婦舒丸質量控制研究

張艷+李忠瓊+張恩榮+劉艷+張興元

摘要：目的研究婦舒丸質量控制方法。方法采用HPLC法測定婦舒丸中芍藥苷含量；對微生物限度檢查方法進行適用性研究。結果芍藥苷在0.057117～3.42702μg范圍內線性關系良好，R2=0.9999；平均回收率98.24%，RSD 1.57%（n=6）。婦舒丸對5種試驗菌無抑菌作用，回收率均在50%～200%之間。結論芍藥苷含量測定方法準確可靠，可用于婦舒丸質量控制。婦舒丸可采用常規法（1ml/皿）進行微生物限度檢查。

關鍵詞：婦舒丸；芍藥苷含量；微生物限度檢查

中圖分類號：R285文獻標志碼：B文章編號：1007-2349（2017）06-0077-03

【Abstract】Objective： To study the quality control method of Fushu Pill. Methods： HPLC was used to dtermine content of paeoniflorin in Fuzhu Pill. The applicability of microbial limit test method was studied. Results： The linear range of paeoniflorin was good in the range of 0.057117 to 3.42702μg， R2=0.9999 and its average recovery rate was 98.24% and RSD was 1.57% （n=6）. Fushu Pill had no bacteriostatic effect on the five kinds of test bacteria and the recovery rate was between 50% and 200%. Conclusion： The determination method of paeoniflorin is accurate and reliable， which can be used for the quality control o Fushu. The conventional method （1ml/皿） can be used for the microbial limit check of Fushu Pill.

【Key words】Fushu pil， paeoniflorin content， microbial limit check

婦舒丸收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十二冊，由黨參、當歸、肉桂、白芍、川芎、牡丹皮等23味藥組成。具有補氣養血，調經止帶的功效；用于氣血凝滯，子宮寒冷，月經不調，痛經等癥。現行質量標準僅有顯微鑒別和當歸、肉桂薄層色譜鑒別，無含量測定項目[1]，為提高婦舒丸質量標準，更有效地控制其質量，筆者對其進行了有關質量控制方法研究，增加了芍藥苷含量測定，對微生物限度檢查方法進行了適用性研究。

1含量測定

1.1儀器與試藥Agilent-1100液相色譜儀，FUNGILAB超聲儀，Sartorius BS224S天平，DENVER TB-215D天平，芍藥苷對照品（110736-201539，中國食品藥品檢定研究院），水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司生產）。

1.2方法與結果

1.2.1溶液制備

1.2.1.1對照品溶液制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成芍藥苷對照品貯備液（0.4897 mg/mL），精密取1 mL貯備液，加甲醇稀釋至10 mL，即得芍藥苷對照品溶液（0.04897 mg/mL）。

1.2.1.2供試品溶液制備取婦舒丸適量研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（250W，33KHz）45 min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，蒸干，殘渣用20 mL水分次洗入分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30 mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

1.2.1.3陰性供試品溶液制備按處方取除去白芍、牡丹皮的其余藥味，按婦舒丸制備工藝及上述供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。

1.2.2色譜條件色譜柱：Waters SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇-水（25：75），流速1.0 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長230 nm；進樣量：10 μL。理論板數按芍藥苷峰計算不低于3000。

1.2.3專屬性試驗取“1.2.1”項下的3種溶液，按“1.2.2”項下的色譜條件測。結果陰性供試品無干擾，表明方法專屬性良好（見圖1）。

1.2.4線性關系考察取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇配制成7個濃度對照品溶液（0.0057117、0.0114234、0.0228468、0.057117、0.114234、0.228468、0.342702 mg/mL），按上述色譜條件進行測定，進樣量10 μL。以峰面積積分值為縱坐標，進樣量為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為Y=1366.7X-0.015，R2=0.9999，芍藥苷進樣量在0.057117～3.42702 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

1.2.5精密度、重復性和穩定性試驗分別精密吸取芍藥苷對照品溶液（0.04897 mg/mL）10 μL，重復進樣5次，芍藥苷峰面積RSD為0.21%。

取同一批號的婦舒丸樣品（批號620942）按1.2.1.2項下方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，計算芍藥苷含量，結果平均含量為1.1633 mg/g，RSD為1.27%。

取同一供試品溶液，分別間隔0、4、8、12、18、24 h按上述色譜條件測定芍藥苷峰面積，RSD為1.72%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

1.2.6加樣回收率試驗精密稱取已知含量的婦舒丸（芍藥苷含量1.1633 mg/g）樣品0.5 g，共取6份，分別加入芍藥苷對照品溶液（0.4897 mg/mL）1.2 mL，按1.2.1.2項下供試品溶液制備方法制備加樣供試品溶液。按上述色譜條件測定并計算，結果平均回收率為98.24%、RSD 為1.57%。

1.2.7樣品測定按上述方法測定，10批婦舒丸樣品芍藥苷含量在0.59～1.16 mg/g之間，平均含量為0.74 mg/g。

2微生物限度檢查方法學適用性試驗

2.1儀器與試藥HVE-50型立式高壓滅菌鍋、FD-240型電熱鼓風干燥箱、LRH-250型生化培養箱、HTY-761型勻漿儀。胰酪大豆胨液體培養基（批號：150801）、胰酪大豆胨瓊脂培養基（批號：150806）、沙氏葡萄糖瓊脂培養基（批號：150801）均為北京路橋技術股份有限公司生產。銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]均從中國菌種保藏中心獲得。

2.2方法與結果

2.2.1溶液配制

2.2.1.1試驗用菌液制備接種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中，培養18～24 h，用0.9%無菌氯化鈉以10倍稀釋法制成50～100 cfu/mL的菌懸液，備用；接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中，培養18～24 h，用0.9%無菌氯化鈉以10倍稀釋法制成50～100 cfu/mL的菌懸液，備用；接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基中，培養5～7d，用0.9%無菌氯化鈉將孢子洗脫，同時用0.9%無菌氯化鈉以10倍稀釋法制成50～100c fu/mL的孢子懸液，備用。

2.2.1.2供試液制備取婦舒丸10 g，加入100 mL PH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液，置勻漿儀上1 min，混合均勻，制成1∶10的供試液。

2.2.2試驗方法①試驗組：常規法：取供試液9.9 mL，分別加入制備好的5種試驗菌菌懸液0.1 mL，混勻，取1 mL注皿，加入相應培養基，培養后觀察結果并計數，結果見表1。②菌液組：取制備好的5種試驗菌菌懸液各0.1 mL，分別加入9.9 mL稀釋液中，混勻，取1 mL注皿，加入相應培養基，培養后觀察結果并計數。③供試品對照組：采用常規法（1 mL/皿）操作。

2.2.3結果同一批次婦舒丸的3次平行試驗結果顯示，采用常規法（1 mL/皿）對需氧菌計數，霉菌和酵母菌計數方法適用性試驗進行研究，各試驗菌的回收率均在50%～200%之間（見表2），表明該樣品對5種試驗菌均無抑制作用，該方法符合《中國藥典》2015年版要求，在日常檢驗中可用常規法（1 mL/皿）對需氧菌計數，霉菌和酵母菌計數進行檢驗。

3討論

婦舒丸中的主藥白芍具養血調經功能，《中國藥典》白芍項下以芍藥苷為指標測定其含量[2]，文獻報道對婦舒丸進行了黃芩苷及丹皮酚的含量測定[3～4]，為從原料到制劑統一控制質量，故以芍藥苷為指標對婦舒丸進行含量測定。含量測定中供試品超聲提取后直接進樣樣品難于分離，不能達到含量測定要求，采用超聲提取后萃取處理可使供試品得到良好分離。考察不同超聲時間及不同萃取次數，結果表明本文規定方法可行。考察不同流動相配比、不同色譜柱、不同儀器，含量結果無明顯差異，表明含量測定方法適應性、實用性較好。

微生物限度控制是藥品質量控制的基本要求。根據《中國藥典》2015年版的規定，供試品的微生物計數方法應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產品的微生物計數[5]。相關文獻報道，婦舒丸在《中國藥典》2010年版執行期間，可采用常規法（1 mL/皿）進行微生物限度檢查[6]，而該項目《中國藥典》2010年版和2015年版的檢驗方法差別甚大，故對婦舒丸的微生物檢查方法適用性進行研究，結果表明婦舒丸在日常檢驗中可用常規法（1 mL/皿）對需氧菌計數，霉菌和酵母菌計數進行檢驗。

3.3藥品質量控制方法研究及標準提高是一項長期持續的工作，筆者將繼續研究婦舒丸各個方面的質控方法，以全面控制該藥品質量。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第十二冊[S].1997：57.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[M].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2015：105.

[3]任龍海，吳立成，陳林，等.高效液相色譜法測定婦舒丸中黃芩苷的含量[J].中國醫院藥學雜志，2007，27（8）：1177.

[4]張羽，王春福，邱智東.婦舒丸質量標準的研究[J].吉林中醫藥，2007，27（8）：53.

[5]國家藥典委員會.中國藥典[M].四部.北京：中國醫藥科技出版社，2015：140.

[6]趙會蘭.15種中成藥微生物限度檢查方法驗證[J].中國執業藥師，2014：11（5）：17