84株廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌對新型氟喹諾酮類藥物的耐藥情況分析

宗兆婧 荊瑋 霍鳳敏 董玲玲 馬異峰 逄宇 黃海榮

?

·論著·

84株廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌對新型氟喹諾酮類藥物的耐藥情況分析

宗兆婧 荊瑋 霍鳳敏 董玲玲 馬異峰 逄宇 黃海榮

目的 研究廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株對新型氟喹諾酮類藥物的耐藥特征以及氟喹諾酮類藥物耐藥相關(guān)基因突變的特點。 方法 選取2012年4月至2014年4月在北京胸科醫(yī)院住院治療的84例廣泛耐藥結(jié)核病患者的臨床分離菌株，應用微孔板阿爾瑪藍顯色法(micro-plate alamar blue assay，MABA) 檢測菌株對左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration, MIC)，所有菌株都進行了gyrA基因和gyrB基因的耐藥決定區(qū)(QRDR)的序列測定。 結(jié)果 84株廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株經(jīng)MABA 檢測，分別以1 μg/ml、2 μg/ml、1 μg/ml作為耐藥判讀標準，左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星3種氟喹諾酮類藥物的耐藥率分別是88.1%(74/84)、44.0%(37/84)、61.9%(52/84)。89.3%(75/84)的臨床分離株發(fā)生了gyrA基因耐藥決定區(qū)突變，其中以第94位點突變最為常見，Asp94Gly突變菌株的MIC值較高，而所有菌株的gyrB基因均為野生型。 結(jié)論 廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌對新型氟喹諾酮類藥物耐藥形勢嚴峻，耐藥基因突變形式以gyrA基因突變?yōu)橹鳎?4位點的Asp94Gly突變可能和高水平耐藥有關(guān)。

泛耐藥結(jié)核病； 分枝桿菌，結(jié)核； 喹諾酮類； 微生物敏感性試驗； 多藥耐藥相關(guān)蛋白質(zhì)類； 點突變

結(jié)核病耐藥形勢日趨嚴重，新型抗結(jié)核藥物的開發(fā)和針對耐藥結(jié)核病治療的新方案制定迫在眉睫。氟喹諾酮類藥物 (fluoroquinolones，F(xiàn)Qs) 抗菌譜廣、殺菌效果好、半衰期長，并且對結(jié)核分枝桿菌同樣有效，因此被認為是一類治療耐藥結(jié)核病的有效藥物[1]。包含氟喹諾酮類藥物的抗結(jié)核治療方案可提高痰菌轉(zhuǎn)陰率，縮短抗結(jié)核治療周期，對減少結(jié)核病的傳播和耐藥結(jié)核病的發(fā)生有重要意義[2]。第三代氟喹諾酮類藥物左氧氟沙星在我國已被廣泛應用于耐藥結(jié)核病的治療，擁有更強抗分枝桿菌活性的第四代氟喹諾酮類藥物莫西沙星和加替沙星，近年來也逐步在臨床得到使用。氟喹諾酮類藥物與常用的一線、二線抗結(jié)核藥物無交叉耐藥[3]，莫西沙星和加替沙星不僅有強大的殺菌活性，對人體內(nèi)持留菌也有殺菌作用[4]，因此對耐藥結(jié)核病的治療顯示出良好的應用前景。在WHO耐藥結(jié)核病指南[5]和我國耐藥結(jié)核病診療指南[6]中，都推薦第三代和第四代氟喹諾酮類藥物用于耐藥結(jié)核病的治療，但氟喹諾酮類藥物對廣泛耐藥(extensive drug resis-tance，XDR)結(jié)核病的應用價值，無論是技術(shù)指南還是臨床實踐，都缺乏針對性的數(shù)據(jù)。

氟喹諾酮類藥物通過與細菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶(拓撲異構(gòu)酶Ⅱ)結(jié)合，阻止DNA的復制和轉(zhuǎn)錄，導致DNA降解和細菌死亡，進而達到殺滅結(jié)核分枝桿菌的作用。結(jié)核分枝桿菌對氟喹諾酮類藥物發(fā)生耐藥的分子機制主要是編碼DNA促旋酶的基因突變[7]。DNA促旋酶由gyrA和gyrB編碼的A亞基和B亞基組成，A亞基是多數(shù)氟喹諾酮類藥物的作用靶點，因此不同氟喹諾酮類藥物之間容易出現(xiàn)交叉耐藥[8]。由于氟喹諾酮類藥物的不合理使用和抗生素濫用，結(jié)核分枝桿菌復合群對該類藥物的耐藥情況日益加重，環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星等已經(jīng)出現(xiàn)較高的耐藥性[9]。而且，隨著臨床用藥時間的延長，氟喹諾酮類藥物的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration，MIC)還會隨之逐漸升高[10]，耐藥程度加重。

因此，了解廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株對不同氟喹諾酮類藥物的藥物耐受情況及耐藥相關(guān)基因突變情況，可以為廣泛耐藥結(jié)核病方案中氟喹諾酮類藥物的選擇提供依據(jù)。本研究選擇廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株，對左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星進行體外藥敏試驗以及耐藥相關(guān)基因突變的檢測分析。

資料和方法

一、菌株和試劑來源

1. 菌株來源：本研究的84株廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌菌株來自北京胸科醫(yī)院2012年4月至2014年4月住院患者臨床分離株。所有菌株均經(jīng)對硝基苯甲酸(PNB)抑制生長試驗鑒定為結(jié)核分枝桿菌，且絕對濃度法臨床檢測均對氧氟沙星耐藥。

2. 試劑儀器來源：藥敏試驗所用左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星、7H9培養(yǎng)基藥粉均購買于Sigma公司。營養(yǎng)添加劑OADC購買于美國BD公司，羅氏培養(yǎng)基購買于珠海銀科公司，96孔板購買于美國Costar公司，阿爾瑪藍(Alamar blue)購買于美國Bio-Rad公司。

二、研究方法

1. 微孔板阿爾瑪藍顯色法(micro-plate Alamar blue assay，MABA)藥敏試驗：刮取羅氏培養(yǎng)基上生長4周的新鮮菌落，磨菌瓶研磨均勻，稀釋菌懸液至1麥氏比濁度，再稀釋1/20，向預制的含藥96孔板中每孔加入100 μl菌液。37 ℃培養(yǎng)7 d，再向微孔板中加入20 μl阿爾瑪藍和50 μl 5% Tween-80的預混顯色液，37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)24 h觀察96孔板顏色變化。判定標準：藍色孔為無菌生長，粉色孔為有菌生長，藍色孔的最低藥物濃度記為能抑制結(jié)核分枝桿菌生長的MIC。對3種氟喹諾酮類藥物(左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星)均設置11個倍比稀釋的濃度測試梯度，為0.032～32 μg/ml。當MIC>判定界值時判斷為耐藥，反之則為敏感。按照WHO推薦標準，分別按照1 μg/ml、2 μg/ml、1 μg/ml 作為左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星的流行病學耐藥判讀標準[5]，其中高水平耐藥按照MIC≥4 μg/ml判讀[11]。

2. 氟喹諾酮類耐藥相關(guān)基因擴增及序列測定：新鮮菌落80 ℃金屬浴2 h，離心半徑8 cm，12 000 r/min離心10 min去上清，每個環(huán)氧樹脂(EB)離心管內(nèi)加20 μg/ml溶菌酶200 μl和菌沉淀37 ℃孵育過夜。按照MasterPure基因組DNA提取試劑盒流程抽提菌株的基因組DNA。設計引物對gyrA和gyrB進行擴增、產(chǎn)物測序。gyrA上游引物序列5′-GATGACAGACACGACGTTGC-3′，下游引物序列5′-GGGCTTCGGTGTACCTCAT-3′，擴增產(chǎn)物大小為398 bp；gyrB上游引物序列5′-GAGTTGGTGCGGCGTAAGAGC-3′，下游引物序列5′-CGGCCATCAAGCACGATCTTG-3′，擴增產(chǎn)物大小為322 bp。以上擴增產(chǎn)物均送睿博興科公司測序。

結(jié) 果

1. 左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星的MIC結(jié)果：在84株廣泛耐藥菌株中，左氧氟沙星的MIC值分布在0.25～16 μg/ml之間，莫西沙星的MIC值分布在0.125～16 μg/ml之間，加替沙星的MIC值分布在0.125～8 μg/ml之間。所有廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株對左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星的MABA法藥敏試驗MIC結(jié)果如表1所示。分離株對左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星的耐藥率分別是88.1%、44.0%、61.9%。

表1 84株廣泛耐藥MTB菌株對左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星的MIC值分布情況

注 Lfx：左氧氟沙星；Mfx：莫西沙星； Gfx：加替沙星

2. 三種新型喹諾酮類藥物之間的交叉耐藥結(jié)果：按照WHO推薦的1 μg/ml、2 μg/ml、1 μg/ml判讀左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星耐藥情況，84株臨床分離株中包括左氧氟沙星耐藥74株、莫西沙星耐藥37株、加替沙星耐藥52株，對這3種新型氟喹諾酮類藥物同時耐藥的菌株有37株。按照WHO提出的莫西沙星耐藥臨界值0.5 μg/ml判讀，臨床分離株對左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星耐藥的菌株數(shù)目分別是74、76、52株，對3種藥物同時耐藥的菌株有52株，如圖1所示。

圖1 左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星三種新型氟喹諾酮類藥物之間的交叉性耐藥情況

3. 耐藥相關(guān)基因測序分析結(jié)果：對菌株進行g(shù)yrA和gyrB測序分析，gyrA基因突變率較高(89.3%，75/84)。突變集中在第88、90、91、94位點，以第94位點突變?yōu)橹?57.1%，48/84)，且在該位點檢測到Asp94Gly、Asp94Asn、Asp94Ala、Asp94Tyr、Asp94His共5種氨基酸突變形式，其中存在Asp94Gly突變的菌株MIC較高，該突變位點和形式可能與氟喹諾酮類藥物高水平耐藥相關(guān)，具體數(shù)據(jù)見表2。gyrB未見堿基突變，均為野生型，未見gyrA和gyrB兩基因聯(lián)合突變。

討 論

氟喹諾酮類藥物在耐藥結(jié)核病治療中非常重要，但此類藥物兼有廣譜抗生素身份，在社區(qū)獲得性肺炎、支氣管擴張、慢性阻塞性肺疾病急性加重期、泌尿系感染等一般細菌感染中廣泛應用，因而易于出現(xiàn)過多藥物暴露而發(fā)生耐藥。廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株對新型氟喹諾酮類抗菌藥物出現(xiàn)較高的耐藥率，將給臨床抗結(jié)核治療方案的制定造成極大難題。

通過MABA法檢測84株廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的MIC值顯示，同一菌株中莫西沙星和加替沙星的MIC小于左氧氟沙星，與研究報道一致[12]。WHO曾經(jīng)推薦的莫西沙星耐藥的臨床臨界值為0.5 μg/ml，新的指南改為推薦0.5 μg/ml和2 μg/ml兩個濃度，但更傾向于推薦應用2 μg/ml的濃度[5]。在84株臨床分離株中，所測試的3種藥物之間存在著雙向交叉耐藥，結(jié)核分枝桿菌復合群對第三代和第四代氟喹諾酮類藥物有較高的耐藥比例，這一結(jié)論也和目前指南[5-6]指出的第四代氟喹諾酮類藥物體外藥敏試驗提示交叉耐藥一致[12-15]。當按照0.5 μg/ml標準判讀莫西沙星耐藥時，耐藥菌株比例(76/84，90.5%)甚至超過左氧氟沙星耐藥的菌株(74/84，88.1%)，但按照2 μg/ml耐藥界值判讀，則莫西沙星耐藥菌株的比例大幅度降低(44.0%，37/84)。由此不難發(fā)現(xiàn)，藥物敏感性試驗中臨界值的選定對于耐藥和交叉耐藥的判定起著決定性影響，因此臨界濃度的確定需要在長期、多中心、大數(shù)據(jù)評估的基礎(chǔ)之上建立才可能更準確。

除了莫西沙星外，WHO新的指南也調(diào)整了左氧氟沙星的耐藥臨界濃度，由2 μg/ml更改為1 μg/ml[5]。本課題組一項研究也證實目前應用的左氧氟沙星臨界濃度值大于結(jié)核分枝桿菌的流行病學界值，故而會將一些含有耐藥相關(guān)基因突變的菌株判讀為野生菌株[17]。Poissy等[11]對5株廣泛耐藥菌株進行動物實驗得出結(jié)論，對左氧氟沙星耐藥的廣泛耐藥菌株在莫西沙星MIC<2 μg/ml時仍可在廣泛結(jié)核病治療中應用。Maitre等[18]認為無論氟喹諾酮類耐藥還是敏感，在廣泛耐藥結(jié)核病的治療中莫西沙星的治療效果明顯優(yōu)于左氧氟沙星。本研究有39株(39/84，46.43%)臨床分離株因莫西沙星耐藥臨界值由0.5 μg/ml 變?yōu)? μg/ml而被判讀為莫西沙星敏感菌株，有13株(13/84，15.48%)菌株對左氧氟沙星的MIC為1 μg/ml、因臨界值改變由原來的敏感菌株被判讀為耐藥菌株。然而，這些患者應用莫西沙星方案是否有效尚不得而知。耐藥臨界值是提示結(jié)核分枝桿菌對藥物敏感情況的一項重要指標，在患者抗結(jié)核方案的制定中起到非常重要的作用。然而WHO對莫西沙星MIC判讀標準改變原因并未做出詳細的解釋，左氧氟沙星耐藥且莫西沙星MIC介于0.5～2 μg/ml之間的菌株對莫西沙星臨床治療效果如何，還需要進一步的臨床觀察和評估。

表2 84株廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株中g(shù)yrA基因突變形式和MIC

注 Lfx：左氧氟沙星；Mfx：莫西沙星； Gfx：加替沙星；Ala：丙氨酸；Asn：天冬酰胺；Val：纈氨酸；Pro：脯氨酸；His：組氨酸；Tyr：酪氨酸；Gly：甘氨酸；Cys：半胱氨酸；Asp：天冬氨酸；Ser：絲氨酸；耐藥菌株數(shù)目按照流行病學界值判讀；高水平耐藥定義為MIC≥4 μg/ml

按照莫西沙星臨床耐藥臨界濃度2 μg/ml的標準，左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星三者之間比較，出現(xiàn)了左氧氟沙星、加替沙星耐藥但莫西沙星敏感的現(xiàn)象。本研究中加替沙星耐藥率高于莫西沙星，考慮是因為加替沙星作為第四代氟喹諾酮類藥物，殺菌活性較強，然而其MIC臨界值則使用了和三代氟喹諾酮類藥物相同的1 μg/ml標準。不排除隨著加替沙星使用的增多，在獲得更多數(shù)據(jù)的情況下會對耐藥臨界值的調(diào)整。

因氟喹諾酮類藥物不同于一線抗結(jié)核藥物的殺菌機制，被廣泛應用于耐藥結(jié)核病的治療[19]。本研究發(fā)現(xiàn)的突變熱點主要集中在gyrA基因的QRDR，該段序列高度保守，是氟喹諾酮類藥物結(jié)合的主要部位[21]。本研究結(jié)果初步表明，gyrA基因突變是廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌對以上3種氟喹諾酮類藥物耐藥主要機制。本研究得到的gyrA基因突變均為錯義突變，主要發(fā)生在基因保守區(qū)第67～106位的密碼子區(qū)，第88位、90位、91位、94位密碼子上，與國內(nèi)外報道一致[16,21]。Asp94Gly和Ala90Val的改變是最常見的耐藥突變類型，與同類研究結(jié)果一致[16,22]。在gyrA基因突變類型中，Asp94Gly位點突變可能與氟喹諾酮類高水平耐藥有關(guān)，該種突變形式相關(guān)的高水平耐藥菌株數(shù)目為左氧氟沙星>莫西沙星>加替沙星，說明在目前左氧氟沙星更易出現(xiàn)高水平耐藥突變。可能與該位點基因突變類型引起致氟喹諾酮類藥物靶標gyrA結(jié)構(gòu)的顯著改變有關(guān)，氟喹諾酮類藥物和gyrA結(jié)合位點發(fā)生改變，使A亞基和氟喹諾酮類藥物結(jié)合能力顯著下降，進而導致MIC的變化并出現(xiàn)耐藥。

在本研究的84株廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株中，未檢測到gyrA突變也無gyrB的菌株有9株，其中分別有4株對左氧氟沙星耐藥、5株對莫西沙星耐藥。此種表型藥敏試驗和基因型藥敏結(jié)果不一致的現(xiàn)象，推測可能與菌群的異質(zhì)性有關(guān)。患者感染的結(jié)核分枝桿菌復合群同時存在對氟喹諾酮類藥物耐藥和敏感的不同菌群，如敏感菌株為優(yōu)勢菌群，可能會因為耐藥菌株比例較低而無法檢測到相關(guān)耐藥基因突變，而表型藥敏試驗由于能檢測到較低比例的耐藥菌群的存在，因此報告耐藥[23]。另外，gyrA和gyrB基因突變以外的其他耐藥機制也可能造成上述結(jié)果的不一致，如拓撲異構(gòu)酶Ⅳ的改變、細胞膜通透性改變、藥物外排泵等機制。

部分廣泛耐藥菌株在第88和第90位點存在突變(Gly88Ala突變3株、Ala90Val突變4株)，但這些菌株仍表現(xiàn)為對這3種新型氟喹諾酮類藥物敏感的藥敏表型，考慮為氨基酸結(jié)構(gòu)原因。纈氨酸(Val)、甘氨酸(Gly)和丙氨酸(Ala)同屬于非極性氨基酸，且這三種氨基酸在結(jié)構(gòu)、荷電性等方面相似，因此Gly88Ala、Ala90Val的改變未能引起gyrA基因與氟喹諾酮類藥物結(jié)合能力的明顯改變，故未能導致明顯耐藥表型改變。

綜上所述，廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌中氟喹諾酮類藥物耐藥形勢嚴峻，新型氟喹諾酮類藥物已存在嚴重耐藥，氟喹諾酮類藥物在廣泛耐藥結(jié)核病治療中的應用受到極大地挑戰(zhàn)。在廣泛耐藥結(jié)核病治療方案制定中，應按照藥敏實驗結(jié)果評估相應的用藥指征，而耐藥界值的判定需要更多的臨床數(shù)據(jù)驗證。

[1] Rustomjee R, Lienhardt C, Kanyok T, et al. A Phase Ⅱ study of the sterilising activities of ofloxacin, gatifloxacin and moxifloxacin in pulmonary tuberculosis. Int J Tuberc Lung Dis, 2008, 12(2):128-38.

[2] Jindani A, Harrison TS, Nunn AJ, et al. High-dose rifapentine with moxifloxacin for pulmonary tuberculosis.. N Engl J Med, 2014, 371(17):1599-1608.

[3] Kohno S, Koga H, Kaku M, et al. Prospective comparative study of ofloxacin or ethambutol for the treatment of pulmonary tuberculosis. Chest, 1992, 102(6):1815-1818.

[4] Merle CS, Fielding K, Sow OB,et al. A four-month gatifloxacin-containing regimen for treating tuberculosis.N Engl J Med, 2014, 371(17):1588-1598.

[5] World Health Organization. Companion handbook to the guidelines for the pmgrammatic management of drugresistant tuberculosis. Geneva: World Health 0rganization, 2014．

[6] 中國防癆協(xié)會. 耐藥結(jié)核病化學治療指南(2015). 中國防癆雜志, 2015, 37(5):421-469.

[7] Chen TC, Lu PL, Lin CY, et al. Fluoroquinolones are associa-ted with delayed treatment and resistance in tuberculosis: a systematic review and meta-analysis. In J Infect Dis, 2011, 15(3):e211-e216.

[8] 盧峰岳, 俞日霞, 胡族瓊，等.結(jié)核分枝桿菌DNA促旋酶基因突變與耐氟喹諾酮類藥物的相關(guān)性研究.中國防癆雜志, 2014,36(6): 429-433.

[9] Sun Z, Zhang J, Zhang X, et al. Comparison ofgyrAgene mutations between laboratory-selected ofloxacin-resistantMycobacteriumtuberculosisstrains and clinical isolates. Int J Antimicrob Agents, 2008 31(2):115-121.

[10] 黃學銳, 高微微, 張旭霞,等. 氧氟沙星和左氧氟沙星抗結(jié)核分枝桿菌臨床耐藥界限的研究. 中華結(jié)核和呼吸雜志, 2004, 27(2):84-88.

[11] Poissy J, Aubry A, Fernandez C, et al. Should moxifloxacin be used for the treatment of extensively drug-resistant tuberculosis? An answer from a murine model. Antimicrobl Agents Chemother, 2010, 54(11):4765-4771.

[12] Ginsburg AS, Grosset JH, Bishai WR. Fluoroquinolones, tuberculosis, and resistance. Lancet Infect Dis, 2003, 3(7):432-442.

[13] 王前, 宋媛媛, 逄宇,等. 耐氧氟沙星結(jié)核分枝桿菌對五種氟喹諾酮類藥物交叉耐藥的研究. 中國防癆雜志, 2014, 36(6):453-457.

[14] Kempker RR, Barth AB, Vashakidze S, et al. Cavitary penetration of levofloxacin among patients with multidrug-resistant tuberculosis. Antimicrob Agents Chemother, 2015, 59(6):3149-3155.

[15] Lee J, Lee CH, Kim DK, et al. Retrospective comparison of levofloxacin and moxifloxacin on multidrug-resistant tuberculosis treatment outcomes. Korean J Intern Med, 2011, 26(2):153-159.

[16] Chien JY, Chiu WY, Chien ST, et al. Mutations ingyrAandgyrBamong Fluoroquinolone- and Multidrug-ResistantMycobacteriumtuberculosisIsolates. Antimicrob Agents Chemother, 2016, 60(4):2090-2096.

[17] Yu X, Wang G, Chen S, et al. Wild-Type and Non-Wild-TypeMycobacteriumtuberculosisMIC Distributions for the Novel Fluoroquinolone Antofloxacin Compared with Those for Ofloxacin, Levofloxacin, and Moxifloxacin. Antimicrob Agents Chemother, 2016, 60(9):5232-5237.

[18] Maitre T, Petitjean G, Chauffour A, et al. Are moxifloxacin and levofloxacin equally effective to treat XDR tuberculosis? J Antimicrob Chemother, 2017. [Epub ahead of print]

[19] Ziganshina LE, Squire SB. Fluoroquinolones for treating tuberculosis. Cochrane Database Syst Rev, 2008, (1):CD004795.

[20] Lau RW, Ho PL, Kao RY, et al. Molecular characterization of fluoroquinolone resistance inMycobacteriumtuberculosis: functional analysis of gyrA mutation at position 74. Antimicrob Agents Chemother，2011，55(2):608-614.

[21] 張治國, 杜春英, 張倩,等. 我國結(jié)核分枝桿菌gyrA不同突變類型對氟喹諾酮類藥物耐藥水平的相關(guān)性研究. 中國防癆雜志, 2016, 38(9):706-711.

[22] Aldred KJ,Blower TR,Kerns RJ,et al. Fluoroquinolone interactions withMycobacteriumtuberculosisgyrase: Enhancing drug activityagainst wild-type and resistant gyrase. Proc Natl Acad Sci USA，2016，113(7):E839-846.

[23] 柳清云, 孫剛, 高謙. 結(jié)核分枝桿菌(MTB)異質(zhì)性耐藥研究進展. 復旦學報醫(yī)學版, 2013, 40(1):1-4.

(本文編輯：范永德)

首屆臨床結(jié)核病超聲診斷與治療新進展研討會征文通知

超聲在結(jié)核病的診斷與治療中不可或缺，應該引起業(yè)界同仁的高度重視并進行實踐探索。超聲及超聲介入技術(shù)簡便易行，具有高性價比，尤其超聲技術(shù)對多臟器的可企及性，更是開辟了對多種臟器結(jié)核病診斷與治療的新領(lǐng)域。為及時交流臨床結(jié)核病超聲診斷與治療的經(jīng)驗和科研成果，掌握最新學術(shù)動態(tài)，推動結(jié)核病超聲診療工作的規(guī)范化進程，由中國防癆協(xié)會《中國防癆雜志》期刊社、杭州市紅十字會醫(yī)院聯(lián)合主辦的“首屆臨床結(jié)核病超聲診斷與治療新進展研討會”擬于2017年10月19—22日在浙江省杭州市召開。大會將邀請國內(nèi)結(jié)核病超聲領(lǐng)域、臨床領(lǐng)域、基礎(chǔ)研究領(lǐng)域知名專家對結(jié)核病診療國內(nèi)外最新研究動向、最新理論等進行精彩的專題學術(shù)講座，同時將遴選優(yōu)秀會議征文進行大會發(fā)言，并擬于《中國防癆雜志》組織專題重點號刊發(fā)。

征文要求：(1)凡符合超聲診斷與介入技術(shù)在結(jié)核病臨床應用、基礎(chǔ)研究方面內(nèi)容的稿件均在征文之列。來稿要求未在國內(nèi)外公開發(fā)行刊物上發(fā)表(請在文題上方注明“未公開發(fā)表，未一稿多投”)；(2)論著類稿件需提供全文+800字左右的摘要，摘要包括目的、方法、結(jié)果和結(jié)論，也可僅提供符合上述要求的摘要；(3)其他類型稿件為全文投稿；(4)全文4000字以內(nèi)，編排順序為：題目、郵編、單位(至科室)、姓名、中文摘要、正文、參考文獻；(5)本次會議征文不接收通過郵局郵寄的紙質(zhì)版論文，只接收Word版電子文件；格式為：題目3號黑體、正文5號宋體，單倍行距；(6)請務必附第一作者與通信作者的通信地址、聯(lián)系電話、手機、Email。入選論文將納入會議《資料匯編》，經(jīng)大會學術(shù)委員會評選出的優(yōu)秀論文將推薦刊登于《中國防癆雜志》或《結(jié)核病與肺部健康雜志》，并安排大會發(fā)言；(7)征文請通過Email發(fā)送至郭萌編輯郵箱(手機：17718596164；電話：010-62257257；Email：guomenggg@163.com)。郵件注明“結(jié)核病超聲會議”；截止日期：2017年9月1日。

《中國防癆雜志》期刊社

杭州市紅十字會醫(yī)院

Resistance analysis of 84 extensively drug-resistantMycobacteriumtuberculosisisolates against three new generation fluoroquinolones

ZONGZhao-jing,JINGWei,HUOFeng-min,DONGLing-ling,MAYi-feng,PANGYu,HUANGHai-rong.

NationalClinicalLaboratoryonTuberculosis,BeijingKeyLaboratoryforDrug-resistantTuberculosisResearch,BeijingChestHospital,CapitalMedicalUniversity,BeijingTuberculosisandThoracicTumorInstitute,Beijing101149，China

HUANGHai-rong,Email:huanghairong@tb123.org

Objective To investigate the resistant status of extensively drug-resistantMycobacteriumtuberculosisisolates against new genratation fluroquinolones (FQs)． Methods Extensively drug-resistantMycobacteriumtuberculosis(XDR-MTB) clinical isolates were collected from Beijing Chest Hospital between 2012—2014. Absolute concentration method was used for ofloxacin (Ofx) and levofloxacin (Lfx) susceptibility testing, while broth dilution method was used to detect the minimal inhibitory concentration (MIC) of the isolates against three FQs，including Lfx，moxifloxacin (Mfx) and gatifloxacin (Gfx). The quinolone resistance determining regions (QRDR) ofgyrAandgyrBwere sequenced for all the enrolled isolates. Results A total of 84 XDR-MTB isolates were enrolled. Among them,74 (74/84, 88.1%), 37 (37/84，44.0%) and 52 (52/84, 61.9%) isolates were resistant to Lfx, Mfx and Gfx according the cut-off criteria recommended by WHO, respectively. Mutations at 88, 90, 91 and 94 locus ofgyrAwere detected among 89.3% (75/84)of the enrolled isolates, and Asp94Gly accounting for high-level FQs resistance. All the strains had wild typegyrB. Conclusion Our findings demonstrated that new generation FQs resistance were very frequently observed among XDR-MTB isolates, and mutation within QRDR ofgyrAwas the main mechanism of FQs resistance.

Extensively drug-resistant tuberculosis;Mycobacteriumtuberculosis; Quinolones; Microbial sensitivity tests; Multidrug resistance-associated proteins; Point Mutation

10.3969/j.issn.1000-6621.2017.08.005

101149 首都醫(yī)科大學附屬北京胸科醫(yī)院 北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所 國家結(jié)核病臨床實驗室

黃海榮，Email: huanghairong@tb123.org

2017-06-19)