FOXP1與Livin在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及臨床意義*

王志芳， 劉 巖 ，肖 麗，孟祥玲，趙恩鋒 ，李勝水

1.河北省滄州中西醫結合醫院血液腫瘤科 (滄州 061000 ),2.河北省滄州中西醫結合醫院病理科 (滄州 061000 )

FOXP1與Livin在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及臨床意義*

王志芳1， 劉 巖2，肖 麗1，孟祥玲1，趙恩鋒1，李勝水2

1.河北省滄州中西醫結合醫院血液腫瘤科 (滄州 061000 ),2.河北省滄州中西醫結合醫院病理科 (滄州 061000 )

目的：探討FOXP1、Livin在彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)的表達及相關性。方法：選取經病理確診的DLBCL患者76例作為觀察組，以反應性淋巴結增生患者42例作為對照組。觀察組中根據不同指標分組：低危組36例和高危組40例；Non-GCB組41例和GCB組35例；結內組43例和結外組33例；無B癥狀組45例和有B癥狀組31例。每組均檢測FOXP1和Livin的表達及二者的相關性。結果：觀察組中Livin、FOXPI表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；Livin 、FOXPI在高危組、Non-GCB組高表達患者較多，和對應的低危組、GCB組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；Livin在有B癥狀組高表達患者較多，和無癥狀組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；Livin 、FOXPI在Non-GCB型DLBCL中呈正相關。結論：FOXP1、Livin在DLBCL中均有高表達，且和DLBCL的原發部位、IPI評分、病理類型等有關；其有望成為判斷DLBCL預后的指標。

彌漫大B細胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)屬于非霍奇金淋巴瘤中的一種疾病，在B細胞淋巴瘤中占約40%，惡性程度較高，異質性明顯[1]。因此，為判斷其預后，尋找新的生物學指標非常有必要。叉頭框蛋白P1(Forkhead box p1，FOXP1)屬于FOXP亞家族中的轉錄因子成員，并具有多種生物學功能。具研究顯示[2]，其能促進或抑制腫瘤的發生和發展，但FOXP1的預后仍有爭論。Livin基因屬于凋亡抑制蛋白家族中成員，已有研究證實，Livin在DLBCL中高表達提示患者預后不良。為了給DLBCL的預后判定提供科學依據，本研究設計了FOXP1、Livin在DLBCL表達中的關系研究。現報告如下。

資料與方法

1 一般資料 選取2001-2016年本院收治的并經過病理確診的彌漫大B細胞淋巴瘤患者76例作為觀察組，以反應性淋巴結增生患者42例作為對照組。觀察組男40例，女36例，年齡平均(38.9±3.7)歲；對照組中男23例，女19例，年齡25～75歲，平均(37.9±4.7)歲。兩組一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。觀察組中根據不同指標分組：根據IPI評分分為低危組(0～2分)36例和高危組(3～5分)40例；根據病理類型分為non-GCB組41例和GCB組35例；根據原發部位分為結內組43例和結外組33例；根據B癥狀有無分為無B癥狀組45例和有B癥狀組31例。觀察組各組間經統計學分析性別、年齡等一般資料方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

入選標準： ①所有病例均根據實驗室檢查、臨床表現、及病理學檢查等符合DLBCL的診斷標準。②初次確診在本院治療，且用相同化療方案。③自愿接受免疫組織學檢查，臨床資料完整。排除標準： ①嚴重肝、腎、心等嚴重功能不全者；②有急性感染、其他部位有惡性腫瘤等不適合參與研究的患者。

2 研究方法 檢側標本取得后，用10%甲醛(中性)溶液固定，切片用石蠟包埋，厚度約3～4μm。烘烤2h，置恒溫箱(60℃)中24h，然后脫蠟(用二甲苯)、脫水(用梯度乙醇)、修復(用枸櫞酸修復液，進行高壓修復2min)。用H2O2(濃度3%)阻斷內源性的過氧化氫酶，PBS處理，加封閉用羊血清，進行一抗孵育(FOXP1多克隆抗體、Livin多克隆抗體均由武漢博士德生物公司提供)，置于冰箱中(4℃)過夜、復溫(37℃恒溫箱中)、沖洗(用PBS沖洗。時間5min)。二抗孵育(用50μl生物素處理)，置于恒溫箱(37℃)中孵育10min，經PBS沖洗3次后，用鏈霉素抗生物素-過氧化物的酶溶液(50μl)，恒溫箱中孵育約20min，沖洗3次。之后，在切片中加入DAB溶液2滴，放入顯微鏡下觀察，陽性顯色棕黃色或棕褐色。自來水沖洗，后復染、透明、封片。定位用低倍顯微鏡觀察，然后用高倍顯微鏡觀察。

3 結果判定 200倍光鏡下，隨機選5～10個視野，癌細胞計數100～200個，FOXP1和Livin表達用二級計分法進行分析；染色強度有4個等級：無染色表示0分，淺黃色表示1分，黃色表示2分，棕黃色和棕褐色表示3分；陽性細胞百分率表示: 陽性細胞≤5% 表示0分，6%～25% 表示1分，26%～50% 表示2分，>50% 表示3分；表達情況用二者乘積: 0分表示(-)，1～4表示(+)，5～8表示中度陽性() ，9～12表示強陽性() ; 為便于臨床統計分析，(-)和(+)歸于低表達，()和()歸于高表達。

4 觀察指標 分析對照組及觀察組Livin、FOXPI的表達情況；分析觀察組各組中Livin、FOXPI的表達情況；分析在DLBCL中Livin、FOXPI高表達的相關性。

5 統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件處理，率的比較采用χ2檢驗，兩變量間的相關性采用Spearman檢驗，P<0.05為有統計學意義。

結 果

1 對照組及觀察組Livin 、FOXPI的表達情況 觀察組中Livin 高表達60.53%，FOXPI高表達76.32%，均分別高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組Livin 、FOXPI的表達情況[例(%)]

2 觀察組中各組Livin 、FOXPI的表達情況 Livin 、FOXPI在高危組、Non-GCB組高表達患者較多，和對應的低危組、GCB組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；Livin在有B癥狀組高表達患者較多，和無癥狀組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組各組Livin 、FOXPI的表達情況[例(%)]

注：與對應組比較，*P<0.05

3 Livin、FOXPI的表達相關性 在76例DLBCL標本中有40例DLBCL患者(均屬于Non-GCB型)同時存在FOXP1和Livin高表達。Spearman檢驗可知，40例non-GCB型DLBCL組織切片中FOXP1和Livin高表達呈正相關(r=0.825,P<0.05)，見表3。

表3 Livin 、FOXPI的表達在non-GCB型DLBCL中的相關性(例)

討 論

彌漫性大B細胞瘤進展迅速[3]，侵襲性較強，預后較差。FOXP1是FOX家族中成員，能夠參與多種人體正常生理過程[4]。胡成如[5]報道，FOXP1表達和惡性腫瘤臨床特點及預后密切相關。Livin 為凋亡抑制蛋白家族中成員，主要通過對蛋白酶、信號傳導的抑制來抵抗細胞凋亡。王鋒剛[6]研究顯示，Livin在很多腫瘤患者中，呈現較高的表達。這可能是因為Livin 正常的凋亡機制受到損傷，使惡性潛能積累，發生腫瘤。

本研究結果顯示，FOXP1、Livin 在DLBCL中的表達與反應性淋巴結增生中的FOXP1、Livin比較，明顯升高(P<0.05)，此結果和張亞楠[7]的研究一致。本研究還顯示，FOXP1、Livin在DLBCL的高危組、有B癥狀組、Non-GCB組有較高的表達，提示FOXP1、Livin和DLBCL臨床病理特征有關。和夏靖媛[8]的研究結果相似。本研究中FOXP1在DLBCL中B癥狀的有無方面差異無統計學意義，而Livin在B癥狀有無方面差異有統計學意義。FOXP1高表達提示腫瘤細胞有免疫逃逸現象，Livin 高表達則說明細胞凋亡機制出現障礙。FOXP1和Livin的表達在Non-GCB型DLBCL中呈正相關。這可能是因為FOXP1參與了NF-κB信號通路活化，在轉錄水平上FOXP1高表達能夠使抗凋亡基因Livin的表達上調，使AKT途徑被激活，另外Livin也能通過其他抗凋亡途徑參與抗凋亡活動，從而使腫瘤細胞逃逸凋亡。因此檢測FOXP1、Livin表達可能評估腫瘤預后。

綜上所述，FOXP1、Livin在DLBCL中均有高表達，且和DLBCL病理類型及臨床特征有關；FOXP1和Livin表達在Non-GCB型DLBCL中呈正相關。提示二者有望成為判斷DLBCL預后的指標。

[1] 胡成如,王靖華. 彌漫大B細胞淋巴瘤相關預后因素的研究進展[J].醫學研究生學報,2010, 23(10): 1098-1103.

[2] 胡成如,王靖華.FOXP1在腫瘤發生和發展中的作用[J].臨床腫瘤學雜志,2011, 16(11): 1052-1055.

[3] 曹 斌,張 曙,章建國,等.乳腺癌中Livin和PTEN蛋白表達與預后的相關性研究[J].現代腫瘤醫學,2012, 20(5):967-970.

[4] 趙 茜,侯 健.彌漫大B細胞淋巴瘤預后相關因素研究進展[J].腫瘤防治研究,2013, 40(6): 514-515.

[5] 胡成如,王靖華,耿懷成,等.叉頭框轉錄蛋白1在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及預后意義[J].臨床腫瘤學雜志, 2012, 17(4): 339-342.

[6] 王鋒剛，王天昶，昊 磊，等.淋巴結轉移對鼻咽癌預后的研究在[J].陜西醫學雜志，2016,45(4)：474-475.

[7] 張亞楠，劉漢鋒.FOXP1蛋白在彌漫性大B細胞淋巴瘤中的表達及預后意義[J].重慶醫學，2015,44(6)：2368-2370.

[8] 夏靖媛，徐 薪.FOXP1與Livin 基因表達對淋巴瘤病理特征及臨床預后評價價值[J].武警醫學，2016,27(12)：1237-1238.

(收稿：2017-02-03)

The relationship and clinical significance of FOXP1 and Livin two expression in diffuse large B cell lymphoma

Wang Zhifang,Liu Yan, Xiao Li,et al.

Department of Hematology and Oncology,Cangzhou Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine in Hebei Province(Cangzhou 061000)

Objective:To investigate the expression and correlation of FOXP1 and Livin in diffuse large B cell lymphoma (DLBCL).Methods: 76 cases of DLBCL diagnosed by pathology were selected as observation group,42 cases of reactive lymph node hyperplasia were used as control group.The observation group was grouped according to different indexes: Low risk group 36 cases and high risk group of 40 cases;Group non-GCB 41 cases and GCB group of 35 cases;There were 43 cases in the intra node group and the other in the extranodal group (n=33);There were no B symptoms in 45 cases and 31 cases of B symptom group.The expression of FOXP1 and livin were detected in each group and the correlation between the two groups. Results:The expression of Livin and foxpi in the observation group were significantly higher than those in the control group,the difference was statistically significant(P<0.05);Livin, FOXPI in high-risk group,non-GCB group of patients with high expression was more,They were compared with the corresponding low risk group,GCB group(P<0.05);Livin was higher in patients with B symptoms,compared with asymptomatic group(P<0.05);Livin,FOXPI was positively correlated with type DLBCL non-GCB .Conclusion:FOXP1 and Livin have high expression in DLBCL,It is related to the primary site of DLBCL,IPI score,pathological type and so on;It is expected to be a prognostic indicator for DLBCL.

Lymphoma,large B cell Diffuse livin/Pathology @Apoptosis-inhibitory protein F-box proteins/analysis Prognosis

*河北省滄州市科技計劃項目(151302180)

淋巴瘤,大B細胞彌漫性/病理學 @凋亡抑制蛋白 F-框蛋白質類/分析 預后

R363

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.053