超聲引導下穿刺細胞檢測Galectin-3和CK 19在良、惡性甲狀腺濾泡性腫瘤的表達差異

賈麗瓊，潘炯，李小強

（上海市第一人民醫院寶山分院，上海200940）

超聲引導下穿刺細胞檢測Galectin-3和CK 19在良、惡性甲狀腺濾泡性腫瘤的表達差異

賈麗瓊，潘炯，李小強

（上海市第一人民醫院寶山分院，上海200940）

目的：探討超聲引導下穿刺細胞檢測Galectin-3和CK19在良、惡性甲狀腺濾泡性腫瘤的表達差異。方法：選取甲狀腺濾泡狀癌（FTC）患者34例分為FTC組，甲狀腺濾泡性腺瘤（FA）40例分為FA組。檢測患者的超聲引導下細針穿刺細胞學檢查（FNAC）標本和病理組織的Galectin-3、CK19表達，分析兩組FNAC標本的Galectin-3、CK19表達情況；以病理組織的Galectin-3和CK19表達情況為標準，分析FNAC標本表達Galectin-3和CK19的敏感性、特異性和準確性。比較Galectin-3、CK19與FTC患者的臨床參數資料的關系。結果：Galectin-3、CK19在FTC組和FA組的表達有顯著差異（Galectin-3：Z=－4.478，P=0.000；CK19：Z=－2.307，P=0.021）；FNAC標本檢測CK19、Galectin-3表達的敏感性、特異性、準確性分別為85.7%、76.3%、81.3%，和84.7%、91.2%、87.5%。Galectin-3的表達在FTC患者的不同性別、年齡、腫瘤直徑之間無明顯差異（P＞0.05）；而Galectin-3陽性率在有淋巴結轉移（93.3%）和TNMⅢ+Ⅳ分期（100%）的患者比無淋巴結轉移（63.2%）和TNMⅠ+Ⅱ分期（66.7%）患者的高，差異有統計學意義（分期：T=4.359，P=0.037；淋巴結轉移：T=4.242，P=0.039）；CK19的表達在這些臨床參數之間均無明顯差異（P＞0.05）。結論：FTC患者的FNAC標本檢測Galectin-3和CK19的表達明顯高于FA患者，可為臨床工作用鑒別診斷FTC和FA提供一定的協助作用。

甲狀腺腫瘤；半乳糖凝集素3；活組織檢查，細針；超聲檢查，介入性

甲狀腺濾泡狀癌（FTC）是甲狀腺癌中除乳頭狀癌外最常見的惡性腫瘤[1]。傳統的診斷FTC方法主要依據為腫瘤包膜的穿透和血管侵犯，但術前的穿刺活檢即使多點取材也無法觀察到整個腫瘤的包膜和血管情況[2]。而且分化良好的FTC與甲狀腺濾泡性腺瘤（FA）在組織學上更相近，難以鑒別[2]。因此，為提高術前對FTC的診斷，較多學者著眼于尋找合適的分子標記物協助鑒別診斷FTC。Galectin-3的表達與細胞凋亡受阻以及惡性腫瘤的發展密切相關，其表達是鑒別FTC和FA的一個良好指標[3]。CK19是一種細胞角化蛋白，是診斷甲狀腺良惡性腫瘤的重要指標，對濾泡性病變的良惡性也有一定的區別作用[4]。但這些研究較多的是在組織基礎上檢測Galectin-3和CK19的表達，不如超聲引導下細針穿刺細胞學檢查（FNAC）方便快捷[5]。但是關于在FTC和FA患者的FNAC標本中檢測Galectin-3和CK19的表達是否有明顯差異，具有組織檢測般能輔助鑒別診斷FTC和FA的研究較少，使得臨床上進行FNAC而非穿刺活檢的患者是否進行Galectin-3和CK19表達的檢測缺少依據。因此，本研究對比分析FTC和FA患者的FNAC標本的Galectin-3和CK19表達情況，評估兩者是否對FTC的術前診斷有一定的價值，為應用FNAC標本進行分子標記物協助術前診斷提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年6月—2015年6月在我院進行甲狀腺手術切除的患者350例，納入符合本研究要求的甲狀腺濾泡性癌34例（共38個結節）分為FTC組，甲狀腺濾泡性腺瘤40例（共42個結節）分為FA組。FTC組有男11例，女23例，年齡23～74歲，平均（48.43±8.83）歲；FA組有男8例，女32例，年齡22～71歲，平均（47.22±9.52）歲。納入病例均符合以下要求：①患者在術前均進行了FNAC檢測，穿刺標本保存完整，可進行Galectin-3和CK19表達的檢測；②患者切除結節術后均進行了病理檢查，確診為FTC或FA，并且進行了Galectin-3和CK19表達的檢測；③患者均是在本院初診并接受手術治療，無其他內分泌治療或放化療；④無合并其他惡性腫瘤。本研究經醫院倫理會同意，所有入選患者了解研究意義及簽署知情同意書。

1.2 方法

患者進行超聲檢查，確定穿刺結節。患者取仰臥頭低位，側向非穿刺側以暴露穿刺部位。消毒局麻后，在超聲引導下，細胞針接10mL的注射器約呈45°的角度刺入皮膚，來回針栓，以2～3mL的負壓提插不同的方向5次，將抽吸物進行涂片，固定。穿刺時應注意取到超聲可疑征象處，如微鈣化。送病理科進行CK19和Galectin-3檢測、讀片。結節組織檢測Galectin-3和CK19的表達采用了SP法。組織標本均經福爾馬林固定后進行石蠟包埋、切片、脫蠟、水化步驟后由病理組織的副主任醫師進行讀片，判斷染色結果。Galectin-3主要在細胞質中表達，細胞核以及細胞膜也可見有著色；CK19主要在細胞質中表達。表達強度由兩名副主任醫師獨立觀察評分，評分依據見表1，兼顧染色強度和陽性表達范圍，由兩者得分相乘做最終判斷：0分為陰性（-），1～2為（+），3～6為（++），6分以上為（+++）。

表1 Galectin-3和CK19染色評分方法

1.3 評價指標

根據以上介紹的方法對所有患者的病理組織和FNAC標本進行染色結果的評價，統計FTC和FA患者的Galectin-3、CK19的表達情況，分析FNAC標本的表達在兩組患者之間是否有差異；以病理組織的Galectin-3和CK19表達情況為標準，分析FNAC標本表達Galectin-3和CK19的敏感性、特異性和準確性。對Galectin-3和CK19與FTC患者的臨床參數進行比較，包括性別、年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移、TNM分期。

1.4 統計學方法

實驗數據應用SPSS 19.0軟件進行統計分析處理，采用Mann-Whitney秩和檢驗對FTC組和FA組的FNAC標本的Galectin-3和CK19表達情況進行比較；采用χ2檢驗分析FNAC標本的Galectin-3和CK19表達在FTC患者的不同性別、年齡、腫瘤直徑、TNM分期和有無淋巴結轉移之間是否有差異。

2 結果

2.1 Galectin-3、CK19的表達情況

Galectin-3、CK19在FTC組和FA組的表達情況詳見表2。采用Mann-Whitney秩和檢驗對兩組的FNAC標本的Galectin-3和CK19表達情況進行比較，可得Galectin-3的表達在兩組之間的差異有統計學意義（Z=－4.478，P=0.000）；CK19的表達在兩組之間的差異也有統計學意義（Z=－2.307，P=0.021）。

表2 Galectin-3、CK19在FTC組和FA組的表達情況（例）

2.2 診斷情況

Galectin-3、CK19在FTC和FA中病理組織的免疫組化檢測見圖1，2。以病理組織中表達的Galectin-3、CK19為標準，分析FNAC標本檢測CK19表達的的敏感性、特異性、準確性分別為85.7%、76.3%和81.3%，見表3。FNAC檢測Galectin-3的敏感性、特異性、準確性分別為84.7%、91.2%和87.5%，見表4。

圖1 甲狀腺濾泡狀癌。圖1a：CK19（+）；圖1b：Galectin-3（+）。Figure 1.Follicular thyroid carcinoma.Figure 1a:CK19(+);Figure 1b:Galectin-3(+).

圖2 甲狀腺濾泡性腺瘤。圖2a：CK19（+）；圖2b：Galectin-3（+）。Figure 2.Follicular adenoma.Figure 2a:CK19(+);Figure 2b:Galectin-3(+).

2.3 臨床參數

Galectin-3的表達在FTC患者的不同性別、年齡和腫瘤直徑之間無明顯差異（P＞0.05）；而有淋巴結轉移和TNMⅢ+Ⅳ分期的患者比無淋巴結轉移和TNMⅠ+Ⅱ分期患者的Galectin-3陽性率高（P＜0.05）；CK19的表達在不同性別、年齡、腫瘤直徑、TNM分期和是否有淋巴結轉移的FTC患者之間均無明顯差異（P＞0.05）。見表5。

表3 病理組織和FNAC的CK19的表達情況（結節）

表4 病理組織和FNAC的Galectin-3的表達情況（結節）

表5 CK19、Galectin-3與FTC患者的臨床參數的關系

3 討論

甲狀腺惡性腫瘤是內分泌系統中最常見的惡性腫瘤，多見于中年女性患者[6-8]。其中甲狀腺乳頭狀癌發病率最高，但其預后良好，FTC的發病率僅次于甲狀腺乳頭狀癌但預后較差，而且其缺乏特殊的組織結構和細胞形態，鏡下可見不同程度分化的濾泡，而FA是一種包膜完整的良性腫瘤，鏡下呈濾泡分化，因此部分FTC由于濾泡分化良好，與腺瘤之間難以區分。依據腫瘤包膜的穿透、血管侵犯或遠處轉移來診斷FTC具有一定局限性，也可因取材、切片等因素導致誤診、漏診[9-11]。致使部分良性腫瘤患者接受了惡性腫瘤患者才需要的手術或是部分分化良好的FTC誤診為FA，導致FTC患者未能得到及時合適的治療[12]。因此研究甲狀腺濾泡上皮來源的腫瘤發病機制為國內外研究人員所重視，希望能尋找到合適的輔助手段來協助鑒別診斷FTC。Galectin-3是植物血凝素家族的一員，是一種半乳糖銜接蛋白，主要存在于胞漿，具有調節細胞的增殖、凋亡等功能，與腫瘤的進展密切相關[13-14]。CK19是中間絲蛋白家族的一員，是一種角質蛋白，在細胞的完整性維持、細胞凋亡以及信號傳遞等方面具有重要作用[4]。以往采用組織進行Galectin-3和CK19表達的檢測，已證明在FTC和FA之間有顯著差異。但由于活檢可能引起大出血等風險，現術前逐漸采用FNAC取代穿刺活檢進行術前的檢查。

在本研究中，發現FNAC標本中Galectin-3和CK19在FTC與FA中均可見有表達，且兩組之間的表達情況有顯著差異，這與以往研究顯示在甲狀腺惡性腫瘤中，Galectin-3和CK19的表達較強和范圍較大相一致[15-16]。在本研究中Galectin-3在FTC有強陽性（+++）表達，而FA中無一例出現強陽性（+++）表達，表明Galectin-3的強陽性（+++）表達可能對于FTC的診斷具有較好的參考價值[17]。為明確FNAC標本檢測Galectin-3和CK19表達是否能良好反映結節中Galectin-3和CK19表達的情況，以病理組織檢測Galectin-3和CK19表達為標準，分析FNAC標本檢測的敏感性、特異性和準確性，結果顯示檢測CK19和Galectin-3的敏感性、特異性、準確性分別為85.7%、76.3%、81.3%和84.7%、91.2%、87.5%。可見FNAC標本能良好的反映Galectin-3和CK19的表達情況。因此我們認為應用甲狀腺濾泡狀腫瘤的FNAC標本進行Galectin-3和CK19的表達檢測，表達陽性強度較大，尤其強陽性的應更多考慮是否為FTC。

為進一步分析檢測Galectin-3的表達是否較CK19更能反映患者的病情相關信息，我們比較了兩者與患者臨床參數的關系，發現有淋巴結轉移和TNMⅢ+Ⅳ分期的患者的Galectin-3陽性率較高，提示Galectin-3的表達與患者的病情進展有一定的聯系。因此，我們推測在FTC和FA的鑒別診斷中，Galectin-3較CK19有更好的輔助診斷價值。考慮是因為Galectin-3與細胞的多種調控活動密切相關，對惡性腫瘤細胞的凋亡、轉化或是生長有一定的促進作用，且有助于腫瘤新血管的形成，對腫瘤的轉移和浸潤有促進作用，因此其與FTC的淋巴結轉移和TNM分期之間具有一定的相關性[17]。而CK19的表達可能由于其在FTC和FA的診斷價值較弱，以及其可能對于細胞的主要作用在于細胞骨架構建，而與FTC的臨床參數之間無明顯的相關性[18-19]。

本研究納入的相關病例數量不多，可能對于Galectin-3和CK19在FTC的診斷價值未能較全面進行比較；有待進一步分析更多的臨床參數與Galectin-3和CK19表達的相關性。而且Galectin-3與FTC的淋巴結轉移以及腫瘤分期之間的作用及其具體的作用機制有待進一步研究探討。

綜上所述，Galectin-3和CK19在FTC患者的FNAC標本中的表達顯著高于FA患者，可為臨床工作用鑒別診斷FTC和FA提供一定的協助作用。

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Different expression of Galectin-3 and CK 19 in benign and malignant follicular thyroid tumors by ultrasound-guided fine needle aspiration

JIA Li-qiong,PAN Jiong,LI Xiao-qiang
(Shanghai First People’s Hospital of Baoshan Branch,Shanghai 200940,China)

Objective:To explore the different expression of Galectin-3 and CK19 in benign and malignant thyroid follicular tumors by ultrasound-guided biopsy.M ethods:Thirty-four patients with follicular thyroid carcinoma(FTC)and 40 patients with follicular adenoma(FA)were divided into FTC group and FA group respectively.The expression of Galectin-3 and CK19 in the specimens of ultrasound-guided fine needle aspiration cytopathology and in the pathological tissue were detected,analyzed and compared.The expression in the pathological tissue was considered as the gold standard,and then the sensitivity,specificity and accuracy of FNAC specimens to determine Galectin-3 and CK19 were analyzed.The relationship between Galectin-3,CK19 and clinical parameters of patients with FTC were also compared.Results:The expression of Galectin-3 and CK19 between FTC group and FA group were significantly different(Galectin-3：Z=－4.478,P=0.000,CK19：Z=－2.307,P=0.021).The sensitivity,specificity,and accuracy of Galectin-3 and CK19 in FNAC specimens were 85.7%,76.3%and 81.3%plus 84.7%,91.2%and 87.5%.The Galectin-3 expression showed no significant difference between the gender,age and tumor size in FTC patients(P＞0.05).The positive rate of Galectin-3 in patients with lymph node metastasis(93.3%)and TNMⅢ+Ⅳ(100%)stage were significantly higher than that in patients without lymph node metastasis(63.2%)and TNMⅠ+Ⅱstage(66.7%).The difference was statistically significant(Stages:T=4.359,P=0.037;lymph node metastasis:T=4.242,P=0.039).The expression of CK19 had no significant difference between these clinical parameters(P＞0.05).Conclusion:The expression of Galectin-3 and CK19 in FNAC specimens from FTC patients was significantly higher than that in patients with FA,which could help to differentiate FTC and FA in clinics.

Thyroid neoplasms;Galectin 3;Biopsy,fine-needle;Ultrasonography,interventional

R736.1；R445.1

A

1008－1062（2017）01－0019－04

2016-05-03；

2016-06-08

賈麗瓊（1969-），女，上海人，副主任醫師。E-mail：jlq39222@126.com

賈麗瓊，上海市第一人民醫院寶山分院超聲科，200940。E-mail：jlq39222@126.com

上海市寶山區區科委基金（14-E-13）。