電針刺激天樞穴對急性重癥胰腺炎大鼠肺組織AQP-1表達的影響

聶容榮，潘泓華，文輝，楊華，曾偉星，譚親友，江偉，符文彬，齊立

(1中國人民解放軍第181中心醫院，廣西桂林 541001；2桂林醫學院附屬醫院；3廣東省中醫院)

電針刺激天樞穴對急性重癥胰腺炎大鼠肺組織AQP-1表達的影響

聶容榮1,2，潘泓華1，文輝2，楊華2，曾偉星1，譚親友2，江偉2，符文彬3，齊立1

(1中國人民解放軍第181中心醫院，廣西桂林 541001；2桂林醫學院附屬醫院；3廣東省中醫院)

目的 觀察電針刺激天樞穴對急性重癥胰腺炎大鼠肺組織AQP-1表達的影響。方法 將60只雄性SD大鼠隨機分為正常對照組、正常電針組、模型組、電針模型組，各15只。正常對照組、正常電針組不做任何處理；模型組、電針模型組逆行胰膽管注射5%牛磺膽酸鈉制備急性重癥胰腺炎模型。正常電針組、電針模型組在模型制備成功2 h后，電針刺激大鼠天樞穴。造模8 h后，采用RT-PCR和免疫組化法分別檢測各組大鼠肺組織中AQP-1 mRNA、蛋白。結果 模型組大鼠肺組織AQP-1 mRNA、蛋白表達低于正常對照組和正常電針組(P均<0.05)，電針模型組大鼠肺組織AQP-1 mRNA、蛋白表達高于模型組(P均<0.05)，正常對照組與正常電針組大鼠肺組織AQP-1 mRNA、蛋白表達比較差異無統計學意義。結論 電針刺激天樞穴可升高急性重癥胰腺炎大鼠肺組織AQP-1的表達。

電針刺激；天樞穴；急性重癥胰腺炎；胰源性肺損傷；水通道蛋白-1

急性重癥胰腺炎(SAP)病情兇險，且常并發急性肺損傷(ALI)加重病情。ALI主要病理特征為肺血管內皮細胞及肺泡上皮細胞廣泛性損傷，全身炎癥反應綜合征在肺部表現為肺部彌漫性滲出和難以用單純吸氧糾正的低氧血癥[1]。此種胰源性肺損傷的終末結局為呼吸窘迫綜合征，病死率高達50%～90%[2]，但其發病機制并未完全闡明。水通道蛋白(AQP)作為膜主體內在蛋白家族成員，具有使細胞膜水通透力提升的功能，能夠提供快速液體轉運的途徑。目前有關AQP在ALI或肺部炎癥中作用的研究主要集中在AQP-1和AQP-5。AQP-1主要在氣道周圍毛細血管、淋巴管及肺泡毛細血管內皮細胞和臟層胸膜間皮細胞上表達，參與多種肺損傷性炎癥病理過程[3,4]。中醫理論認為，肺與大腸相表里，肺為嬌臟，陽明腑實，大便不通極易導致肺失宣降而致肺損傷。電針對機體的免疫應激以及炎性因子的釋放起調節作用[5]。天樞穴屬于足陽明胃經經穴，同是大腸腑的募穴，“腑病取募”，電針刺激天樞穴有疏通腸腑、理氣通便作用。前期研究[6]表明，電針刺激可減輕肺損傷。2014年12月～2016年12月，本研究觀察了電針刺激天樞穴對SAP大鼠肺組織AQP-1表達的影響，探討電針刺激天樞穴減輕ALI的可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、試劑與儀器 健康清潔級雄性SD大鼠60只，體質量100～120 g，分籠飼養，自由飲水，喂標準顆粒飼料，室溫(20±2)℃，動物及飼料購自桂林醫學院實驗動物中心。AQP-1抗體、免疫組化試劑盒購自北京中山生物技術有限公司；RT-PCR試劑盒購自成都溶海生物技術有限公司。本研究經桂林醫學院附屬醫院倫理委員會批準。

1.2 動物分組及模型制備 將60只模型大鼠隨機分為正常對照組、正常電針組、模型組、電針模型組共4組，每組15只。所有大鼠術前禁食12 h。模型組和電針模型組大鼠采用20 g/L水合氯醛腹腔注射進行麻醉，腹部剃毛，消毒術區皮膚，無菌條件下經正中切口入腹。在10倍手術顯微鏡下以直徑為0.45 mm聚乙烯導管經胰腺膽管十二指腸乳頭開口入胰膽管，同時在膽管出肝門處用小動脈夾夾閉，用微量泵以0.04 mL/min速度穩定勻速地逆行注射5%牛磺膽酸鈉(0.1 mL/100 g)，3～5 min內注射完，后用動脈夾夾閉近十二指腸的胰膽管10 min。待胰腺組織出現肉眼可見的出血水腫后，于膽胰管匯入十二指腸處、穿刺點近側端予以11-0絲線結扎，撤除2個動脈夾、還納十二指腸入腹，逐層關腹[7]。正常對照組、正常電針組不做任何處理。

1.3 電針刺激方法 模型制備成功2 h后，電針刺激正常電針組和電針模型組大鼠天樞穴。天樞穴定位采用擬人比照法，取大鼠胸腹正中線上，以劍突為一定位點，以恥骨聯合上緣為另一定位點，兩者連線的上2/3與下1/3的交點處旁開5 mm為天樞穴。用特制鼠架將大鼠固定后，穴位周圍剪去腹毛，皮膚常規消毒，用毫針針刺5 mm，接HANS-200A型電針儀，電流強度為0.8～1.3 mA，采用疏密波，2 Hz/15 Hz，治療15 min。

1.4 肺組織AQP-1 mRNA檢測 采用RT-PCR法。各組大鼠均于造模8 h后剖殺，取右肺組織，提取總RNA。AQP-1上游引物序列為5′-ATGGCCAGCGAAATCAAGAAG-3′，下游引物序列為5′-GATATCATCAGCATCCAGGTC-3′。β-actin引物序列上游為5′-GATATCGCTGCGCTCGTCGTC-3′，下游為5′-CATGAGGTAGTCTGTCAGGTC-3′。PCR反應條件：94 ℃預變性5 min，98 ℃變性10 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸10 s，循環30次，72 ℃延伸1 min，最后降至4 ℃結束反應。PCR產物在瓊脂糖凝膠中電泳后采用凝膠成像系統記錄分析。以AQP-1 mRNA與內參β-actin電泳條帶灰度值之比，作為AQP-1 mRNA的相對表達量。

1.5 肺組織AQP-1蛋白檢測 采用免疫組化法。取左肺組織常規脫水、包埋制成蠟塊。PBS代替一抗作為陰性對照，采用SP法按照免疫組化試劑盒說明書操作。每張切片選擇5個高倍鏡視野(×400)，應用圖像分析系統進行灰度掃描，實驗重復3次取均值。

2 結果

模型組大鼠肺組織AQP-1 mRNA、蛋白表達低于正常對照組和正常電針組(P均<0.05)，電針模型組大鼠肺組織AQP-1 mRNA、蛋白表達高于模型組(P均<0.05)，正常對照組與正常電針組大鼠肺組織AQP-1 mRNA、蛋白表達比較差異無統計學意義，見表1。

表1 各組大鼠肺組織AQP-1 mRNA、蛋白表達比較

注：與正常對照組比較，aP<0.05；與正常電針組比較，bP>0.05；與模型組比較，cP<0.05。

3 討論

SAP患者一旦并發ALI其病情將迅速惡化，病死率高，預后較差，是臨床上比較棘手的疾病[8]。有研究[9]表明，細胞因子與炎癥介質過度釋放會引起胰源性肺損傷。AQP-1在肺微血管內皮細胞中含量相對較高[10,11]，肺水腫的嚴重程度與AQP-1表達水平呈負相關[12,13]。上述研究表明AQP-1在調節肺內液體平衡中可能起重要作用，參與了ALI肺水腫的發病過程[14,15]。本研究結果亦表明，與正常對照組及正常電針組比較，模型組大鼠肺組織中AQP-1水平降低。

胰源性肺損傷屬中醫學“心下痛、胃痛”范疇，胰肝相關、肝胃不和，脾胃運化失常，痰濕內生，陽氣被遏，經氣與腑氣運行不通暢，不通則痛而發為本病[16]。中醫生理學認為，肺失肅降，則陽明經大腸經氣運化失調，肺與大腸兩者互為表里，胰肝脾腸統屬消化系統，六腑以通為順，不通則使肺氣上逆，肅降失調，此時如采用通臟之法，清利大腸經，則有益于肅降肺氣，恢復肺之宣降功能復常，肺又助于通調百脈，則諸癥可解[17]。由此可知，通過治大腸腑治療肺病思路有著充分的理論支持依據。

針灸是一種能夠充分激發人體自身潛力和調動整體的調節方法，它主要通過各種物理化學方式(熱刺激、機械刺激、電刺激等)刺激人體相關腧穴，從而使經絡之氣被激發，陰陽協調，最終達到防治疾病的目的。針灸本身具備效之信，若風之吹云的效果，取法得當，可快速宣肺通腑，發揮治療作用。針刺作用的實驗研究已然表明，針刺可充分調動機體自身內源性自限、品質、雙向調節機能，維護機體自身功能平衡。天樞穴位本身屬于足陽明胃經，大腸的募穴，“腑病取募”，有天然通腑治療作用，是治療消化系統疾病最常用的穴位，對胃腸麻痹性腹脹、腹痛具有較好的臨床作用[18]，具備通腑保肺的有關作用[19,20]。本研究結果發現，電針模型組大鼠肺組織AQP-1水平較模型組升高，表明電針刺激天樞穴可上調SAP大鼠肺組織中AQP-1的表達，進而減輕ALI。本研究結果對祖國針灸醫學的推廣應用具有重要的臨床意義。

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廣西高校科學技術研究項目(YB2014273)。

齊立(E-mail： 21658135@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.22.012

R657.5

A

1002-266X(2017)22-0035-03

2017-01-09)