芒柄花黃素對(duì)阿爾茨海默病小鼠海馬組織超微結(jié)構(gòu)和腫瘤壞死因子-α的影響

費(fèi)洪新，沈 博，陳玉琦，潘思文，明 玥，張英博

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

·藥物分析·

芒柄花黃素對(duì)阿爾茨海默病小鼠海馬組織超微結(jié)構(gòu)和腫瘤壞死因子-α的影響

費(fèi)洪新，沈 博，陳玉琦，潘思文，明 玥，張英博

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

目的探討芒柄花黃素（FMN）對(duì)阿爾茨海默病（AD）小鼠海馬組織超微結(jié)構(gòu)和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的影響。方法小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組，模型組，治療組，F(xiàn)MN高、中、低劑量組。采用β-淀粉樣蛋白雙側(cè)腦室注射和D-半乳糖腹腔注射的方法誘導(dǎo)AD模型。給予FMN連續(xù)灌胃治療后取材，觀察小鼠海馬鏡下超微結(jié)構(gòu)，采用雙抗體夾心法測(cè)定海馬組織炎癥介質(zhì)TNF-α水平。結(jié)果與模型組比較，F(xiàn)MN高、中劑量組腦海馬形態(tài)明顯改善，海馬組織炎癥介質(zhì)TNF-α水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論FMN能改善AD小鼠海馬超微結(jié)構(gòu)，降低海馬組織炎癥介質(zhì)TNF-α水平。

芒柄花黃素；阿爾茨海默病；超微結(jié)構(gòu)

阿爾茨海默病是一種臨床上非常常見的老年性、神經(jīng)性、退行性疾病之一。據(jù)報(bào)道，AD患病率、死亡率逐年增加。目前，研究副作用小、具有整體調(diào)節(jié)作用的中藥防治AD就顯得尤為重要。前期研究顯示，補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)AD模型形態(tài)學(xué)、核轉(zhuǎn)錄因子-κBp65、血腦屏障[1]等有改善作用，補(bǔ)陽(yáng)還五湯君藥黃芪多糖對(duì)AD模型海馬結(jié)構(gòu)具有改善作用[2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，補(bǔ)陽(yáng)還五湯的主要成分包括芒柄花黃、黃芪多糖、黃芪甲苷、阿魏酸、芍藥苷、紅花黃色素、川芎嗪等，其中，F(xiàn)MN藥理作用包括很多，例如FMN可以降低糖尿病小鼠高血糖[3]、抑制脂肪生成、促進(jìn)骨組織再生與愈合、促進(jìn)白血病K562細(xì)胞凋亡、改善動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞功能。本實(shí)驗(yàn)采用FMN為處理因素，觀察FMN對(duì)AD小鼠模型超微結(jié)構(gòu)和TNF-α的影響，以期為臨床上防治AD疾病奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑

STW-1型腦立體定位儀；TCNAI-G2型透射電鏡；HMIAS型圖文分析系統(tǒng)；6100型RT-雷杜酶標(biāo)儀；試劑鹽酸多奈哌齊；β-淀粉樣蛋白1-42和D-半乳糖；FMNTNF-α酶聯(lián)免疫試劑盒。

1.2 復(fù)制模型

小鼠麻醉后，無(wú)菌消毒小鼠頭部，STW-1型腦立體定位儀定位小鼠海馬，使用經(jīng)過消毒的微量加樣器雙側(cè)腦室海馬區(qū)一次性緩慢微量注入凝聚態(tài)β-淀粉樣蛋白，同時(shí)腹腔注射D-半乳糖；對(duì)照組小鼠需要在小鼠雙側(cè)腦室內(nèi)和腹腔內(nèi)注射等量生理鹽水。

1.3 分組給藥

小鼠隨機(jī)分為6組，包括對(duì)照組，模型組，治療組，F(xiàn)MN高、中、低劑量組。對(duì)照組和模型組給予生理鹽水灌胃，治療組給予多奈哌齊灌胃，F(xiàn)MN高、中、低劑量組分別給予FMN 灌胃，各組小鼠灌胃40d。

觀察小鼠體重指數(shù)、攝取食物、飲用水、毛發(fā)色澤、活動(dòng)度、糞便顏色、動(dòng)物墊料的潮濕度等指標(biāo)。

海馬超微結(jié)構(gòu)。各組小鼠末次給藥2h后，使用水合氯醛進(jìn)行麻醉，左心室緩慢灌注生理鹽水。肝臟變白后，用2.5%戊二醛灌注，取材小鼠腦組織海馬，經(jīng)過2.5%戊二醛固定、四氧化鋨固定、脫水、包埋、切片等基本過程，觀察小鼠腦組織海馬CA1區(qū)結(jié)構(gòu)。

觀察海馬TNF-α含量 各組小鼠斷頭后，迅速取小鼠腦海馬，勻漿，冰箱進(jìn)行保存，按酶聯(lián)免疫試劑盒說明書使用6100型RT-雷杜酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度（A），計(jì)算小鼠海馬TNF-α含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

對(duì)照組小鼠飲食與飲水正常；模型組與FMN低劑量?jī)山M小鼠皮膚彈性差，行動(dòng)遲緩；治療組、FMN高劑量組、FMN中劑量組總體狀態(tài)好于模型組。 FMN對(duì)AD小鼠腦海馬CA1區(qū)超微結(jié)構(gòu)的影響。對(duì)照組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)豐富；模型組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)較少，核染色質(zhì)邊集；治療組、FMN高劑量組、FMN中劑量組和FMN低劑量組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞器不同程度影響；模型組小鼠海馬TNF-α含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后，治療組、FMN高劑量組、FMN中劑量組小鼠海馬TNF-α含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，低劑量組小鼠海馬TNF-α的含量改變不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

AD表現(xiàn)為腦組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)改變并伴有TNF-α含量增

[1] 費(fèi)洪新,韓玉生,杜 徽,等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)阿爾茨海默病小鼠海馬形態(tài)學(xué)和β淀粉樣蛋白水平的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014:142-145.

[2] 費(fèi)洪新,周忠光,劉 斌.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)阿爾茨海默病小鼠NF-κBp65蛋白的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2015:5369-5371.

[3] 費(fèi)洪新,周忠光,韓玉生,等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)阿爾茨海默病小鼠血腦屏障通透性的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2015:1028-1031.

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B

ISSN.2095-8803.2017.27.016.02

黑龍江省齊齊哈爾市科學(xué)技術(shù)局科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目（SFGG-201630）加，本實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)FMN對(duì)AD小鼠超微結(jié)構(gòu)和TNF-α含量的影響。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了腦組織海馬TNF-α的含量，表明模型組小鼠海馬區(qū)域無(wú)菌性炎癥反應(yīng)明顯。經(jīng)過治療后，F(xiàn)MN高、中劑量組TNF-α水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），本實(shí)驗(yàn)顯示TNF-α的變化趨勢(shì)與AD小鼠海馬CA1區(qū)結(jié)構(gòu)的變化趨勢(shì)相關(guān)聯(lián)，說明FMN可以通過降低小鼠海馬TNF-α含量來(lái)改善小鼠海馬的超微結(jié)構(gòu)。綜上所述，F(xiàn)MN能改善AD小鼠海馬超微結(jié)構(gòu)，降低海馬組織炎癥介質(zhì)TNF-α水平，推測(cè)FMN防治AD的機(jī)制與降低海馬TNF-α含量有關(guān)。