β-半乳糖凝集素3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)變化及意義

張艷紅，趙桂鳳，尹奎夫，劉美華，魏秀平

(1濰坊市婦幼保健院，山東濰坊 261000；2濰坊市人民醫(yī)院)

β-半乳糖凝集素3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)變化及意義

張艷紅1，趙桂鳳2，尹奎夫1，劉美華1，魏秀平1

(1濰坊市婦幼保健院，山東濰坊 261000；2濰坊市人民醫(yī)院)

目的 觀察β-半乳糖凝集素3(Gal-3)在非小細(xì)胞肺癌(NSCIC)組織中的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法 140例NSCIC患者，手術(shù)切除腫瘤組織140例份作為肺癌組，選取其中60例份癌旁組織作為癌旁組，同時(shí)選取60例份肺良性腫瘤組織作為良性組。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測三組組織中的Gal-3，并觀察Gal-3的表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 肺癌組、癌旁組、良性組Gal-3陽性表達(dá)率分別為67.1%、38.3%、43.3%，肺癌組與癌旁組、良性組比較P均<0.05。腺癌、高臨床分期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者Gal-3陽性表達(dá)率較鱗癌、低臨床分期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高(P均<0.01)。結(jié)論 Gal-3在NSCLC組織中高表達(dá)，與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

β-半乳糖凝集素3；肺癌；非小細(xì)胞肺癌；腫瘤預(yù)后

肺癌病死率居全球癌癥首位[1]。由于人體肺內(nèi)缺乏痛覺神經(jīng)分布，雙肺有強(qiáng)大的呼吸功能儲(chǔ)備，早期肺癌患者通常沒有癥狀，大部分肺癌患者就診時(shí)已處于局部晚期或出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，因此深入研究肺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制并盡早干預(yù)其過程具有重要意義[2]。癌基因、原癌基因激活的重要機(jī)制是基因過表達(dá)。β-半乳糖凝集素3(Gal-3)屬于S凝集素、半乳糖凝集素3亞家族，專一識別β-半乳糖苷[3]，在上皮細(xì)胞與免疫細(xì)胞中廣泛表達(dá)。有研究[4]報(bào)道,Gal-3的表達(dá)與乳腺癌、甲狀腺癌等有關(guān)，但其在肺癌中的研究較少。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)為肺癌的常見病理類型[5]，因此本研究觀察了140例NSCLC組織中Gal-3的表達(dá)情況，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年2月～2016年2月在濰坊市婦幼保健院和濰坊市人民醫(yī)院經(jīng)過病理確診的140例NSCIC患者，年齡50～74(59.3±10.2)歲，其中男76例、女64例。入選患者均符合美國聯(lián)合癌癥分類委員會(huì)(AJCC)和國際抗癌聯(lián)盟(UICC)2002年制定的肺癌診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：已行放、化療者；患有間質(zhì)性肺炎等其他肺部疾病者;妊娠期或哺乳期患者。140例患者中鱗癌96例、腺癌44例，中高分化83例、低分化57例，根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(2002版)pTNM病理分期標(biāo)準(zhǔn)I～Ⅱ期67例、Ⅲ～Ⅳ期73例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移86例、無轉(zhuǎn)移54例。手術(shù)切除腫瘤組織140例份作為肺癌組，并選取其中距離癌組織5 cm的癌旁組織60例份作為癌旁組。同時(shí)選取同期因肺良性腫瘤行手術(shù)切除的60例份肺良性腫瘤組織作為良性組。三組患者性別、年齡比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2 Gal-3檢測方法 采用免疫組織化學(xué)方法。鼠抗人Ga1-3單克隆抗體、EliVisionTMplus試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自北京普利萊基因技術(shù)有限公司。將三組肺組織石蠟切片經(jīng)二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水，PBS沖洗3次，140 ℃高壓進(jìn)行抗原修復(fù)，共150 s，自然冷卻后再用PBS沖洗。滴入一抗，陰性對照滴入PBS，4 ℃冰箱過夜。次日PBS沖洗，滴入二抗，37 ℃溫箱內(nèi)孵育30 min。PBS沖洗，滴入DAB顯色劑，最后經(jīng)蘇木素染色，梯度乙醇脫水，二甲苯透明封片。Gal-3主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，當(dāng)出現(xiàn)黃色或黃棕色顆粒時(shí)為陽性表達(dá)。免疫組化結(jié)果由我院兩位資深病理醫(yī)師評定，用染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比的乘積來評分。其中染色強(qiáng)度陰性計(jì)0分、弱計(jì)1分、中計(jì)2分、強(qiáng)計(jì)3分。選擇染色較好的區(qū)域，隨機(jī)選擇連續(xù)的5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野(×400)分別計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)百分比(%)，取其平均值，陽性細(xì)胞≤5%計(jì)0分、>5%～25%計(jì)1分、>25%～50%計(jì)2分、>50%計(jì)3分。將上述兩項(xiàng)積分的乘積<3定為陰性表達(dá)，≥4定為陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

肺癌組、癌旁組、良性組Gal-3陽性表達(dá)率分別為67.1%(94/140)、38.3%(23/60)、43.3%(26/60)，肺癌組與癌旁組、良性組比較P均<0.05，癌旁組與良性組比較P>0.05。Gal-3表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1 Gal-3表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

NSCLC占肺癌的80%～85%，男性發(fā)病多見，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，可能與多種基因出現(xiàn)高表達(dá)有關(guān)。Gal-3是β-半乳糖苷結(jié)合的動(dòng)物凝集素的一種，相對分子質(zhì)量為31 000 Da[7]，由N端結(jié)構(gòu)域、富含甘氨酸、酪氨酸與脯氨酸串聯(lián)重復(fù)序列的結(jié)構(gòu)域、糖識別結(jié)構(gòu)域組成。Gal-3具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長與抑制細(xì)胞的凋亡、參與調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附的過程、參與炎癥反應(yīng)過程、參與調(diào)節(jié)免疫、參與腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移、參與mRNA前體剪接等多種生物學(xué)功能。Gal-3基因的過表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞異常增生，使腫瘤細(xì)胞間的黏附力減弱，增強(qiáng)移動(dòng)性，降低細(xì)胞的分化能力[8]。腫瘤細(xì)胞在黏附力降低的情況下，受到血流沖擊，容易脫離原發(fā)灶出現(xiàn)淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[9]。Takeuchi等[10]研究發(fā)現(xiàn)，Gal-3在正常甲狀腺(0/35)或良性結(jié)節(jié)(1/11)中僅有1例呈陽性表達(dá)，而在乳頭狀和濾泡狀癌中陽性表達(dá)率達(dá)100%。李路等[11]研究表明，NSCLC中Gal-3表達(dá)率高，其高表達(dá)率和NSCLC的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，抑制Gal-3的表達(dá)后，抗腫瘤效應(yīng)顯著增強(qiáng)。李靜等[12]研究表明，NSCLC患者Gal-3的表達(dá)水平與肺部良性病變的患者相比明顯上調(diào)，Gal-3的表達(dá)水平與腫瘤直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯相關(guān)性，腫瘤直徑較大、分化程度較低、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Gal-3水平明顯增加，提示Gal-3的高表達(dá)是NSCLC患者的預(yù)后不良因素。

本研究結(jié)果表明，Gal-3在肺癌組的陽性率較良性組、癌旁組高，Gal-3的表達(dá)與NSCLC的病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，與上述學(xué)者的研究結(jié)果不完全一致，考慮與所選研究對象不同有關(guān)。今后我們將擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步探討Gal-3的表達(dá)水平與腫瘤分化程度的關(guān)系。總之，Gal-3在NSCLC組織中高表達(dá)，與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，可以為臨床醫(yī)師早期診斷NSCLC和判斷患者預(yù)后提供可靠幫助。

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山東省濰坊市衛(wèi)生局科研計(jì)劃項(xiàng)目(2016wsjs009)。

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R734.2

B

1002-266X(2017)22-0061-02

2016-12-11)