髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1與急性腦梗死的相關研究

劉 丹， 陸麗麗， 張 偉， 張廣煒， 王埃連

髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1與急性腦梗死的相關研究

劉 丹， 陸麗麗， 張 偉， 張廣煒， 王埃連

目的 通過檢測血小板表面髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1(Triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1,TLT-1)在急性腦梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者的表達水平，探討其與急性腦梗死的關系。方法 采用流式細胞術(flow cytometry,FCM)檢測腦梗死組與對照組髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平，并進行相關分析。結果 腦梗死組髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平明顯高于對照組(P<0.01)；且與腦梗死的病情嚴重程度和病灶大小呈正相關(r=0.656,P<0.01；r=0.593,P<0.01)。Logistic回歸分析顯示髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1是急性腦梗死發病的獨立危險因素(OR值=1.155,95%CI1.105～1.207，P<0.01)。結論 髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1可能是預測腦梗死的發病風險、評估病情嚴重程度和預后的生物指標。

腦梗死； TLT-1； 發病風險； 病情嚴重程度

動脈粥樣硬化性斑塊破裂后繼發的血小板聚集和血栓形成是腦梗死急性發病的關鍵機制，它的典型表現是因腦血管供血不足，局部腦組織發生缺血缺氧甚至壞死，出現昏迷、肢體癱瘓、失語、感覺異常等神經功能缺損癥狀。在急性腦梗死發病的病理生理學過程中，最常見的原因就是不穩定的動脈粥樣硬化性斑塊發生破裂。在動脈粥樣硬化的發展中，當薄的纖維斑塊被侵蝕發生破裂時炎性細胞和趨化因子的水平會上調，與血液中的凝固因子和組織因子共同作用促進血小板的活化和聚集形成血栓，導致腦血管的血流量減少和局部缺血。與此同時，活化的血小板還會發生脫顆粒反應，通過表達膜結合蛋白和分泌可溶性蛋白促進血栓形成。

α-顆粒對于血小板的功能是非常重要的，而這種作用來源于它的組成成分，包括能夠表達于血小板表面的膜結合蛋白和釋放入細胞外的可溶性蛋白[1]。髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1是儲存在血小板和巨核細胞α-顆粒內的，一種具有單一V形細胞外免疫球蛋白結構域的膜結合蛋白，是TREMs受體家族中的成員。近年研究表明，它可以調節血小板的活化和炎癥反應。正常情況下，髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1在血小板表面很少表達，但是當血小板被激活后α-顆粒會遷移到血小板顆粒區，α-顆粒與血小板膜發生融合并將髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1受體大量表達于血小板表面[2]。

有研究表明，髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平在機體發生炎癥反應時會顯著增高，能夠調節血小板的活化和促進血栓形成，是動脈粥樣硬化發生發展的推動者[3]。因此，我們欲檢測急性腦梗死患者體內的髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平，探討二者的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2015年10月-2016年5月來我院神經內科住院治療的急性腦梗死(發病時間≤7 d)患者102例作為病例組，平均年齡(62.03±8.95)歲；均符合1996年全國第四屆腦血管病學術會議修訂的動脈粥樣硬化性腦梗死的診斷標準[4]，且經頭部CT或MRI影像學檢查證實。病例組的納入標準：年齡在30～90歲之間，性別不限；發病時間≤7 d的急性腦梗死患者；頭部CT/MRI未見顱內出血及其他顱內病變；首次發作或既往發作未遺留肢體癱瘓、失語等后遺癥，不影響本次的NIHSS評分。排除標準：年齡≤30歲或≥90歲；既往曾有腦出血病史或此次入院行CT檢查顯示存在腦出血；患自身免疫性疾病或服用免疫抑制劑；有明顯的心、肝、腎功能不全及惡性腫瘤者；近4 w有感染征象或應用抗生素和激素；近4 w有外科手術史、外傷史和出血史；入院前2 w服用抗血小板聚集、抗凝藥物；存在心房顫動等嚴重心律失常，心源性栓塞所致的卒中。同期選擇來我科就診的非急性腦梗死患者93例為對照組，平均年齡(59.61±11.26)歲，排除標準同病例組，兩組之間的年齡和性別之間無明顯差異。

1.2 方法與分組 (1) 梗死灶大小的分組標準：病例組根據頭部CT或MRI影像上顯示的病灶大小,測量責任病灶最大層面的病灶長徑。分為大梗死組17例 (>5 cm)、中梗死組15例 (3～5 cm)、小梗死組70例 (<3 cm)，多發性梗死則只計算最大責任病灶的最大層面的長徑;(2)病情嚴重程度的評價標準：根據美國國立衛生院神經功能缺損評分(NIHSS)標準在入院第一天進行評分，分為輕度組44例(<4分)、中度組45例(4～10分)、重度組13例(>10分);(3)所有入組的患者均于入院當天急抽肘靜脈血，最初2 ml留作其他血液化驗，取4 ml置于全塑枸櫞酸鈉抗凝管中，輕搖混勻抗凝劑，15 min內于常溫環境中以2500 r/min離心5 min，吸取分離出的上層富血小板血漿，置于無菌EP管中，然后加入相應抗體等處理后，在24 h內用流式細胞儀檢測髓樣細胞觸發受體轉錄因子-1的表達水平。

2 結 果

2.1 病例組和對照組一般資料和臨床實驗指標的比較P值來自于獨立樣本t檢驗及卡方檢驗，結果顯示年齡、性別、血小板計數、甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白的組間P值>0.05，差異無統計學意義；收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高密度脂蛋白、髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的組間P值<0.05，差異有統計學意義(見表1)。

表1 病例組和對照組一般資料和臨床實驗指標比較

與對照組比較*P<0.05，**P<0.01

2.2 髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平與梗死灶大小的關系 分組標準見1.2(1)，其中小梗死組[ 70例，TLT-1(%)=23.56±9.70]；中梗死組[ 15例，TLT-1(%)=28.08±10.33]；大梗死組[ 17例，TLT-1(%)=38.03±6.18]。組間兩兩比較示P1和P2<0.05(P1小梗死組-中梗死組；P2小梗死組-大梗死組)，差異有統計學意義。梗死灶越大，髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平越高。

2.3 髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平與病情嚴重程度的關系 分組標準見1.2(2)，其中輕度組[44例，TLT-1(%)=18.84±8.25)];中度組[45例，TLT-1(%)=30.57±8.06]；重度組[13例，TLT-1(%)=39.39±4.29]。組間兩兩比較示P1、P2和P3<0.05(P1輕度-中度；P2輕度-重度；P3中度-重度)，差異有統計學意義。病情嚴重程度越重，髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平越高。

2.4 Spearman等級相關分析 急性腦梗死患者體內髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平與病情嚴重程度呈正相關(r=0.656，P<0.01)；與梗死灶大小呈正相關(r=0.593，P<0.01)。

2.5 Logistic回歸分析 將單因素方差分析中P<0.05的各變量納入多元逐步Logistic回歸分析，在校正其他相關危險因素后，結果顯示髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1與急性腦梗死的發病明顯相關(OR值=1.155,95%CI1.105～1.207，P<0.01)，可能是急性腦梗死發病的獨立危險因素。

3 討 論

炎性反應是動脈粥樣硬化形成的基本途徑，這種非線性途徑被認為是多種途徑共同作用的結果，而且動脈粥樣硬化性血管損傷是從兒童時期開始的[5,6]。在動脈粥樣硬化的發生和繼發的動脈粥樣硬化性血栓形成過程中，血小板起著至關重要的作用。目前已有研究表明，血小板是作為炎癥反應和免疫反應中的調節器參與動脈粥樣硬化和血栓形成過程[7,8]。血小板的功能取決于它所含有的不同受體亞基，以及表達和分泌的多種參與血小板活化的介質，這些物質都能夠促進血小板與白細胞、內皮細胞以及其他炎性細胞之間的相互作用。血小板被激活后表達的膜結合蛋白有很多種，如髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1、CD40L、P-選擇素等。

目前關于髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1相關研究較少，沒有與急性腦梗死的相關研究，而且大多數都是進行的動物實驗。Washington AV等[3]用脂多糖處理敲除TLT-1基因的小鼠模型，結果發現實驗組小鼠的血漿中D-二聚體水平明顯高于對照組，血小板不能有效聚集，出血時間明顯延長，而且當機體發生感染性休克時更容易出血和死亡，因此髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1具有抗炎和調節止血的作用。髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1是通過抑制TREM-1而發揮抗炎作用，通過與纖維蛋白原、膜突蛋白或者ERM家族中的其他蛋白相結合而促進血小板形成偽足，增加血小板的聚集。表達于血小板表面的髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1能夠釋放一種可溶性的片段，通過促進激動蛋白的聚合使粘附和聚集于內皮細胞表面的血小板顯著增加，促進血栓形成。

CD40L也是血小板被激活后表達的膜結合蛋白之一。它是腫瘤壞死因子超家族中的一員，表達于活化血小板的表面，通過與其配體CD40結合而促進中性粒細胞、內皮細胞和血小板之間的相互作用。Kamykowski等發現，CD40L在炎性疾病患者體內的表達水平明顯高于對照組，能夠使內皮細胞分泌趨化因子和粘附分子，招募循環中的白細胞外滲聚集到損傷處，調節血小板的功能，促進血栓形成[9,10]。還有研究表明，CD40L在急性腦梗死患者體內的表達水平明顯高于對照組，且與急性腦梗死患者的病情嚴重程度和預后明顯相關，是腦梗死患者死亡的獨立危險因素[11]。這與我們的結果是一致的，急性腦梗死的患者體內髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平明顯高于對照組，且隨著患者的病情嚴重程度和梗死灶的增加髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1的表達水平會逐漸增加，Logistic回歸分析顯示，髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1是急性腦梗死發病的獨立危險因素。

由于髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1和CD40L都是血小板α-顆粒的重要組成成分，都是在血小板發生活化后才大量表達于血小板表面的膜結合蛋白，具有同源性。CD40L能夠作為血小板、白細胞和內皮細胞之間的介質，作為急性腦梗死的發生和病情嚴重程度的潛在標志物，這間接表明髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1與CD40L之間具有平行關系，髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1也是腦梗死發病的獨立危險因素，是預測腦梗死發病、評估病情嚴重程度和預后的生物指標。

本實驗的不足之處：(1)由于血小板極易活化，雖然在進行實驗操作的過程中會盡量減少能夠引起血小板活化的人為因素，但仍可能不會完全避免，進而影響干擾實驗結果;(2)關于檢測髓樣細胞觸發受體樣轉錄因子-1對于急性腦梗死的診斷靈敏性以及特異性，本實驗均未涉及，尚待后續大量研究進一步的進行;(3)本實驗的納入標本量有限，得出的結論具有一定的局限性，尚需要大量大規模臨床實驗證實。

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Association of Triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 in patients with acute cerebral infarction

LIUDan，LULili，ZHANGWei，etal.

(DepartmentofNeurology,FirstAffiliatedHospitalofBaotouMedicalCollege,InnerMongoliaUniversityofScienceandTechnology,Baotou014010,China)

Objective To test the level of triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 in patients with acute cerebral infarction and investigate the possible correlations.Methods The levels of triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 was detected by flow cytometry in cerebral infarction group and control group.Results The levels of triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 in cerebral infarction group were dramatically higher than the control group(P<0.05).There were positive correlations among triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 with the severity of their illness and the size of infarcts(r=0.656,P<0.01;r=0.593,P<0.01).Logistic analysis showed that triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 was an independent indicator for the presence of acute cerebral infarction(OR=1.155,95%CI1.105～1.207,P<0.01).Conclusion Triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 may be used as biological indicators of the incidence,severity,and prognosis of acute cerebral infarction.

Cerebral infarction; Triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 (TLT-1); Incidence risk; Severity

1003-2754(2017)06-0516-03

2017-02-13；

2017-05-25

內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院科學研究基金資助(BYJJ-QM 2016107)

(內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院神經內科，內蒙古 包頭 014010)

劉 丹，E-mail：liudanbaotou2313@163.com

R743.3

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