彌漫大B細胞淋巴瘤中外周血的血清micro-RNA檢測及臨床意義

胡上高 周建耀 李 葳

（福建醫(yī)科大學附屬三明第一醫(yī)院血液科，福建 三明 365000）

彌漫大B細胞淋巴瘤中外周血的血清micro-RNA檢測及臨床意義

胡上高 周建耀 李 葳

（福建醫(yī)科大學附屬三明第一醫(yī)院血液科，福建 三明 365000）

目的 研究彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）中外周血清microRNA-21表達，探討DLBCL中外周血的血清micro-RNA-21檢測及臨床意義方法。方法 采用Real time.RT-PCR方法檢測46例彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）同時，采用西門子全自動蛋白分析的散射比濁法檢測46例DLBCL中的血清β2微球蛋白表達。結果 外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白在DLBCL中同時高表達，其高表達與DLBCL患者AnnArbor分期和國際預后指數（IPI）呈正相關。結論 外周血清microRNA-21過表達可能是DLBCL惡性度高的標志，其檢測的意義可以幫助臨床淋巴瘤診斷危險分組及治療方案選擇。

淋巴瘤；大B細胞；microRNA-21；RT-PCR

彌漫性大B細胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤中最常見的一種類型，占所有NHL的30%～40%，是一類在細胞遺傳學、分子學、臨床表現和對標準治療反應及預后的異質性明顯的疾病。約60%可治愈，但高危組及中樞神經系統(tǒng)及骨髓浸潤預后差，均易復發(fā)難治。其預后與國際預后指數（IPI）、病理生發(fā)中心與非生發(fā)中心、是否遺傳學雙打擊、蛋白水平雙表達、髓外浸潤（尤其骨髓及中樞神經系統(tǒng)）相關明顯，除中心遺傳學染色體核型影響相關，其表觀遺傳學亦影響其預后及治療效果。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類非編碼小分子RNA，長度為21～23個核苷酸，不編碼蛋白質，但能在轉錄后或者翻譯水平上影響基因表達。Lawrie等[1-4]證實了microRNA-21在DLBCL中上調，提示我們microRNA-21在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中也可能發(fā)揮癌基因的作用。然而外周血清中microRNA-21的表達與與DLBCL腫瘤發(fā)生、DLBCL患者Ann Arbor分期、血清β2微球蛋白、國際預后指數（IPI）之間聯系尚未報道。血清microRNA作為腫瘤診斷和預后的標志物，可應用于早期腫瘤的檢測，且檢測損傷小、靈敏度高、穩(wěn)定性好。新近在血清等體液中發(fā)現的循環(huán)miRNA還具有良好的穩(wěn)定性、檢測方便等優(yōu)勢，很可能作為新型生物標志物用于疾病診斷、預后評價、治療反應性以及新藥物和治療方法的尋找。因此本研究完成檢測46例彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL），同時西門子全自動蛋白分析的散射比濁法方法檢測檢測46例DLBCL中的血清β2微球蛋白表達，探討外周血清microRNA-21中DLBCL的表達意義及與血清β2微球蛋白表達是否正相關，是否以幫助臨床淋巴瘤診斷危險分組及治療方案選擇。

表1 血清β2微球蛋白檢測結果

1 材料與方法

1.1 研究對象：收集福建醫(yī)科大學附屬三明第一醫(yī)院血液科2012年4月至2016年4月DLBCL患者治療前后外周血離心后采集血清，在-60°低溫保存46例，A組：Ⅱ～Ⅲ期21例，IPI指數為0～2分，其中GCB型12例，非GCB型9例；B組：Ⅵ期25例，IPI指數為3～5分，其中GCB型10例，非GCB型15例；年齡46～78歲，中位年齡58歲，其中男性34例，女性11例，收集患者診斷均經淋巴結病理及免疫組化確診。治療前患者均未行放化療及其他生物治療。同時采集正常對照人血清46例。

1.2 治療方案：A組：Ⅱ～Ⅲ期21例，IPI指數為0～2分，其中GCB型12例，非GCB型9例，予以CHOP或CHOPE方案化療；B組：Ⅵ期25例，IPI指數為3～5分，其中GCB型10例，非GCB型15例，予以CHOP或Hyper-CVAD+MA方案化療。

1.3 操作步驟：①核酸提??；試劑：TIANGEN miRcute miRNA提取分離試劑盒DP501，操作步驟：詳見試劑盒說明書。②逆轉錄；試劑：TIANGEN miRcute miRNA第一鏈合成試劑盒KR201-01，操作步驟：詳見試劑盒說明書。③熒光定量；儀器：PCR ABI 7500；試劑：TIANGEN miRcute miRNA熒光定量檢測試劑盒FP401，操作步驟：詳見試劑盒說明書。④實驗數據進行內擴增。見表1。

1.4 統(tǒng)計學分析：采用SPSS20統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，計數資料采用單因素方差檢驗進行分析。各組之間表達采用Mann Whitney U檢驗和配對樣本t檢驗，P＜0.05差異具有統(tǒng)計學意義。

表2 彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）患者外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白水平變化（x-±s）

表3 兩組患者采用Mann-Whitney U、Wilcoxon W檢驗結果（x-±s）

表4 Mann-Whitney U檢驗結果

表5 成對樣本相關系數

2 結 果

彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）患者外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白水平變化。見表2。兩組患者采用Mann-Whitney U、Wilcoxon W檢驗結果，見表3。Mann-Whitney U檢驗結果，見表4。成對樣本相關系數，見表5。

采用配對樣本t檢驗，結果相關系數等于0.494＞0說明血清β2微球蛋白與外周血清microRNA-21存在正相關，sig=0.000＜0.05說明相關系數有統(tǒng)計學意義，變量間的確存在正相關。

外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白在A組與B組類別上具統(tǒng)計學意義，在GCB與非GCB類別上無統(tǒng)計學意義；在治療前與治療后有統(tǒng)計學差異，說明治療效果顯著。外周血清microRNA-21中DLBCL的表達意義及與血清β2微球蛋白表達是正相關。

3 討 論

彌漫性大B細胞淋巴瘤發(fā)病與細胞遺傳學、分子學相關，同時可能治療前后存在表觀遺傳學影響。miRNA與腫瘤的關系密切，且在表觀遺傳學研究中，miRNA與表觀遺傳之間可能存在一定的相互作用。miRNA可同時調控多個靶基因，如果靶基因是癌基因，那么microRNA-21表達增加時，靶基因表達增加就可能導致腫瘤發(fā)生。microRNA-21的檢測為惡性淋巴瘤發(fā)生發(fā)展提供一種新的思路，為預后評價、治療反應性以及新藥物和治療方法的尋找提供依據。經前檢測發(fā)現microRNA-21在DLBCL血漿表達較正常人血漿增高，microRNA-21表達與血清β2微球蛋白表達成正比，GCB型與非GCB型microRNA-21之間表達沒有明顯差異，產生不同結果可能與DLBCL的發(fā)生部位不同、臨床分期不同、患者是否接受化療等相關，同時也反映了DLBCL的異質性。結果提示：外周血清microRNA-21中DLBCL的表達意義及與血清β2微球蛋白表達是正相關，提示外周血清microRNA-21過表達可能是DLBCL惡性度高的標志，microRNA-21在DLBCL中高表達，且與臨床分期、IPI、治療前后等相關，提示預后、治療效果，其檢測的意義可以幫助臨床淋巴瘤診斷危險分組及治療方案選擇。為DLBCL的治療前后觀察mirco-RNA表達變化，作為新的切入點，為提高DLBCL的診斷與治療水平開辟了新途徑，但由于病例數少，無法大數據檢測，存在局限性，如果同時檢測患者是否合并遺傳學雙打擊或蛋白水平雙表達，再進行多參數分析，可能可以提高檢測外周血清microRNA-21中DLBCL的表達意義價值。

[1] Fulci V,chiaretti S,Goldoni M,et al.Quantitative technologies establish a novel microRNA profile of chronic lymphocytic leukemia [J].Blood,2007,109(11):4944-4951.

[2] Jongen-Lavrencic M,Sum SM,Dijkstra MK,et al.M icroRNA expression profiling in relation to the genetic heterogeneity of acute myeloid leukemia[J].Blood,2008,111(10):5078-5085

[3] Navarro A,Gaya A,Martinez A,et al.MicroRNA expression profiling in classic Hodgk in lymphoma[J].Blood,2008,111(5):2825-2832.

[4] Lawrie CH,Soneji S,Marafioti T,et al.MicroRNA expression distinguishes between geminal center B cell-like(GCB) and activated B cell-like(ABC) subtypes of diffuse large B cell lymphoma[J].Int J Cancer,2007,121(5):1156-1161.

R733.1

B

1671-8194（2017）13-0115-03