斷明確且臨床病歷資料完整者；（2）經CT、MRI或術中探查切除標本病理檢查確診者；（3）患者年齡30～70歲者；（4）患者及其家屬對本研究知情并同意且簽署知情同意書者。

排除標準：（1）合并其他類型腫瘤者；（2）合并其他嚴重疾病或嚴重并發癥者；（3）惡性腫瘤既往病史者；（4）其他相關禁忌者。

1.3 方法

1.3.1 主要試劑 D44與CD166單抗；聚合物輔助劑；二抗CD44/CD166試劑盒；免疫組化SP染色試劑盒；標記抗山羊辣根酶 IgG多聚體；小牛血清；PBS緩沖液； DAB試劑盒。

1.3.2 實驗方法 對所有標本進行厚4 μm連續兩張切片，并進行載玻片平鋪，65 ℃條件下過夜處理。根據免疫組化SP染色試劑盒操作說明采用SP免疫組化染色法分別對D44與CD166進行檢測，采用二甲苯進行脫蠟處理后，采用酒精進行梯度脫水，蒸餾水沖洗完成后采用PBS浸泡5 min。于高壓下采用枸櫞酸緩沖液進行抗原修復，高壓鍋噴氣3 min，完成后室溫下進行冷卻。室溫下采用百分之三H2O2孵育10 min，PBS 液振蕩清洗3 min（重復3次），將CD44/CD166羊抗人抗體采用1∶150的比例進行滴定，37 ℃條件下孵育2 h，完成后PBS沖洗2 min（重復3次），完成后滴加聚合物輔助劑，于37 ℃條件下孵育

20 min后PBS沖洗2 min（重復3次），完成后進行標記抗山羊辣根酶IgG多聚體滴加，37 ℃條件下孵育20 min，再進行PBS沖洗2 min沖洗（重復3次），完成后進行DAB顯色，顯微鏡下控制染色程度，完成后流水沖洗10 min，蘇木素復染2 min后予以鹽酸酒精進行分化，流水沖洗10 min返藍。最后酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠進行封片。

1.4 觀察指標

（1）觀察兩組標本組織中CD44、CD166陽性表達情況；（2）肝轉移患者中CD44陽性表達與患者浸潤深度、分化程度的相關性；（3）肝轉移患者中CD166陽性表達與患者浸潤深度、分化程度的相關性。

1.5 陽性判定標準

（1）CD44與CD166陽性：細胞質、上皮細胞膜呈棕黃色；（2）CD44與CD166陰性：切片無陽性細胞[4]。

1.6 統計學處理

采用統計學處理軟件SPSS 19.0對研究數據進行統計學處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組標本組織中CD44、CD166陽性表達情況

對照組和轉移組CD44陽性表達率分別為42.98%和71.87%，差異有統計學意義（P<0.05）；對照組和轉移組CD166陽性表達率分別為36.84%和81.25%，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 不同浸潤深度、分化程度肝轉移患者CD44陽性表達

結果顯示，肝轉移患者中CD44陽性表達與浸潤深度有密切關系，腫瘤浸潤深度越深其陽性表達率越高，差異有統計學意義（P<0.05）；而CD44陽性表達與分化程度無密切關聯，見表2。

2.3 不同浸潤深度、分化程度肝轉移患者CD166陽性表達

結果顯示，肝轉移患者中CD166陽性表達與浸潤深度有密切關系，腫瘤浸潤深度越深其陽性表達率越高，差異有統計學意義（P<0.05）；而CD166陽性表達與分化程度無密切關聯，見表3。

3 討論

近年來，直腸癌發病率逐年上升，并有年輕化的趨勢，這與社會因素、遺傳因素與飲食因素具有密切的聯系[5]。直腸癌肝轉移是直腸癌患者遠處轉移最常見的類型，并且由于直腸癌肝轉移患者早期癥狀不明顯，容易被臨床和患者忽視而延誤病情。臨床研究顯示，直腸癌患者臨床確診時肝轉移率高達25%，且肝轉移是嚴重影響患者預后的重要因素[6]。Schindl等[7]的研究中表示，直腸癌肝轉移術后5年生存率僅為19.7%，并且直腸癌肝轉移后患者手術切除率較低。在這種情況下，肝轉移早期的診斷與相關腫瘤干細胞的檢測具有重要的臨床意義。

CD44為細胞表面糖基化黏附分子，廣泛存在于多種細胞中，CD44基因由高度保守的19～20個外顯子構成，在11號染色體短臂上，經轉錄后生成CD44s（標準型）或CD44v（變異型）兩種蛋白，在腫瘤的發生與發展過程中CD44呈現高表達，同時在腫瘤侵襲和轉移中起到促進作用[8]。CD166是一種免疫球蛋白，屬于超基因家族中的一員，不僅能夠與機體淋巴細胞的抗原CD6特異性結合，表現為同嗜性黏附、同型間結合，而且可以呈異嗜性黏附、異型間結合，其在腫瘤組織中呈高表達狀態，而且能夠調節腫瘤的生長和轉移[9]。另一方面，結直腸癌肝轉移過程中，腫瘤自身可分泌多種蛋白酶，可降解基底膜和細胞外基質，基底膜被降解后，可向周圍組織間質遷移，經脈管進入血液、淋巴循環并逃避免疫系統的攻擊，最后伴隨血液循環或淋巴循環到達繼發部位，于繼發部位組織發生黏附，形成克隆并增生生長，繼而促使微血管生成，加速轉移瘤的形成[10]。在本文研究中，轉移組CD44和CD166陽性表達率分別為71.87%和81.25%，均表現為高陽性表達，而未發生轉移的患者中，二者陽性表達率均性對較低，結果提示，CD44和CD166高陽性表達可作為直腸癌肝轉移的標志性指標。在直腸癌肝轉移患者CD44和CD166的研究中，司志英等[11-12]在各自的研究中表示，CD44和CD166高陽性表達與患者性別、年齡、病程及腫瘤大小無明顯關聯，而與浸潤深度和分化程度可能相關，為進一步證實其結論，本文對肝轉移患者中CD44和CD166陽性表達與患者浸潤深度、分化程度的相關性進行初步探討，結果顯示，肝轉移患者中CD44和CD166陽性表達與浸潤深度有密切關系，而與分化程度無密切關聯。

綜上所述，CD44和CD166高陽性表達可作為直腸癌肝轉移的標志性指標，對直腸癌肝轉移患者的早期診斷具有積極的作用，并且CD44和CD166高陽性表達與患者浸潤深度有密切的關系。

參考文獻

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