骨肉瘤組織中血管內皮細胞生長因子、基質金屬蛋白酶-2的表達及其臨床意義

王 楠，王璐瑤，楊國輝，陳聚伍

(1. 鄭州大學第一附屬醫院急診外科，河南 鄭州 450052；2. 鄭州大學第一附屬醫院口腔科，河南 鄭州 450052)

骨肉瘤組織中血管內皮細胞生長因子、基質金屬蛋白酶-2的表達及其臨床意義

王 楠1，王璐瑤2，楊國輝1，陳聚伍1

(1. 鄭州大學第一附屬醫院急診外科，河南 鄭州 450052；2. 鄭州大學第一附屬醫院口腔科，河南 鄭州 450052)

目的 探討骨肉瘤組織中血管內皮生長因子(VEGF)、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)的表達及其臨床意義。方法 采用免疫組化S-P法檢測68例骨肉瘤和30例正常骨組織中VEGF、MMP-2的表達，并分析兩者與骨肉瘤的臨床病理參數之間的關系。結果 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的陽性率均高于正常骨組織(P<0.05)。骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達均與患者的軟組織浸潤、臨床分期有關(P<0.05)。骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達呈正相關關系(r=0.637，P<0.05)。結論 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2存在高表達，兩者可能協同參與了骨肉瘤的發生、發展、浸潤、轉移等。

骨肉瘤；血管內皮生長因子；基質金屬蛋白酶-2

骨肉瘤是一種青少年高發的原發性惡性骨腫瘤，發病率居原發性惡性骨腫瘤的前列。骨肉瘤的發生、發展、浸潤、轉移受多因素的影響，多種因子參與其具體過程。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是作用較強的一種促血管生成因子，是惡性腫瘤新生血管形成的關鍵影響因素[1]?；|金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)是MMPs家族成員之一，廣泛參與腫瘤組織的浸潤、轉移等[2]。作者采用免疫組化S-P法檢測骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2蛋白表達，并分析兩者與骨肉瘤臨床病理特征之間的關系。

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1 資料與方法

1.1 一般資料 入組鄭州大學第一附屬醫院2013年1月至2016年6月收治的經病理學確診的骨肉瘤患者68例，男41例，女27例；年齡9～46歲，其中≤18歲者42例，>18歲者26例；腫瘤大小:≤4 cm者37例，>4 cm者31例；腫瘤部位：四肢49例，軀干19例；組織類型：骨母細胞型30例，軟骨母細胞型26例，纖維母細胞型12例；臨床分期(Eneeking分期)：Ⅱ級43例，Ⅲ級25例；有軟組織浸潤48例，無軟組織浸潤20例。并選取同期在鄭州大學第一附屬醫院住院的非瘤性骨折患者30例作為對照，其中男20例，女10例，年齡10～50歲。2組患者的性別、年齡等具有可比性(P>0.05)。

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1.2 主要試劑 S-P免疫組化試劑盒、DAB顯色劑、VEGF鼠抗人單克隆抗體、MMP-2鼠抗人單克隆抗體等均購自北京中山金橋生物技術有限公司。

1.4 免疫組化結果判定 VEGF、MMP-2定位于細胞質中，以細胞染色呈棕黃或黃褐色為陽性，選取至少10個高倍鏡(×400)視野，計數陽性細胞數，評價染色強度，然后根據陽性細胞數評分和染色強度評分綜合評判染色結果[3]。

1.3 VEGF、MMP-2的檢測 按照S-P免疫組化試劑盒說明采用免疫組化S-P法檢測骨肉瘤和正常骨組織中VEGF、MMP-2蛋白表達，以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知VEGF、MMP-2陽性切片作為陽性對照。

2.2 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達與其臨床病理參數的關系 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達均與患者的軟組織浸潤、臨床分期有關(P<0.05)。見表1。

2.1 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的陽性率分別為70.59%(48/68)、73.53%(50/68)，均高于正常骨組織的10.00%(3/30)、16.67%(5/30)，差異均有統計學意義(P均<0.05)。

2 結果

1.5 統計學處理 采用SPSS 19.0進行統計學分析，VEGF、MMP-2的陽性率等計數資料比較采用χ2檢驗，骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的相關性分析采用Spearman相關性分析法，檢驗標準α=0.05。

“貴州大學當時有兩個優勢學科，一個是計算機軟件，另一個是農藥學。按當時政策，可以傾斜照顧一個學科，另一個需參加正常評審。后來，貴州大學的農藥學先通過評審，并將消息通知了計算機學科評議組。我作為評議組秘書，并沒有急于轉達這個消息，從而使得計算機軟件學科也順利通過評審。”

表1 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達與其臨床病理參數的關系

2.3 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2表達的相關性 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達呈正相關關系(r=0.637，P<0.05)。見表2。

表2 骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2表達的相關性

注：r=0.637，P<0.05

3 討論

骨肉瘤是一種青少年高發的原發性惡性骨腫瘤，其發生、發展、浸潤、轉移等生物學行為受多因素的影響，多種基因和蛋白參與其具體過程。骨肉瘤的診斷和治療隨著影像學、病理學技術的進步以及治療手段的豐富得到了快速發展。目前，其確診主要依靠病理學檢查，治療主要是手切除輔以化療、靶向治療等。但是骨肉瘤臨床上的確診和復發仍是難以解決的問題。所有腫瘤的增大和疾病進展均離不開新生血管的形成。VEGF是作用較強的一種促血管生成因子，在多種實體瘤的進展中具有重要作用[4-5]。MMP-2在細胞外基質和基底膜的降解中發揮關鍵作用，而細胞外基質和基底膜的降解是腫瘤周圍浸潤的生物學基礎，因此MMP-2廣泛參與腫瘤組織的浸潤、轉移等[6]。作者采用免疫組化S-P法檢測骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2蛋白表達，并分析兩者與骨肉瘤臨床病理特征之間的關系。

本研究結果顯示，骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的陽性率均高于正常骨組織(P<0.05)。骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達均與患者的腫瘤大小、軟組織浸潤、臨床分期有關(P<0.05)。骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2的表達呈正相關關系(r=0.637，P<0.05)。這與有關研究[7-8]結果相似。

目前防汛抗旱業務工作中，對實況和預報降水過程都缺少定量化描述。天眼系統將在未來兩三年內，定量化分析歷史降水過程，結合氣象部門對降水過程強度等級劃分的相關規定，研究確定降水過程定量化描述方法，逐步實現實況和預報降水過程的定量化描述應用，為防汛抗旱業務工作提供更好地指導作用。

綜上所述，骨肉瘤組織中VEGF、MMP-2存在高表達，兩者可能協同參與骨肉瘤的發生、發展、浸潤、轉移等。

[1] 趙文靜，錢紅燕，李靖，等. 血管內皮生長因子在肝癌血管內皮細胞體外管腔形成中量效和時效局限性的實驗研究[J]. 腫瘤基礎與臨床, 2016,29(4):284-290.

[2] 尹磊,高惠妮,龐超,等. 眼瞼基底細胞癌組織中基質金屬蛋白酶-2、基質金屬蛋白酶-7的表達[J]. 腫瘤基礎與臨床，2016，29(6):465-467.

[3] 王光茂，原銀萍，趙翠秀,等. 結腸癌組織MMP-2和MMP-9及VEGF表達臨床意義的研究[J]. 中華腫瘤防治雜志，2011，18(16):1267-1269.

[4] 吳同中，孟彥. 老年骨肉瘤組織中MMP-7和VEGF的表達及其意義[J].中國老年學雜志,2012,32(3)：606-607.

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[8] 周錢宏，劉愛東. 骨肉瘤組織中MMP-2、MMP-9的表達及意義[J].山東醫藥,2009,49(14):35-36.

Expressions of Vascular Endothelial Growth Factor and Matrix Metalloproteinase-2 in the Osteosarcoma

WANG Nan1, WANG Luyao2, YANG Guohui1, CHEN Juwu1

(1.DepartmentofEmergencySurgery,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;2.DepartmentofStomatology,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

Objective To investigate the expressions of vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) in the osteosarcoma and their clinical significance.Methods Immunohistochemical S-P method was used to detect the expressions of VEGF and MMP-2 in the 68 cases of osteosarcoma and 30 cases of normal bone tissues, their relationship with clinicopathological parameters were analyzed.Results The positive rate of VEGF and MMP-2 in the osteosarcoma were higher than those in the normal bone tissue (P<0.05). The expressions of VEGF and MMP-2 in the osteosarcoma were related with tumor size, soft tissue infiltration and clinical stage (P<0.05). In the osteosarcoma, the expression of VEGF was negatively related with MMP-2 (r=0.637,P<0.05).Conclusion high expressions of VEGF and MMP-2 in the osteosarcoma are related to the development, infiltration and metastasis of osteosarcoma.

osteosarcoma; vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinase-2

國家自然科學基金青年基金資助項目(編號：81603471)

王楠(1982-)，男，博士在讀，主治醫師，主要從事骨外科臨床工作。E-mail：alpha19820607@163.com

10.3969/j.issn.1673-5412.2017.03.003

R738.1；R730.23

A

1673-5412(2017)03-0192-03

2016-10-29)