阿奇霉素片的溶出度研究

商鼎

摘 要 目的：建立阿奇霉素片的體外溶出度檢測方法并進行原研藥與仿制藥的相似性評價。方法：對該片劑的溶出度測定的基本條件（轉速、取樣時間、裝置、溶出介質）進行篩選，確定溶出參數，用高效液相色譜法測定含量。繪制原研藥在不同溶出介質中的溶出曲線。采用f2因子法評價仿制藥與原研藥的相似性。結果：根據溶出曲線的區分效果將本次溶出介質定為pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8和水，阿奇霉素片在四種溶出介質中穩定性良好，RSD小于2%。自制樣品與原研藥溶出行為相似。結論：該方法可作為處方篩選的依據。

關鍵詞 阿奇霉素片 溶出度 溶出曲線 f2因子

中圖分類號：R927.11 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）13-0063-04

Study on the dissolution of azithromycin tablets

SHANG Ding*

（Shanghai New Asia Pharmaceutical Co.， LTD.， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the dissolution determination of content of azithromycin tablets in vitro and to evaluate the similarity between reference listed drug （RLD） and home-made drug. Methods： The best conditions（rotational speed， sampling time， apparatus and releasing media） for dissolution determination were selected by experiment and the content was measured by HPLC. The dissolution curves in media with different pH value were drawn and the similarity between RLD and home-made drug was evaluated by f2 factor. Results： The dissolution media at pH 1.2， pH 4.5， pH 6.8 value and water were selected based on the distinction effect of the dissolution profile. Azithromycin tablets showed good stability in four dissolution media with RSD less than 2%. The dissolution behavior was similar between RLD and home-made drug. Conclusion： This method can be used as the basis for formulation screening.

KEY WORDS azithromycin； dissolution rate； dissolution curve； f2 factor

阿奇霉素（azithromycin）是第一個十五元環大環內酯類抗生素，也是第一個氮雜內酯類抗生素[1]。它是由南斯拉夫Sour Pliva公司開發研制的，1988年首先上市，后轉讓給美國輝瑞（Pfizer）公司[2]。其作用機理和紅霉素相似，通過抑制細菌蛋白質的合成而起作用[3]。阿奇霉素與紅霉素相比最大的特點是對酸穩定，且其在酸中的化學穩定性與其在胃酸中相一致[4]。已有藥理學研究發現，阿奇霉素片生物利用率可達37%，其臨床給藥次數少，療程短，被認為是一個很有效的大環內酯類抗生素，臨床應用廣泛，尤其適合于混合感染的治療[5-7]。文獻調研發現不同廠家的阿奇霉素片和原研制劑相比生物利用度具有很大差異[8-11]，故對原研制劑和仿制制劑的療效進行全面的研究是迫切需要的。

阿奇霉素片為普通口服固體制劑，其溶解性和滲透性均較差，屬于BCS4類產品，因此需要對其質量進行再評價。由于口服阿奇霉素片后在人體的胃腸道吸收，故本研究模擬人體胃腸道的環境繼續了pH 1.2～6.8的范圍的溶出條件摸索。目前我國正在開展口服固體制劑質量和療效一致性評價工作，比較原研品和自制品的溶出曲線是否相似可降低兩者出現臨床療效差異的風險。故建立具有區分力的溶出度檢測方法是十分重要的工作。本研究中阿奇霉素片溶出方法的建立對指導藥物制劑的開發、嚴格控制制劑的內在質量、保證藥物安全性和有效性以及實現仿制藥和原研藥的可替換具有十分重要的意義。

1 材料和方法

1.1 儀器和試藥

708-DS藥物溶出儀（安捷倫科技公司）；1260高效液相色譜儀（安捷倫科技公司）。阿奇霉素原料：批號160801。阿奇霉素自制片：批號160801、160802、160803。阿奇霉素參比制劑：美國輝瑞公司Zithromax，批號H79644。

1.2 方法

1.2.1 溶出度測定的液相色譜條件

參考歐洲藥典阿奇霉素原料質量標準中的含量測定方法[12]。

色譜柱以十八烷基聚乙烯醇為填充劑（Asahipak ODP-50E，4.6×250 mm，5 μm）；流動相為6.7 g/L磷酸氫二鉀溶液（用10 mol/L氫氧化鉀溶液調節pH至11.0）-乙腈（40∶60）；波長280 nm；流速1.0 ml/min；柱溫40 ℃；進樣體積10 μl；溶劑為（6.7 g/L磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調pH至8.0）-乙腈（40∶60）。按外標法以峰面積計算含量。供試品及對照品溶液濃度為0.53 mg/ml。

1.2.2 溶解度測定

取過量阿奇霉素原料藥，置8支具塞試管中，分別精密加入醋酸、磷酸、硼酸、氫氧化鈉配置的不同pH緩沖溶液（pH 1.8、pH 2、pH 3、pH 4、pH 5、pH 6、pH 7、pH 8）5 ml，置37 ℃水浴振蕩過夜，使之形成過飽和溶液，濾過，取續濾液經HPLC法測得溶解度。

1.2.3 不同介質中穩定性比較

按照普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則，用不同鹽配置不同的溶出介質，取適量原料藥，按照0.53 mg/ml的濃度分別配置在100 ml量瓶中，于室溫放置0、20、40、60、80、100、120、140、240、360、480 min時取樣進行HPLC檢測。

1.2.4 溶出參數確定

對溶出方法中的取樣時間、裝置、溶出介質的類型和比例、轉速等進行改變調整，并進行HPLC檢測。

1.2.5 自制品與原樣品溶出行為對比

取原研品和3批自制樣品各12片，使用pH 1.2鹽酸溶液、pH 4.5磷酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和含有0.15%的十二烷基硫酸鈉的水溶液900 ml為溶出介質，槳法，50 r/min。前三種溶出介質在溶出開始后5、10、15、20、30 min時取樣，后面的水溶液介質在溶出開始后5、10、15、20、30、45、60、90、120 min時取樣，過濾后取續濾液進行HPLC檢測。得到累積溶出度后，繪制累積溶出度曲線，并通過f2因子法與原研品進行對比。

2 結果

2.1 不同pH介質中溶解度測定

溶解度測定結果見圖1。數據顯示阿奇霉素是pH依賴型藥物，隨著pH的增大，溶解度逐漸減小。采用此法，排除了不同酸根和離子強度的影響，現配現測，能比較真實地反應阿奇霉素在不同pH條件下的溶解度。

2.2 在不同鹽配制的不同pH介質中的穩定性

發現在pH 3.0磷酸鹽緩沖液中，140 min內，峰面積RSD小于2%；在其他介質中，140 min內，峰面積RSD均大于2%，故在pH 3.0磷酸鹽緩沖液中，要比在其他介質中穩定。阿奇霉素在相同pH不同酸根溶液中，穩定性也不一樣，在醋酸溶液中最不穩定，在磷酸溶液中相對穩定。穩定性順序：醋酸-醋酸鈉緩沖液<醋酸-磷酸-硼酸-氫氧化鈉緩沖液<檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液<磷酸二氫鉀-磷酸溶液。測定了Zithromax在pH 5.0醋酸鹽緩沖液900 ml- 槳法-50 r/min和pH 5.0磷酸鹽緩沖液 900 ml- 槳法-50 r/min時，發現他們均在20～30 min內全部溶出，無明顯差異，故確定磷酸鹽緩沖液為首選溶出介質。

2.3 溶出度試驗參數的確定

2.3.1 溶出介質體積和取樣時間點

在pH 6.0、pH 6.5、pH 6.8、pH 7.5的磷酸鹽緩沖液500 ml-槳法-50 r/min、120 min時不能完全溶出。在pH 6.0磷酸鹽緩沖液500 ml-槳法-65 r/min和75 r/min、120 min時仍不能完全溶出，而轉速加快至100 r/min時溶出又太快不具有區分力。

對于普通片劑一般采用大杯法，介質體積為900～ 1 000 ml，不建議采用小杯法[13]，故溶出介質體積設定為900 ml。取樣時間點設置為5、10、15、20、30、45、60、90、120 min。

2.3.2 裝置的選擇

鑒于籃法與槳法通用性強、耐用性好且廣泛普及，故試驗了他們對阿齊霉素片溶出度測定的影響。

Zithromax在pH 6.0磷酸鹽緩沖液900 ml-槳法-50 r/min和60 r/min、120 min時仍未完全溶出；而在75 r/min、15 min時全部溶出；觀察溶出杯內現象，發現片劑崩解后，顆粒沉降在杯底有成堆現象，可能會影響最終溶出度考察，考慮換用籃法。

籃法測試中，片劑崩解后，不溶物從籃內流出，沉降到杯底，未見成堆現象；原研品在pH 6.0磷酸鹽緩沖液900 ml-籃法-75 r/min、15 min時全部溶出；而在50 r/min時，約需90 min時全部溶出，但在5～10 min時，RSD偏大；在60 r/min時，45～60min全部溶出，但在5～10 min時，RSD仍偏大。

通過對溶出現象的觀察，發現片劑薄膜衣會粘到轉籃上，進而影響片劑崩解和溶出，不能比較真實地反映片劑在體內的崩解溶出情況，故仍考慮采用槳法。

2.3.3 溶出條件的確定

在水900 ml-槳法-75 r/min時，不溶物呈絮狀漂浮在杯底，無堆積現象，90 min時溶出約22%。添加吐溫80后，空白樣品中出現雜峰，運行時間由8 min調整到50 min，運行時間太長，考慮換用十二烷基硫酸鈉（SDS）。

Zithromax在水介質+0.05%、0.1% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，120 min時仍不能完全溶出；在水介質+0.2% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，45 min時完全溶出。

Zithromax在水介質+0.15% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，60 min時完全溶出；在水介質+0.25% SDS 900 ml-槳法-75 r/min條件下，20 min時完全溶出。

Zithromax在水介質+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min條件下，同樣約60 min全部溶出（表1）；因此選擇水介質+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min作為最終溶出條件。

基于以上研究，最終確定4條溶出曲線條件為pH 1.2鹽酸溶液、pH 4.5磷酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水介質+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min。

2.4 原研和自制品的溶出曲線

2.4.1 自制品在pH 1.2、pH 4.5、pH 6.8、水+0.15% SDS中的溶出曲線

自制樣品在pH 1.2鹽酸溶液，pH 4.5、pH 6.8磷酸鹽緩沖液900 ml-槳法-50 r/min時，均在15 min內全部溶出，溶出行為同Zithromax相似（圖2）。

2.4.2 原研和自制品的f2因子

自制樣品在水介質+0.15% SDS 900 ml-槳法-50 r/min條件下，與Zithromax進行溶出行為相似性比較，選取10、20、45、90 min四個點，得到三批自制品f2因子數值分別為為67、72、69，均滿足f2因子大于50的要求，RSD符合指導原則要求，自制樣品與參比制劑溶出行為相似。

3 討論

本研究是國內首次對阿奇霉素片的原研制劑和自制制劑進行了四種體外溶出介質對比研究。通過對轉速、溶出介質種類和濃度、溶出裝置等條件的篩選，對原研品進行溶出條件摸索，最終確定了具有區分力的溶出曲線測定的實驗方法和條件，從而建立了阿奇霉素片的體外溶出度測定方法，該方法測定的原研品和自制品溶出數據RSD符合相關指導原則要求，能夠真實體現阿奇霉素片的溶出度考查結果。中國藥典中阿奇霉素片的溶出度檢查法[14]為單點測定，本研究則依據阿奇霉素原研制劑建立了多種溶出介質多點對比的方法。然后對自制樣品和參比制劑進行溶出行為相似性研究，計算f2因子，得到的結論是自制樣品和原研品的溶出行為相似。該方法的建立為以后阿奇霉素片原研藥與仿制藥的相似性評價，剖析處方，制備出與原研藥具有相同的給藥途徑、活性成分、劑型和治療作用的替代藥品打下了堅實基礎。

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