卵巢癌中E2通過ERα降低順鉑敏感性的研究

李文媛，牛強，宋麗華

(1.長治醫學院 藥學系，山西 長治 046000； 2.中國人民解放軍火箭軍總醫院，北京 100032)

·論 著·

卵巢癌中E2通過ERα降低順鉑敏感性的研究

李文媛1，牛強2，宋麗華1

(1.長治醫學院 藥學系，山西 長治 046000； 2.中國人民解放軍火箭軍總醫院，北京 100032)

卵巢癌是最致命的婦科癌癥，約70%的患者被診斷出時已是晚期。目前卵巢癌的標準治療是手術，然后是基于鉑類的化療[1]；但其因對鉑的敏感性降低而容易復發[2]。因此了解卵巢癌如何變得鉑耐受并開發針對鉑抗性卵巢癌的分子靶向治療非常重要。

細胞存活和凋亡之間的平衡可以評價腫瘤細胞對化學治療劑的敏感性。我們發現Akt和ERK通路在卵巢癌細胞中被順鉑激活，并且參與卵巢癌細胞對順鉑的耐受性調節。在卵巢癌細胞中，ER拮抗劑氟維司群(ICI)可以改善順鉑對卵巢癌細胞的功效。然而，尚不知道ERα激活是否會誘導卵巢癌的鉑抗性。在本研究中，我們檢測了順鉑是否通過激活ERK或Akt通路誘導ERα的磷酸化，同時還研究了E2介導的ERα激活對順鉑敏感性的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器

1.2 細胞培養

1.3 siRNA轉染

1.4 細胞增殖、活性及凋亡實驗

1.5 蛋白質印跡

1.6 熒光素酶測定

使用熒光素酶試劑盒檢測。去掉細胞培養基，使用PBS洗3次。加入裂解液，充分裂解后10 000×g離心5 min，取上清用于測定。融解螢火蟲螢光素酶檢測試劑和海腎螢光素酶檢測緩沖液，并達到室溫。按照每個樣品需100 μl的量，取適量海腎螢光素酶檢測緩沖液，按照1∶100加入海腎螢光素酶檢測底物(稀釋100倍)配制成海腎螢光素酶檢測工作液。每個樣品測定時取樣品100 μl。加入100 μl螢火蟲螢光素酶檢測試劑，用槍打勻后測定相對光單位(relative light unit，RLU)。

1.7 統計學處理

所有數據均采用SPSS 19.0進行統計分析。組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，LSD用于進一步的兩兩比較。P<0.05認為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 下調ERα可抑制E2誘導的卵巢癌細胞增殖

2.2 順鉑可誘導ERα在絲氨酸118位點處的磷酸化及其轉錄活性

圖2 順鉑可誘導ERα的磷酸化及轉錄活性 A.順鉑誘導ERα在絲氨酸118位點處的磷酸化；B.分別為0.1 μmol·L-1E2、10 μmol·L-1ICI和100 μmol·L-1順鉑的不同組合對ERα轉錄活性的影響；C.分別為100 μmol·L-1順鉑、10 μmol·L-1LY294002和10μmol·L-1PD98059的不同組合對ERα、AKT和ERK磷酸化的影響；aP<0.05，bP<0.005

2.3 E2通過ERα拮抗順鉑誘導的細胞毒性

圖3 E2通過ERα拮抗順鉑誘導的細胞毒性 A、B.分別為0.1 μmol·L-1E2、10 μmol·L-1ICI和100 μmol·L-1順鉑的不同組合對卵巢癌細胞活性的影響；C.0.1 μmol·L-1E2、10 μmol·L-1ICI和100 μmol·L-1順鉑不同組合的IC50檢測；D、E.ERα被下調后，0.1 μmol·L-1E2和100 μmol·L-1順鉑的不同組合對細胞活性的影響；aP<0.05，bP<0.01

3 討 論

本研究結果與其他報道一致，都表明E2通過對ERK和Akt的調節進而促進ERα表達，從而誘導細胞增殖，但并無相關報道說明順鉑在卵巢癌細胞中可激活ERα。本研究發現順鉑可誘導ERα在絲氨酸118處的磷酸化，PD98059(ERK抑制劑)而不是LY294002(PI3K/Akt抑制劑)降低順鉑誘導的ERα活化。這些研究結果表明ERK可能是順鉑誘導卵巢癌細胞ERα激活的主要機制。

激素ERα靶向治療可預防ERα陽性乳腺癌復發并降低死亡率，然而，卵巢癌中對ERα靶向治療的反應有限，他莫昔芬(一種選擇性雌激素受體拮抗劑)對復發性卵巢癌的臨床反應率為48%[7]。此外，在卵巢癌的治療中，與一線化療藥物和他莫昔芬聯合治療并未提高藥物的細胞毒性[8]。然而，以前的臨床研究并沒有觀察ERα的表達，需要進一步的研究來評價ERα表達情況與他莫昔芬療效之間的關聯。ICI是一種新型的雌激素受體拮抗劑，其可競爭性結合ER，結合能力比他莫昔芬大約100倍，這種結合可誘導ER的快速降解，導致E2誘導的轉錄活性的抑制[9- 10]。在ERα陽性復發性卵巢癌中，ICI的Ⅱ期研究表明，幾乎一半的患者具有臨床療效，并且沒有發展成2、3或4期腫瘤，ICI在復發性卵巢癌患者中具有良好的耐受性和有效性[11- 12]。在本研究中，ICI雖不能增加順鉑的療效，但可抑制E2誘導對順鉑細胞毒性的保護作用，因此，ICI可能用于在E2高表達的卵巢癌中與順鉑聯合治療。

綜上，順鉑激活的ERα可被ERK調節，同時，E2誘導的ERα激活可降低順鉑的細胞毒性，這種降低是通過抑制卵巢癌細胞的凋亡實現的。我們還發現，ERα表達的下調可通過抑制E2誘發的對順鉑的抗性的拮抗作用，ERα可能是一個潛在的治療靶標，并可應用于鉑抗性卵巢癌的治療。此外，以前的臨床研究表明ERα靶向治療在卵巢癌中效果有限。因此，在ERα靶向治療中，新型的ER阻斷劑ICI用于卵巢癌治療新策略十分重要，并且需要選擇ERα高表達的患者，這對卵巢癌患者的治療十分有益。

[3] CHAN K K,LEUNG T H,CHAN D W,et al.Targeting estrogen receptor subtypes (ERα and ERβ) with selective ER modulators in ovarian cancer[J].J Endocrinol，2014,221(2):

E2 reduces the sensitivity of cisplatin in ovarian cancer

(1.DepartmentofPharmacy,GraduateSchoolofChangzhiMedicalCollege,Changzhi046000,China；2.GeneralHospitalofChinesePeople’sLiberationArmyRocketForce，Beijing100032,China)

R737.31

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