蛋白賴氨酸甲基轉移酶SET7/9表達對肝癌細胞增殖、凋亡和遷移的影響

劉宏，顧頁，蔡盈盈，余衛平

(東南大學醫學院 病理學與病理生理學系，江蘇 南京 210009)

·論 著·

蛋白賴氨酸甲基轉移酶SET7/9表達對肝癌細胞增殖、凋亡和遷移的影響

劉宏，顧頁，蔡盈盈，余衛平

(東南大學醫學院 病理學與病理生理學系，江蘇 南京 210009)

肝癌細胞； SET7/9； 細胞增殖； 凋亡； 遷移

1 材料與方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.2 細胞轉染 參考SuperFectinTMⅡ轉染試劑操作說明書。按照實驗設計，將處于對數生長期的細胞分組接種于6孔培養板中，每組2孔，置培養箱中培養24 h。當細胞貼壁且融合度達80%時，將1 μg質粒與3 μl轉染試劑在無血清培養基中混勻后室溫靜置15 min，再均勻地加入待轉染培養細胞中孵育6 h，棄去培養液，加入新的完全培養液。轉染后48 h當熒光顯微鏡下觀察到轉染效率達75%時，采用蛋白免疫印跡法檢測轉染效果。

1.2.4 細胞增殖檢測 將經檢測轉染有效的細胞消化制備單細胞懸液并進行細胞計數，每孔加100 μl細胞懸液，保證細胞均勻分布，每組設6個復孔，同時將其種于96孔板，密度為每孔1 000～2 000個細胞，分別于24、48、72、96 h按凋亡試劑盒說明每孔加入10 μl CCK8凋亡試劑，放入37 ℃、5%CO2培養箱培養1 h，酶標儀測定450 nm波長處各測量孔的OD值以觀察其增殖能力。

1.2.6 Transwell細胞遷移實驗 用8.0 μm膜，上室加入300 μl不含血清及抗體的高糖DMEM培養基及用無血清培養基重懸的2.0×105個腫瘤細胞，下室加入含10%胎牛血清、100 U·ml-1青霉素、100 U·ml-1鏈霉素的高糖的DMEM培養基400 μl，腫瘤細胞會向含有細胞因子、趨化因子營養成分高的下室遷移，計數進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。

1.2.7 統計學處理 采用SPSS 18.0軟件進行統計學分析。數據以均值±標準差表示，兩組間比較用t檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 肝癌細胞株中SET7/9表達狀況

a 與正常肝細胞比較，P<0.05；b 與正常肝細胞比較，P<0.01

圖1 正常肝細胞株與肝癌細胞株中SET7/9表達狀況

Fig 1 Expression of SET7/9 in normal hepatic and four hepatoma cell lines

b 與對照組比較，P<0.01

圖2 兩株肝癌細胞轉染不同質粒后SET7/9表達狀況

Fig 2 Expression of SET7/9 in two liver cancer cell lines transfected with different plasmids

a 與對照組比較，P<0.05

圖3 SET7/9表達變化對肝癌細胞增殖的影響

Fig 3 Effects of altered SET7/9 expression on proliferation of liver cancer cells

aP<0.05

2.5 SET7/9表達對轉染細胞遷移力的影響

bP<0.01

圖5 SET7/9表達變化對肝癌細胞遷移力的影響

Fig 5 Effects of altered SET7/9 expression on migration of liver cancer cells

3 討 論

SET7/9也稱為SET7或SET9，這種稱呼上的差別源于最初報道者的不同命名，其表達基因位于染色體4q28，蛋白產物含保守的SET結構域，相對分子質量約為50[3- 4]。研究發現，SET7/9除了能甲基化組蛋白外，還能使轉錄因子、腫瘤抑制因子、膜相關受體等非組蛋白甲基化[7]。SET7/9所介導的不同非組蛋白賴氨酸甲基化能引發多種細胞效應包括蛋白穩定性改變和基因表達變化，與染色體結構維持、細胞增殖及凋亡調控等相關[3]。

本研究觀察到的肝癌細胞中SET7/9表達狀況及其表達改變對細胞生物學行為的影響，無疑有助于進一步闡明SET7/9的腫瘤細胞效應。最近，Song等[7]發現乳腺癌細胞中SET7/9表達降低會促進細胞增殖、遷移及侵襲力，SET7/9過表達可抑制細胞增殖、遷移及侵襲。Yoshimitsu等[10]發現原發性胃癌細胞中SET7/9明顯降低，抑制胃癌細胞中SET7/9表達會促進細胞增殖、遷移和侵襲，證明SET7/9有抑制胃癌細胞的作用。顯然，這些結果與我們及其他研究者在人肝癌細胞、人肺癌細胞和人卵巢癌細胞等觀察到的情況并不一樣，表明SET7/9對腫瘤細胞生物學調控具有雙重性，在不同組織類型腫瘤細胞呈現不同效應。

至于肝癌細胞中SET7/9表達如何引起細胞增殖、凋亡及遷移力變化，我們認為涉及SET7/9對非組蛋白賴氨酸單甲基化修飾的胞內蛋白功能調控機制。由于不同組織類型腫瘤中SET7/9對一些重要因子的甲基化作用或增加(如p53、ER)或降低(如p65、DNMT1)蛋白穩定性，或促進其空間變構(如AR)，繼而改變它們的轉錄活性，影響靶基因表達[3]，這會誘發不同類型細胞不同的細胞生長與行為學效應。通過深入研究SET7/9調控肝癌細胞的增殖、凋亡和遷移的具體機制，有望讓SET7/9成為新的肝癌診斷生物標志物與治療藥物作用靶點。

[5] 汪淵.蛋白甲基化修飾酶SET7/9對p53缺失人肺癌細胞的凋亡效應及其機制[D].南京：東南大學,2014.

Effects of protein lysine methylation transferase SET7/9 expression on proliferation,apoptosis and migration of liver cancer cells

(DepartmentofPathologyandPathophysiology,SchoolofMedicine,SoutheastUniversity,Nanjing210009,China)

hepatic cancer cell; SET7/9; cell proliferation; apoptosis; migration

國家自然科學基金資助項目(81071654)

R735.7； R318

A