SH2B1基因多態性與妊娠糖尿病的相關性研究

孫桂霞，王寧，張紅霞，楊少琴

（河南大學淮河醫院 婦產科，河南 開封 475000）

SH2B1基因多態性與妊娠糖尿病的相關性研究

孫桂霞，王寧，張紅霞，楊少琴

（河南大學淮河醫院 婦產科，河南 開封 475000）

目的 探討SH2B1基因多態性與妊娠糖尿病患者胰島素抵抗的關系。方法選取164例妊娠期糖尿病（GDM）患者和130例糖耐量正常孕婦。采用限制性片段多態性聚合酶鏈反應檢測SH2B1基因型，并且分析相關臨床資料。結果GDM組SH2B1（rs4788102）基因GA型與GG型比較，差異有統計學意義[＾OR=1.531，（95%CI：1.093，2.374）P=0.04]，A等位基因頻率與G等位基因頻率比較，差異有統計學意義[＾OR=1.436，（95%CI：1.091，1.972）P=0.01]。GDM組GA+AA基因型與GG基因型比較，差異有統計學意義[＾OR=1.699，（95%CI：1.185，2.479）P=0.02]。GDM組中GA+AA基因型體重指數、三酰甘油、瘦素及穩態模型評估胰島素抵抗指數與GG基因型比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。經Logistic回歸分析顯示，GA+AA基因型為穩態模型法測定胰島素抵抗指數升高的危險因素。結論SH2B1（rs4788102）基因多態性可能是GDM的一個易感位點，監測孕婦該基因位點，可以用于GDM發生風險的預測。

妊娠糖尿病；SH2B1基因多態性；胰島素抵抗

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指妊娠期孕婦首次發生不同程度的糖代謝異常，其嚴重危及母兒健康，并與多種不良妊娠結局有關，如妊娠高血壓和巨大兒、早產兒及新生兒低血糖等密切相關[1]。SH2銜接蛋白（SH2 adaptor protein，SH2B1）是一種信號分子，參與瘦素（Leptin）、胰島素等多種激素的受體信號傳導途徑，流行病學發現SH2B1單核苷酸多態性與肥胖、胰島素抵抗相關[2]。大量研究已經證實，GDM患者與血脂代謝異常相關[3-4]。本研究旨在探討 SH2B1（rs4788102）基因多態性與GDM的關系，從而為臨床診斷GDM的發病風險提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2014年4月-2015年9月在河南大學淮河醫院產科門診接受常規產前檢查的孕24～28周妊娠婦女，行 50g糖篩查（sugar screening test，GCT），1 h血糖（blood glucose，PG）≥7.8 mmol/L者行 100 g糖耐量試驗（oral glucose tolerance test，OGTT），檢測空腹血糖（fasting blood glucose，FPG）和 1、2及 3 h PG含量，參照樂杰主編[5]的《婦產科學》（第7版）和2010年美國糖尿病學會有關于GDM的診斷標準：①FPG≥5.3 mmol/L；②1 h PG≥10.0 mmol/L；③2 h PG≥8.6 mmol/L；④3 h PG≥7.8 mmol/L，當滿足≥2項則診斷為GDM，不滿足要求則為非GDM[6]。根據診斷標準GDM患者164例（GDM組），年齡25～38歲，平均（27.69±4.02）歲；分娩孕周 39～42周，平均（39.87±1.69）周。非GDM組患者130例（Non-GDM組），年齡 25～38歲，平均（27.96±3.99）歲；分娩孕周39～43周，平均（39.39±2.07）周。所有受試對象均已經排除其他妊娠合并癥以及心、腦、肝、腎及肺等慢性病史，簽訂知情同意書。所有研究對象均行常規產檢至分娩，由專人隨訪記錄相應妊娠結局。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與試劑 全自動生化分析儀（7600-120型，日本 Hitachi公司），電冰箱（KA62NV00型，德國Siemens公司），低溫臺式離心機（MINISPIN型，德國Eppendorf公司），核酸蛋白測定儀（170-2525EDU型，美國BIO-RAD公司），聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增儀（9700 型，美國ABI公司），瓊脂糖水平電泳儀（DYCP-31BN型，北京六一儀器廠），凝膠成像系統（Tanon 3500型，上海天能科技有限公司）。

DNA提取試劑盒（美國Promega生物試劑公司），PCR Master Mix（加拿大 Fermentas公司），Bsh-FI內切酶（北京NEB公司），DNA Marker（大連寶生生物工程有限公司），空腹胰島素試劑盒（深圳市科潤達生物工程有限公司）。

1.2.2 一般臨床資料及生化指標測定 由產科醫師詳細詢問并記錄受試對象的年齡、身高、體重、血壓及體重指數（body mass index，BMI）等。產檢時抽取周靜脈血，測定生化指標，主要有：氧化酶法測定總膽固醇（total cholesterol，TC）及三酰甘油（Triglyceride，TG）；計算法測定高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）及FPG；化學發光法測定空腹胰島素（fasting insulin，Fins）；穩態模型法測定穩態胰島素評價指數（homeostasismodelassessment-insulin resistance，HOMA-IR）；酶聯免疫吸附試驗法測定Leptin。

1.2.3 DNA提取 取血標本2 ml，采用基因組DNA快速提純試劑盒提取DNA，紫外分光光度計檢測DNA的濃度和純度，純度要求A260/A280≥1.8，置于-40℃冰箱冷凍保存備用。

1.2.4 引物合成 按照相關文獻設計引物，由上海英駿生物科技工程有限公司合成。采用Light Scanner Primer Design 軟件設計 SH2B1（rs4788102）基因相應位點引物，均采用小片段擴增引物。PCR正向引物：5'-CTGAGCATGCGTAACTACGCTCGTGCATACG GTC-3'，反向引物：5'-TCGTACTAAACGCAGCACCG ATCA-3'。

1.2.5 目的基因擴增 PCR擴增體系為25 μl，其中含有5 μl PCR Mix，2 u taq酶及正、反向引物各0.5 μl，1μl LC Green 和 1 μl DNA 模板，剩余加入雙蒸水。SH2B1（rs4788102）基因擴增反應：95℃預變性 2 min，95℃變性 30 s，56℃退火 30 s，72℃延伸 45 s，94℃變性 30 s，30℃退火 30 s，共 40 個循環后73℃延伸5 min，限制性內切酶為BshFI。取PCR產物10 μl，在含有2%瓊脂糖凝膠上電泳，溴化乙錠染色，紫外線透射儀觀察PCR擴增，鑒定其特異性。全部測序由美國ABI公司完成。為進一步準確測定基因分型結果，隨機選取10%的樣本用直接測序法進行驗證。

1.3 統計學方法

數據分析用SPSS 19.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，用t檢驗，非正態分布資料以中位數（四分位距）表示，用非參數秩和檢驗；計數資料以率表示，用χ2檢驗。群體基因型采用Hardy-Weinberg平衡檢驗。基因多態性對GDM胰島素抵抗的影響用非條件的Logistic回歸分析，并經多重檢驗P值的Bonferroni進行校正，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因型及擴增結果

還有積薪師父！他的棋室也是星雨喜歡待的地方。星雨他們剛來萬花谷的時候，春雨綿綿，乍暖還寒，王積薪聽子虛道人烏有先生兩個老家伙回來講，說有四個孩子誤打誤撞，破了媼婦譜，忙親自跑到弘道部來，見到袁安、李離、上官星雨三人，又是作揖又是打拱，一定要東方宇軒作證，由他來拜三個少年做老師：“破解媼婦譜是我一生的志業，現在大功告成，你們三個就是我的恩人，小師父在上受我一拜！”

SH2B1（rs4788102）位點酶切中呈現1條亮的且長度為287 bp的條帶為AA型；出現109、128和287 bp 3條亮帶的為GA型，出現在109和128 bp 2條亮帶為GG型。隨機選取SH2B1（rs4788102）的PCR擴增產物行基因測序，結果顯示堿基的改變與酶切結果一致。見附圖。

2.2 兩組患者臨床資料及生化指標的比較

附圖 SH2B1（rs4788102）不同基因型電泳圖

GDM 組 GCT 為（9.32±1.79）mmol/L、Non-GDM組為（6.24±1.48）mmol/L，經 t檢驗，差異有統計學意義（t=10.962，P=0.007）；GDM 組 FPG 為（5.65±0.49）mmol/L、Non-GDM 組為 （4.45±0.42）mmol/L，經 t檢驗，差異有統計學意義（t=5.893，P=0.033）；GDM 組 TC 為（5.98±0.83）mmol/L、Non-GDM 組為（4.73±0.69）mmol/L，經 t檢驗，差異有統計學意義（t=4.724，P=0.042）；GDM 組 TG 為（2.29±0.84）mmol/L、Non-GDM 組為（1.46±0.42）mmol/L，經 t檢驗，差異有統計學意義（t=12.032，P=0.000）；GDM 組 Fins為（14.36±1.30）mIU/L、Non-GDM 組為（10.09±0.73）mIU/L，經 t檢驗，差異有統計學意義（t=4.697，P=0.041）；GDM 組 HOMA-IR 為（3.89±0.43）、Non-GDM組為（2.77±0.23），經t檢驗，差異有統計學意義（t=8.556，P=0.017）；GDM 組 2 型糖尿病 （type 2 diabetes mellitus，T2DM）家族史為 39.63%，Non-GDM組為17.69%，經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=6.113，P=0.026），GDM 組 GCT、FPG、TC、TG、Fins、HOMA-IR及T2DM家族史發生率均高于Non-GDM組。GDM 組 Leptin 為（17.65±6.37）ng/ml、Non-GDM組為（23.89±7.04）ng/ml，經 t檢驗，差異有統計學意義（t=10.175，P=0.007）；GDM組 HDL-C 為（0.62±0.25）mmol/L、GDM 組為（0.95±0.34）mmol/L，經 t檢驗，差異有統計學意義（t=8.914，P=0.013）。見表1。

2.3 兩組患者SH2B1（rs4788102）基因頻率與等位基因頻率分布

GDM組SH2B1（rs4788102）基因 GA型與 GG型比較，差異有統計學意義2.374），P=0.04]，A等位基因頻率與G等位基因頻率比較，差異有統計學意義1.091，1.972），P=0.01]。GDM 組 GA+AA 基因型與GG基因型比較，差異有統計學意義CI：1.185，2.479）P=0.02]。見表 2、3。

2.4 GDM組不同基因型臨床指標的比較

GDM 組中 GA+AA 基因型 BMI、FPG、TG、Leptin及HOMA-IR與GG基因型比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 4。

2.5 SH2B1基因型對GDM的影響

表1 兩組患者臨床資料及生化指標的比較

表2 SH2B1基因頻率與等位基因頻率分布 例（%）

表3 不同基因型之間差異比較

基因型頻率的相對風險分析顯示，AA基因型患GDM的風險是GG基因型的1.56倍（95%CI：0.853，2.846）]，A 等位基因攜帶者患 GDM的風險較非C等位基因攜帶者升高1.41倍1.413，（95%CI：1.055，1.903）]，經 Logistic 回歸分析，校正BMI、TG、HOMA-IR等其他混雜因素影響后，AA基因型患GDM的風險仍是GG基因型的1.31倍基因型的1.29倍

2.6SH2B1基因型對HOMA-IR的影響

將GG基因型與GA+AA基因型比較差異有統計學意義的因素進行多變量的Logistic回歸分析，以 HOMA-IR 為因變量，以 BMI、TG、Leptin、GA+AA基因型為自變量。結果顯示，BMI[＾OR=1.409（95%CI：1.113，3.107），P=0.021]、TG[ ＾OR=1.428（95%CI：1.097，2.368），P=0.029]、Leptin[[ ＾OR=1.435（95%CI：1.126，3.124），P=0.027]、GA+AA 基因型[ ＾OR=1.762（95%CI：1.366，5.439），P=0.017] 為 HOMA-IR 升高的危險因素。

表4 GDM組不同基因型之間臨床指標比較 （±s）

表4 GDM組不同基因型之間臨床指標比較 （±s）

基因型3 h PG/（mmol/L）GG 25.31±1.67 9.69±1.83 5.73±0.48 10.93±1.40 9.39±1.71 5.41±1.96 GA+AA 28.69±1.99 9.32±1.79 5.55±0.51 10.53±1.79 9.24±1.65 5.57±2.01 t/χ2值 9.292 0.876 0.394 0.461 0.272 0.334P值 0.013 0.364 0.043 0.571 0.803 0.794 BMI/（kg/m2）GCT/（mmol/L）FPG/（mmol/L）1 h PG/（mmol/L）2 h PG/（mmol/L）基因型HOMA-IR GG 5.99±1.03 1.59±0.73 0.63±0.27 3.66±0.94 12.77±1.82 25.74±7.49 3.19±0.34 GA+AA 5.86±0.98 2.11±0.99 0.66±0.28 3.79±0.92 15.03±1.54 21.49±6.86 3.97±0.48 t/χ2值 0.405 11.054 0.293 0.684 0.733 8.222 5.054P值 0.521 0.004 0.852 0.363 0.664 0.017 0.036 TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）HDL-C/（mmol/L）LDL-C/（mmol/L）Fins/（mIU/L）Leptin/（ng/ml）

3 討論

SH2B1蛋白于1995年被發現，該基因位于人染色體16p11.2，轉錄子的3’-端經剪切后可以產生4種不同的亞型，分別為α、β、γ、δ，編碼蛋白分別有756、670、682 及 724 個氨基酸殘基，SH2B1 蛋白在中樞神經系統和外周組織中能廣泛表達[7]。有研究指出，SH2B1作為銜接蛋白可以與Janus激酶2、胰島素受體（insulin receptor，IR）、IR 底物（IRS-1、IRS-2），參與多種激素和細胞因子的信號傳導，如瘦素、胰島素等[8]。通過本研究發現，GDM組與Non-GDM組患者Leptin比較，差異有統計學意義，表明GDM患者可能存在能量代謝異常。

既往的研究表明，GDM患者出現妊娠高血壓、早產和巨大兒、新生兒窒息及新生兒低血糖的發生率升高，同時易造成GDM患者及其子女后期T2DM、肥胖等[9]。大量研究已經證實，GDM患者存在嚴重血脂代謝異常，其對母嬰預后造成近遠期不良影響，而血脂代謝紊亂主要是脂蛋白的異常改變，也是本研究選取血脂代謝指標，包括TC、TG、LDL-C及HDL-C作為研究指標的主要原因[10]。通過本研究發現，GDM組TC、TG均高于Non-GDM組，而HDL-C低于Non-GDM組，表明GDM患者存在血脂代謝異常，這也印證以往的研究報道。目前，GDM患者大多指標均已得到控制，但由于脂蛋白的異常表達，仍然可以引起子代臍血中血脂指標出現異常變化，引起GDM患者血脂代謝異常需要引起重視。

SH2B1能夠緩解IR酪氨酸以及IRS的去磷酸化，參與生長激素誘導的Janus激酶2活化，體內研究表明SH2B1對胰島素、Leptin、血糖、血脂及肥胖等具有重要作用[11]。AL-HAKEEM等[12]對沙特地區GDM患者SH2B1（rs4788102）多態性的研究證實，SH2B1（rs4788102）基因型中 GA+AA 型患者 BMI、TG、HOMA-IR均高于GG型，其研究表明SH2B1（rs4788102）基因與GDM顯著相關。通過對知網以及萬方等數據庫搜索，目前在國內對于SH2B1（rs4788102）基因多態性與GDM易感性的研究報道非常少。本研究探討了SH2B1（rs4788102）基因多態性與GDM易感性以及HOMA-IR的關系，經Logistic回歸分析，校正BMI、TG、HOMA-IR等其他混雜因素影響后，AA基因型患者GDM的風險仍是GG基因型的1.31倍，GA+AA是GG基因型的1.29倍。經Logistic回歸分析顯示，GA+AA基因型為HOMAIR升高的危險因素，在我國SH2B1（rs4788102）基因中A等位基因孕婦更有可能發生GDM。但是需要指出的是，由于本研究的樣本量不大，而且存在地域限制，其不能代表整體水平，后續需要行大樣本量、多中心研究，從而更好確定SH2B1（rs4788102）在GDM中的診斷價值。

綜上所述，筆者推測SH2B1（rs4788102）基因多態性可能是GDM的1個易感位點，監測孕婦該基因位點，可以預測GDM發生風險，從而對其多種影響因素進行早期干預，有利于早期GDM的早期防范。

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（李科 編輯）

Association ofSH2B1gene polymorphism with gestational diabetes mellitus

Gui-xia Sun,Ning Wang,Hong-xia Zhang,Shao-qin Yang
(Department of Obstetrics and Gynecology,Huaihe Hospital of Henan University,Kaifeng,Henan 475000,China)

ObjectiveTo investigate the relationship betweenSH2B1gene polymorphism and insulin resistance in patients with gestational diabetes mellitus(GDM).MethodsTotally 164 GDM patients and 130 normal pregnant women with impaired glucose tolerance were selected.TheSH2B1genotype was detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism and then the clinical data were analyzed.ResultsThere was significant difference between the GA and GG genotypes ofSH2B1(rs4788102)in the GDM group[＾OR=1.531,(95%CI:1.093,2.374),P=0.04].There was significant difference in the A allele frequency and the G allele frequency in the GDM group[＾OR=1.436,(95%CI:1.091,1.972),P=0.01].In the GDM group,the GA and AA genotypes were significantly different from the GG genotype[＾OR=1.699,(95%CI:1.185,2.479),P=0.02].BMI,TG,leptin,and HOMA-IR were significantly different between the GDM patients with AA or GA genotype and those with GG genotype (P＜0.05).Logistic regression analysis showed that GA and AA genotypes were the risk factors for HOMA-IR elevation.ConclusionsSH2B1(rs4788102)gene polymorphism may be a susceptible locus of GDM,which could be used to predict the risk of GDM in pregnant women.

gestational diabetes mellitus;SH2B1gene polymorphism;insulin resistance

R714.252

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.12.011

1005-8982（2017）12-0055-05

2016-11-09