CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在常見上皮性皮膚腫瘤中的分布

周文明 張 偉 申小平 劉 志 李世軍 陸洪光

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·論著·

CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在常見上皮性皮膚腫瘤中的分布

周文明1，2張 偉1申小平1劉 志1李世軍1陸洪光1

目的： 檢測(cè)CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在皮膚鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、鮑溫病、日光性角化病中的分布。方法： 采用免疫組織化學(xué)法(MaxVision法)檢測(cè)CD163標(biāo)記的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在正常皮膚、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、鮑溫病、日光性角化病中的分布。結(jié)果： 每高倍鏡視野下正常皮膚、鮑溫病、日光性角化病真皮淺層中CD163+巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)為(9.5000±1.71594)、(43.9200±9.98716)和(49.4000±8.73830)個(gè);基底細(xì)胞癌腫瘤間質(zhì)中為(42.1724 1±11.73234)，鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤間質(zhì)中及腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi)為(65.8421±14.05649)。結(jié)論： CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可能與皮膚上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞； 皮膚鱗狀細(xì)胞癌； 基底細(xì)胞癌； 鮑溫??； 日光性角化??； CD163

鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、鮑溫病、日光性角化病是皮膚常見的腫瘤，隨著人類壽命的延長(zhǎng)及生活方式的改變，環(huán)境污染的加重，上述腫瘤發(fā)病率有增加的趨勢(shì)，目前一些研究表明這些腫瘤的發(fā)生與紫外線、長(zhǎng)期慢性刺激等原因引起的細(xì)胞自身DNA突變有關(guān)。Scott等研究表明腫瘤的發(fā)生除基因突變因素外，還與由大量淋巴細(xì)胞、血管、淋巴管、纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)等在腫瘤細(xì)胞周圍組成的腫瘤微環(huán)境相關(guān)[1]。其中存在于腫瘤實(shí)體及其周圍組織中的巨噬細(xì)胞稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated macrophages, TAM)，主要是M2型巨噬細(xì)胞，常伴隨實(shí)體腫瘤存在于腫瘤細(xì)胞周圍及其間質(zhì)組織中。CDl63是編碼在12p13.3上的跨膜蛋白，并僅限于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞譜系，以往研究認(rèn)為是M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞特異性較高的一個(gè)標(biāo)志物[2,3],能促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。因此，我們?cè)噲D通過免疫組化標(biāo)記觀察CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在皮膚常見上皮性腫瘤中的分布情況，并比較不同皮膚腫瘤間分布的差異性，探討CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在皮膚上皮性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中作用及意義。

1 資料與方法

1.1 資料收集 本研究收集貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科2008-2016年經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)的皮膚上皮性腫瘤病變的活檢存檔蠟塊，鱗狀細(xì)胞癌19例,男9例、女10例，曝光部位15例、非曝光部位4例，最大年齡88歲、最小年齡17歲，平均71.35歲；鮑溫病25例，男15例、女10例，最大年齡84歲、最小年齡50歲，平均66.77歲，均位于非曝光部位；日光性角化病20例，男6例，女14例，最小年齡25歲(繼發(fā)于著色性干皮病)，最大年齡87歲，平均71.38歲；基底細(xì)胞癌29例，男12例、女17例，曝光部位27例、非曝光部位2例，最大年齡82歲、最小年齡33歲，平均61.89歲；10例正常皮膚來源于整形外科整形術(shù)后遺棄的皮膚，所有標(biāo)本經(jīng)10%的中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，所有HE切片均由兩位病理醫(yī)生閱片。

1.2 主要試劑 即用型鼠抗人單克隆抗體CD163、即用型快速免疫M(jìn)axVisionTM檢測(cè)試劑盒及DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 常規(guī)石蠟包埋，4 μm切片,防脫多聚賴氨酸玻片撈片，60℃烘考2 h，于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 免疫組織化學(xué)(MaxVision)陽性對(duì)照由福州邁新生物技術(shù)有限公司提供，陰性對(duì)照用PBS代替一抗。石蠟切片脫蠟，水化，檸檬酸高壓修復(fù)抗原，按試劑盒說明書進(jìn)行操作，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹膠封片，光鏡觀察。

1.4 結(jié)果判定 CD163定位于的胞膜或胞質(zhì)，陽性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜棕黃色顆粒沉積，CD163陽性細(xì)胞即M2型TAM，首先低倍鏡(×100)觀察切片TAM密集區(qū)域，然后隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野(×400)，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的數(shù)量，取平均值，相隔15天后再次用上述方法計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)量，兩次結(jié)果的平均值納入最后統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 每高倍鏡視野下(×400)，正常皮膚真皮淺層中僅見少量CD163+TAM，數(shù)量為(9.5000±1.71594)個(gè)；鮑溫病、日光性角化病的真皮淺層見大量的CD163+TAM，數(shù)量分別為(43.9200±9.98716)個(gè)、(49.4000±8.73830)個(gè);基底細(xì)胞癌的腫瘤間質(zhì)中見大量的CD163+TAM浸潤(rùn)，數(shù)量為(42.1724±11.73234)個(gè)、鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤間質(zhì)中及腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi)見大量的CD163+TAM浸潤(rùn)，數(shù)量為(65.8421±14.05649)個(gè)(圖1)。

2.2 在鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤實(shí)質(zhì)中易見CD163+TAM，在鮑溫病、日光性角化病、基底細(xì)胞癌的腫瘤實(shí)質(zhì)中幾乎未見CD163+TAM(圖1)。

2.3 CD163+TAM在皮膚腫瘤組織中均有較多浸潤(rùn)，與正常皮膚相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；鮑溫病、日光性角化病、基底細(xì)胞癌中CD163+TAM的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；鮑溫病、日光性角化、基底細(xì)胞癌與皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的CD163+TAM比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 正常對(duì)照組及皮膚上皮性腫瘤組織中CD163+TAM兩兩比較

注：正常對(duì)照組 (N);鮑溫病(BD);日光性角化病(AK);基底細(xì)胞癌(BCC);鱗狀細(xì)胞癌(SCC)

3 討論

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞來源于骨髓中的造血祖細(xì)胞，進(jìn)入血液循環(huán)后變成單核細(xì)胞，進(jìn)而遷移至腫瘤組織中分化而成。TAM具有高度的異質(zhì)性和可塑性，在不同的微環(huán)境中可活化形成不同的表型，巨噬細(xì)胞根據(jù)環(huán)境不同大致可極化為經(jīng)典活化型巨噬細(xì)胞(M1型)及替代活化型巨噬細(xì)胞(M2型),M1型巨噬細(xì)胞主要由腫瘤壞死因子TNF-α，干擾素IFN-γ 所誘導(dǎo)分化，具有很強(qiáng)的呈提抗原能力， 通過分泌產(chǎn)生白細(xì)胞介素 IL-12，IL-23等其他活性氧化物， 從而能夠殺滅微生物和發(fā)揮抗腫瘤作用。M2型巨噬細(xì)胞是由IL-4、IL-10、IL-13、CSF-1 誘導(dǎo)分化，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移[4]。Schmieder等[3]研究指出，在腫瘤發(fā)病的開始階段招募到腫瘤部位的單核細(xì)胞接受促炎癥信號(hào)分化成M1型巨噬細(xì)胞，隨后M1型巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞即TAM轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)一步發(fā)展。由于巨噬細(xì)胞膜表面趨化因子受體存在差異性表達(dá)，腫瘤組織能夠通過分泌趨化因子選擇性的募集M2型極化的TAM，從而使之參與免疫抑制性腫瘤微環(huán)境的形成[5]。Van Overmeire等[6]研究認(rèn)為，組織氧含量低，TAM表達(dá)上調(diào)，而侵襲性強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，腫瘤組織內(nèi)及其周圍形成低氧環(huán)境，利于TAM的聚集。大量研究表明腫瘤組織中M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增多，M2型巨噬細(xì)胞通過分泌組織基質(zhì)金屬蛋白酶促進(jìn)基質(zhì)重塑，破壞基底膜，通過分泌釋放促血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor VEGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor B，TGF-β)促進(jìn)血管、淋巴管的生成和參與機(jī)體的免疫抑制反應(yīng)，以適應(yīng)及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并為腫瘤細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移開辟了道路,發(fā)揮促癌作用[7-10]。此外有報(bào)道，在肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、前列腺癌、黑素瘤、淋巴瘤等腫瘤中TAM高表達(dá)，患者往往生存率低，死亡率高、預(yù)后差[11-14，3，8],但在結(jié)腸癌腫瘤中 TAM高表達(dá)，患者生存率高，預(yù)后好[15]。Lundholm等研究認(rèn)為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在前列腺癌與結(jié)腸癌中浸潤(rùn)增加表現(xiàn)出兩種截然不同的預(yù)后，這主要是因?yàn)樵诮Y(jié)腸癌中有大量的Th1細(xì)胞及細(xì)胞毒性T細(xì)胞，而前列腺癌中主要是未活化的初始T細(xì)胞[14]。殷芳等分別用M1、M2型巨噬細(xì)胞與黑素細(xì)胞株A375培養(yǎng)，M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，M1型巨噬細(xì)胞抑制A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移[15]，表明M2型巨噬細(xì)胞是腫瘤惡性生物學(xué)行為的“助推器”。

①正常對(duì)照組真皮淺層；②鮑溫病真皮淺層；③日光性角化真皮淺層；④基底細(xì)胞癌腫瘤間質(zhì)；⑤鱗狀細(xì)胞癌腫瘤間質(zhì)；⑥鱗狀細(xì)胞癌腫瘤實(shí)質(zhì)

圖1 CD163+TAM在不同皮膚組織中的分布(IHC,×400)

國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道皮膚常見上皮性腫瘤與TAM的關(guān)系的研究，大部分腫瘤的發(fā)生、發(fā)展需經(jīng)過癌前病變、原位癌、最后發(fā)展為浸潤(rùn)癌，是一個(gè)多因素、多階段、逐漸的演變過程，日光性角化病、鮑溫病、鱗狀細(xì)胞癌屬于鱗狀上皮來源的不同發(fā)展階段腫瘤，且我們已知鱗狀細(xì)胞癌比基底細(xì)胞癌具有更加惡性的生物學(xué)行為，對(duì)于我們研究CD163+TAM在皮膚常見上皮性腫瘤中的發(fā)生發(fā)展中的作用更為有利。我們的研究表明，鮑溫病、日光性角化病的真皮淺層及基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤間質(zhì)中見大量的CD163+TAM浸潤(rùn)，提示在腫瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子及高代謝情況下造成腫瘤組織周圍缺氧等因素促進(jìn)了CD163+TAM募集；在鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤實(shí)質(zhì)中易見CD163+TAM，在鮑溫病、日光性角化病、基底細(xì)胞癌的腫瘤實(shí)質(zhì)中幾乎未見CD163+TAM，提示可能為基底膜及在HE染色下基底細(xì)胞癌腫瘤實(shí)質(zhì)周圍的收縮間隙作為一個(gè)屏障阻止CD163+TAM的滲入，同時(shí)也阻止了腫瘤細(xì)胞進(jìn)入周圍間質(zhì)，使得腫瘤細(xì)胞無法通過間質(zhì)血管及淋巴管實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移，這可能是基底細(xì)胞癌罕見遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的原因之一，同時(shí)提示皮膚上皮性腫瘤中瘤巢實(shí)質(zhì)內(nèi)存在CD163+TAM與腫瘤的惡性潛能相關(guān)可能。鮑溫病、日光性角化病、基底細(xì)胞癌中的CD163+TAM分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與其三種腫瘤均為局部病變相一致，而其三種局部病變中CD163+TAM的密度與鱗狀細(xì)胞癌相比均明顯低于鱗狀細(xì)胞癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明在皮膚上皮性常見腫瘤中CD163+TAM的密度隨著腫瘤生物學(xué)行為惡性潛能的增加上調(diào)。我們推測(cè)，一方面，腫瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子及迅速生長(zhǎng)造成的低氧環(huán)境促進(jìn)了巨噬細(xì)胞向CD163+TAM分化及募集在腫瘤周圍，另一方面，CD163+TAM細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子促進(jìn)新血管和淋巴管生成，破壞基底膜，腫瘤周圍組織重塑，以適應(yīng)及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并為腫瘤細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件，腫瘤細(xì)胞與CD163+TAM兩者相輔相成，形成一種共生的環(huán)境。Kakizaki等[16]在皮膚原發(fā)性CD30+淋巴細(xì)胞增殖性病變中淋巴瘤樣丘疹病與皮膚原發(fā)性CD30+大細(xì)胞間變性淋巴瘤中CD163+TAM的構(gòu)成比較研究與我們的研究相一致，表明隨著腫瘤的進(jìn)展，CD163+TAM逐漸增多。

巨噬細(xì)胞在不同的細(xì)胞因子作用下實(shí)現(xiàn)M1型向M2型或M2型向M1型巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，從而對(duì)腫瘤因子作用起促進(jìn)或抑制的不同作用。

而Pettersen等[17]研究皮膚鱗癌患者癌組織時(shí)發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞發(fā)生多種極化， 其中有M1型、M2型，還存在一類同時(shí)表達(dá)M1和M2型的亞型。我們的數(shù)據(jù)表明鱗狀細(xì)胞癌組織中炎細(xì)胞絕大多數(shù)是CD163陽性，提示該腫瘤組織中主要是M2型或同時(shí)表達(dá)M1和M2型的亞型。Tjiu等的研究表明在基底細(xì)胞癌中，環(huán)氧化酶2誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的增多促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲及血管生長(zhǎng)[18]。Li研究發(fā)現(xiàn)鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)將誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)α誘導(dǎo)蛋白8家族樣蛋白2(TNF-α induced protein8like2, TNFAIP8L2, TIPE2)，消耗TIPE2后巨噬細(xì)胞與鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞共培養(yǎng)后M2表型減少，而鱗狀細(xì)胞癌組織中發(fā)現(xiàn)在巨噬細(xì)胞中高表達(dá)TIPE2的患者的總的5年生存率明顯降低，因此認(rèn)為TIPE2在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和皮膚鱗狀細(xì)胞癌之間起一個(gè)橋梁作用[19]，綜上所述，M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)了皮膚常見上皮性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展，因此可以將CD163+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞作為腫瘤分子治療的一個(gè)靶點(diǎn)，特別是對(duì)無法外科手術(shù)切除、術(shù)后影響美觀及侵襲性轉(zhuǎn)移性的病變具有一定的意義。

[1] Scott DW, Gascoyne RD. The tumour microenvironment in B cell lymphomas[J]. Nature Reviews Cancer,2014,14(8):517-534.

[2] Medrek C, Ponten F, Jimtrom K, et al. The presence of tumor associated macrophages in tumor stroma as a prognostic marker for breast cancer patients[J]. BMC Cancer,2012,23(12):306.

[3] Schmieder A, Michel J, Scnnhaar K, et al. Differentiation and gene expression profile of tumor-associated macmphages[J]. Semin Cancer Biol,2012,22(4):289-297.

[4] Qian BZ, Pollard JW. Macrophage diversity enhances tumor progression and metastasis[J]. Cell,2010,141(1):39-51.

[5] Viola A, Sarukhan A, Bronte V, et al. The pros and cons of chemokines in tumor immunology[J]. Trends Immunol,2012,33(10):496-504.

[6] Van Overmeire E, Laoui D, Keirsse J, et al. Hypoxia and tumor-associated macrophages: a deadly alliance in support of tumor progression[J]. Oncoimmunol,2014,3(2):e27561.

[7] Moussai D, Mitsui H, Pettersen JS, et al. The human cutaneous squamous cell carcinoma microenvironment is characterized by increased lymphatic density and enhanced expression of macrophage-derived VEGF-C[J]. Invest Dermatol,2011,131(3):229-236.

[8] Buergy D, Weber T, Maurer GD, et al. Urokinase receptor, MMP-1 and MMP-9 are markers to differentiate prognosis, adenoma and carcinoma in thyroid malignancies[J]. Int J Cancer,2009,125(4):894-901.

[9] He N, Jin Q, Wang D, et al. Effect of tumor-associated macrophages on invasion and metastasis of gastric cancer cells[J]. Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi,2016,19(7):793-797.

[10] Qinglin H, Hongguang S, Fan L. CD163+M2-type tumor-associated macrophage support the suppression of tumor-infiltrating T cells in osteosarcoma[J]. Int Immunopharmacol,2016,34(2):101-106.

[11] Mitsuhashi A, Goto H, Kuramoto T, et al. Surfactant protein A suppresses lung cancer progression by regulating the polarization of tumor-associated macrophages[J]. Am J Pathol,2013,182(5):1843-1853.

[12] Wang T, Xiao M, Ge Y, et al. BRAF inhibition stimulates melanoma-associated macrophages to drive tumor growth[J]. Clin Cancer Res,2015,21(7):1652-1664.

[13] Ohshima K. Molecular pathology of adult T-cell leukemia/lymphoma[J]. Oncology,2015,89 (Suppl 1):7-15.

[14] Lundholm M, Hagglof C, Wikberg ML, et al. Secreted factors from colorectal and prostate cancer cells skew the immune response in opposite directions[J]. Sci Rep,2015,5(27):15651.

[15] 殷芳，吳飛，陳佳,等.腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞A375生物學(xué)行為的影響.中華皮膚科雜志,2014, 47(9):619-622.

[16] Kakizaki A, Fujimura1 T, Kambayashi Y, et al. Comparison of CD163+macrophages and CD206+cells in lesional skin of CD30+lymphoproliferative disorders of lymphomatoid papulosis and primary cutaneous anaplastic large-cell lymphoma[J]. Acta Derm Venereol,2015,95(5):600-602.

[17] Pettersen JS, Fuentes-Duculan J, Suarez-Farinas M, et al. Tumor-associated macrophages in the cutaneous SCC microenvironment are heterogeneously activated[J]. J Invest Dermatol,2011,131(6):1322-1330.

[18] Tjiu JW, Chen JS, Shun CT, et al. Tumor-associated macrophage-induced invasion and angiogenesis of human basal cell carcinoma cells by cyclooxygenase-2 induction[J]. J Invest Dermatol,2011,129(4):1016-1025.

[19] Li X. TIPE2 regulates tumor-associated macrophages in skin squamous cell carcinoma[J]. Tumour Biol,2016,37(4):5585-5590.

(收稿：2017-01-15 修回：2017-03-11)

Detect of CD163+tumor associated macrophages in common skin epithelial tumors

ZHOUWenming1，2,ZHANGWei1,SHENXiaoping1,LIUZhi1,LIShijun1,LUHongguang1.

1.DepartmentofDermatology,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,China; 2.People'sHospitalofTongren,Guizhou,Tongren554300,China

Correspondingauthor:LUHongguang,E-mail：hongguanglu@hotmail.com

Objective: To detect the distribution of CD163+tumor associated macrophage in skin squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, Bowen's disease and actinic keratosis. Methods: The distribution of CD163+tumor associated macrophages under in the normal skin,skin squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, Bowen's disease and actinic keratosis were detected by the immunohistochemitry method (MaxVision). Results: The number of CD163+tumor associated macrophage in the upper dermis of the normal skin, Bowen's disease and actinic keratosis were (9.5000±1.71594), (43.9200±9.98716) and (49.4000±8.73830) respectively and 42.17241±11.73234 in the tumor stroma of basal cell carcinoma, 65.8421±14.05649 in the tumor stroma and parenchyma of the skin squamous cell carcinoma. Conclusion: The CD163+tumor associated macrophages may play an important role in the occurrence and development of the common skin epithelial tumors.

tumor associated macrophage; skin squamous cell carcinoma; basal cell carcinoma; Bowen's disease; actinic keratosis; CD163

貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助(編號(hào)：0215025100104)

1貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科，貴州貴陽,550004 2貴州省銅仁市人民醫(yī)院，貴州銅仁,554300

陸洪光，E-mail：hongguanglu@hotmail.com