URP1基因在肺癌組織中的表達及其意義

周鑫　漆濱　潘朝陽

[摘要] 目的 研究URP1基因在肺癌組織中的表達及其意義。 方法 應用免疫組化SP法檢測152例肺癌組織和152例配對癌旁正常肺組織中的URP1表達情況。 結果 URP1基因在肺癌組織中的表達明顯高于正常肺組織（P<0.05），在非小細胞肺癌中高表達，在小細胞肺癌中低表達；URP1在鱗癌的表達高于腺癌（P<0.05）和大細胞癌（P<0.05），腺癌與大細胞癌之間比較差異無統計學意義（P>0.05）；URP1基因表達水平與鱗癌的分化程度呈正相關（P<0.05）。結論 URP1基因參與肺癌的發生及發展過程。

[關鍵詞] 肺腫瘤；基因表達；URP1；免疫組化；整合素

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）16-0004-03

[Abstract] Objective To study the expression and significance of URP1 gene in lung cancer tissues. Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of URP1 in 152 cases of lung cancer tissues and 152 cases of paired paracancer normal lung tissues. Results The expression of URP1 in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal lung tissues （P<0.05）. URP1 was highly expressed in non-small cell lung cancer and was lowly expressed in small cell lung cancer.The expression of URP1 in squamous cell carcinoma was higher than that in adenocarcinoma（P<0.05） and large cell carcinoma （P<0.05）. There was no significant difference in the expression of UPR1 between adenocarcinoma and large cell carcinoma.The expression level of URP1 protein was positively correlated with the degree of differentiation of squamous cell carcinoma（P<0.05）. Conclusion URP1 gene is involved in the development and progression of lung cancer.

[Key words] Lung neoplasms； Gene expression； URP1； Immunohistochemistry； Integrin

肺癌作為嚴重危害人類健康的最常見惡性腫瘤，在我國癌癥死因構成比中已超過20%，且發病率和死亡率一直呈上升趨勢[1]；肺癌起源于肺泡上皮細胞和支氣管黏膜柱狀上皮細胞，其發展過程中機體多種基因和蛋白異常表達，并起促進作用[2]。URP1是新近研究證實的整合素激活分子，其可能具有調節整合素的作用，并促進細胞間黏附作用的改變，從而影響腫瘤的發生發展[3]。本實驗應用免疫組化法檢測正常肺組織及肺癌組織中的URP1表達，以探討URP1基因表達與肺癌發生及發展的關系。

1 材料與方法

1.1 材料來源

選擇2014年11月～2016年12月我院胸外科手術切除留取的新鮮肺癌組織及配對癌旁正常肺組織用于免疫組織化學染色分析，經病理學醫師確診后納入。共入組152例，其中男83例，女69例；鱗癌65例，腺癌43例，大細胞癌21例，小細胞癌23例，術前均無化療和放射治療史，所有樣本進行URP1基因免疫組織化學染色。

1.2 免疫組織化學法

采用URP1兔抗人多克隆抗體U1610-01（1∶1000美國United States Biological公司，Swampscott，MA）和Dako二步法抗兔免疫組織化學檢測試劑盒（EnVision+/HRP/Rb；顯色劑：Dako Liquid DAB Substrate Chromogen System）進行檢測。實驗步驟：將石蠟切片脫蠟水化，過氧化氫消除內源性過氧化物酶后進行抗原修復（高壓熱修復法），滴入URP1兔抗人多克隆抗體，孵化過夜，洗滌，加入二抗，洗滌，蘇木素復染，脫水，封片，鏡檢。

1.3 結果評定標準

采用染色廣度及強度雙評分標準評估蛋白表達[4]：染色廣度計算染色細胞所占比例，染色深度分為4級0～3+。陰性：染色廣度<10%；弱陽性：深度1+/廣度<50%或深度2+/廣度<30%；中等陽性：深度2+/廣度30%～60%或深度3+/廣度<30%；強陽性：深度2+/廣度>60%或深度3+/廣度>30%。陰性和弱陽性為低表達，中等陽性和強陽性為高表達。

1.4 統計學方法

使用SPSS 14.0統計分析軟件，計數資料采用χ2檢驗，對于理論頻數<5時，采用Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 URP1基因在正常肺組織和肺癌組織中的表達

URP1基因在正常肺組織和肺癌組織中的表達：URP1基因陽性表達呈棕黃色，其在肺癌組織和正常肺組織中的陽性表達率分別為53.3%（81/152）和8.6%（13/152），兩者之間比較差異有統計學意義（χ2=69.5，P<0.05）。

2.2 URP1基因在不同病理類型肺癌組織中的表達

URP1基因在非小細胞癌的陽性表達率均高于小細胞癌（χ2=10.4，P<0.05）；在非小細胞肺癌亞型中，URP1基因陽性表達率：鱗癌大于腺癌（χ2=9.7，P<0.05）及大細胞癌（χ2=8.9，P<0.05），差異有統計學意義，大細胞癌與腺癌之間差異無統計學意義（χ2=0.2，P>0.05）。見表1。

2.3 URP1基因在高、中、低分化程度的肺癌組織中的表達

高、中、低分化鱗癌之間URP1基因陽性表達率差異有統計學意義（χ2=25.4，P<0.05），高分化鱗癌URP1基因陽性表達率高于中分化鱗癌（χ2=4.6，P<0.05），中分化鱗癌表達陽性率高于低分化鱗癌（χ2=4.8，P<0.05），分化越好者URP1基因表達陽性率越高。但腺癌分化程度與URP1基因陽性表達率之間差異無統計學意義（χ2=0.09，P>0.05）。見表2。

3 討論

整合素分子是一種細胞黏附受體，在細胞黏附、細胞遷移、胚胎發育、損傷修復等過程中發揮關鍵作用，通過介導細胞外基質與細胞及細胞與細胞間的黏附作用，直接刺激細胞增殖、抑制凋亡并介導血管生成等過程，參與腫瘤的生長與發展[5-7]。

URP1是新近研究證實的整合素激活分子，位于染色體20p12.3，與新桿狀線蟲中的UNC-112蛋白同源，在整合素活化中發揮重要作用，參與整合素的雙向信號傳導[8，9]。近些年其與腫瘤的關系逐漸被揭示，Kloeker[10]研究顯示URP1基因在70%的結腸癌和60%的肺癌中表達上調，定量PCR檢測其在結腸癌表達上調4倍以上，肺癌表達上調60倍以上，國內研究也表明URP1基因mRNA和蛋白表達在結腸癌中均上調，提示URP1基因參與結腸癌發生發展，并與腫瘤轉移相關[11]。

本研究通過免疫組織化學技術檢測不同病理類型肺癌中URP1基因表達，發現URP1基因在肺癌組織表達明顯高于正常肺組織，證實UPR1基因參與了肺癌的發生發展過程，其機制可能與依賴TGF-β信號通路的EMT上皮間質轉化（EMT）有關，EMT在腫瘤的復發與轉移過程中扮演著重要的作用[12]，URP1基因FERM功能域可與整合素B亞單位結合，形成黏著斑復合物，并通過TGF-β信號通路調控EMT，從而促進肺癌的發生和發展[4]。

肺癌按病理組織學可分兩大類：小細胞癌和非小細胞癌，其中小細胞癌占比接近20%，非小細胞癌占比超過80%，非小細胞癌又包括鱗癌、腺癌、大細胞癌，鱗癌、腺癌又可分為高分化、中分化、低分化，不同病理分化類型的肺癌的治療及預后存在差異，分化越低其生長速度越快，越早出現轉移，預后越差[13]。通過本實驗我們發現不同病理類型的肺癌組織URP1陽性表達率也存在差異：鱗癌>腺癌>小細胞癌，揭示URP1基因表達可能與肺癌細胞起源相關聯，起源于上皮細胞的鱗癌、腺癌陽性表達率高，而神經內分泌起源的小細胞癌陽性表達率低，另一方面，高分化鱗癌的URP1基因陽性表達率高于中分化鱗癌 ，中分化鱗癌表達陽性率高于低分化鱗癌，分化越好者URP1基因表達陽性率越高，提示URP1基因可能影響肺癌細胞的機動性、趨化性及侵襲性，URP1高表達的腫瘤侵襲、遷移能力相對較弱，惡性程度相對較低，反之亦然，其具體調節機制尚需進一步研究。

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（收稿日期：2017-04-05）