急性腦梗死患者血清IL-35、MMP-9與頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系

李燕華， 范秉林， 韋俊杰， 李曉峰， 封 渾， 韋 旋

急性腦梗死患者血清IL-35、MMP-9與頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系

李燕華， 范秉林， 韋俊杰， 李曉峰， 封 渾， 韋 旋

目的 探討急性腦梗死患者血清白細胞介素-35(IL-35)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)與頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。方法 選擇急性腦梗死患者89例，應(yīng)用彩色多普勒超聲檢查頸動脈斑塊，根據(jù)頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性分為易損斑塊組和穩(wěn)定斑塊組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者血清IL-35、MMP-9水平，并分析IL-35、MMP-9與斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。結(jié)果 頸動脈粥樣硬化易損斑塊組的患者41例，穩(wěn)定斑塊組的患者48例。易損斑塊組血清IL-35水平(17.89±7.21 ng/ml)明顯高于穩(wěn)定斑塊組(9.08±3.45 ng/ml)(P<0.05)。MMP-9水平易損斑塊組(430.36±72.78 ng/ml)亦顯著高于穩(wěn)定斑塊組(305.16±45.63 ng/ml)(P<0.01)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 腦梗死患者血清IL-35、MMP-9水平可能與頸動脈斑塊穩(wěn)定性有關(guān)。

腦梗死； 白細胞介素-35； 基質(zhì)金屬蛋白酶9； 頸動脈硬化斑塊

頸動脈粥樣硬化是腦梗死的重要病因之一。國內(nèi)外大量研究顯示[1]，炎性反應(yīng)在動脈粥樣硬化及腦血管病的發(fā)病過程中起著重要作用，促炎和抗炎之間的不平衡與動脈硬化的發(fā)生發(fā)展及斑塊的破裂、血栓形成密切相關(guān)。血清白細胞介素-35(IL-35)是2007年發(fā)現(xiàn)的一種新型抗炎因子，與調(diào)節(jié)性T細胞發(fā)揮免疫抑制功能密切相關(guān)[2～4]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-35在頸動脈粥樣硬化易損斑塊中大量表達[5]。為此，本研究以急性腦梗死患者為研究對象，探討血清IL-35、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)與頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2016年2月～2016年7月在廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院并發(fā)病3 d的急性腦梗死患者89例[男性50例，女性39例，平均年齡(67±5)歲]，所有病例均符合我國2010年《中國急性缺血性卒中診治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，并且經(jīng)頭部CT、MRI證實。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)腔隙性腦梗死、無癥狀性腦梗死及原因不明性腦梗死患者、出血性腦梗死、動脈炎及其他原因引起的腦梗死、腦栓塞及合并有各種凝血功能異常性疾病，曾行溶栓治療的腦梗死患者；(2)急性心肌梗死者或心絞痛患者、房顫患者、瓣膜性心臟病、擴張型心臟病或伴有嚴重心臟疾病患者；(3)合并急慢性感染、血栓性疾病、嚴重的肝腎功能不全者、惡性腫瘤患者、風(fēng)濕性疾病患者、自身免疫性疾病者；高熱以及使用激素、鴉片類藥物或免疫抑制劑者。

1.2 標(biāo)本采集 清晨空腹抽取靜脈血，標(biāo)本置入肝素鈉抗凝管內(nèi)，以3000 r/min行高速離心10 min后，取上清液置-80 ℃冰箱保存待測。

1.3 頸動脈硬化斑塊的檢測和分組 頸動脈超聲檢查采用LOGIQ E9彩色多普勒超聲診斷儀進行常規(guī)檢測。頸動脈內(nèi)膜中膜厚度是指縱斷面上測得的頸動脈后壁內(nèi)膜和中膜的厚度，將內(nèi)膜局部隆起增厚，向管腔內(nèi)突出部分定義為動脈粥樣硬化斑塊。參照文獻[7]，根據(jù)頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性分為兩組：易損斑塊組和穩(wěn)定斑塊組；易損斑塊組是指頸動脈斑塊呈低回聲的患者，而穩(wěn)定斑塊組是指頸動脈斑塊呈高回聲的患者。為了減少測量的誤差，所有頸動脈斑塊的檢測均由同一個醫(yī)生操作。

1.4 血清IL-35水平的檢測 ELISA 試劑盒購自武漢華美。采用雙抗體夾心ELISA法檢測血漿IL-35水平，操作過程嚴格按照說明書進行。

1.5 血清MMP-9水平測定 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，按照武漢華美公司人MMP-9 ELISA試劑盒說明書進行檢測。

2 結(jié) 果

2.1 頸動脈超聲測量結(jié)果 89例腦梗死患者中，易損斑塊組患者41例，穩(wěn)定斑塊組患者48例。兩組患者性別、年齡、高血壓等基本資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性，兩組間資料比較(見表1)。

2.2 兩組患者血清IL-35、MMP-9水平的比較 易損斑塊組患者血清IL-35 水平(17.89±7.21)ng/ml明顯高于穩(wěn)定斑塊組(9.08±3.45)ng/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。易損斑塊組血清MMP-9水平(430.36±72.78)ng/ml，亦顯著高于穩(wěn)定斑塊組(305.16±45.63)ng/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)(見表2)。

表1 急性腦梗死患者基本資料對比

表2 兩組患者血清IL-35和MMP-9水平的比較

3 討 論

腦血管病主要的發(fā)病基礎(chǔ)是動脈粥樣硬化。目前公認[1]，動脈粥樣硬化的早發(fā)和好發(fā)部位多為頸動脈，是動脈硬化中最常見而重要的類型。越來越多的研究表明[8]，炎癥貫穿于動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的全過程，大量的炎性因子在動脈粥樣硬化的形成、發(fā)展及斑塊的不穩(wěn)定性中起到至關(guān)重要的作用。一般認為在腦梗死發(fā)病后3 d，缺血區(qū)域炎性細胞浸潤達到高峰，所以本研究以急性腦梗死3 d的患者作為研究對象，同時需排除目前已知會影響IL-35和MMP-9的因素。此外，考慮到IL-35可能與動脈粥樣硬化有關(guān)，并同時檢測與動脈硬化密切相關(guān)的促炎因子MMP-9的表達，初步探討它們可能在動脈粥樣斑塊中的作用機制。

腦梗死的發(fā)生與頸動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)。易損斑塊又稱為不穩(wěn)定斑塊，在B超下呈低回聲或等回聲，它是指具有破裂傾向，易于發(fā)生血栓形成且進展迅速的危險性斑塊，其內(nèi)部含有大量脂質(zhì)，易潰爛、出血和脫落。近年來，斑塊的組成和細胞外基質(zhì)的降解成為研究的熱點。而細胞外基質(zhì)的過度降解是動脈粥樣硬化易損斑塊形成的一個重要因素。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)在早期動脈粥樣硬化形成過程中起到了重要的作用，是降解細胞外基質(zhì)的主要蛋白水解酶之一，其中與動脈硬化關(guān)系密切的是MMP-9，其幾乎能降解細胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分[9]。已有研究表明[10]，腦梗死患者血清MMP-9水平與頸動脈斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)，參與了腦梗死后再灌注損傷、腦水腫損傷過程。本研究顯示，急性腦梗死患者易損斑塊組血清MMP-9水平比穩(wěn)定斑塊組顯著升高，這與既往研究結(jié)果相一致[7]。表明MMP-9與不穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊更有相關(guān)性，在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程中具有重要作用，提示腦梗死患者易損斑塊的發(fā)生伴有MMP-9的過度表達，并可能與血栓形成存在因果聯(lián)系。

IL-35是2007年發(fā)現(xiàn)的IL-12家族的一個新成員，由Niedbaia和Collison兩個實驗室證實EBI3 與IL-12 p35 異二聚體，是一種新型的抗炎因子，與調(diào)節(jié)性T 細胞發(fā)揮免疫抑制功能密切相關(guān)，目前認為其可有效緩解膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎和炎癥性腸病[2～4]。已有研究表明，IL-35在人類主要由調(diào)節(jié)性T 細胞分泌，活化的效應(yīng)性T 細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞等也可分泌少量的IL-35[11]。 IL-35 的抗炎作用在關(guān)節(jié)炎[2]、結(jié)腸炎[12]和哮喘[13]等多種實驗性炎癥疾病中也得到證實。IL-35在動物小鼠表達于調(diào)節(jié)性T細胞而非效應(yīng)性T細胞，是調(diào)節(jié)性T細胞的特征性功能因子[3]。并且提示了EBI3和由EBI3參與組成的細胞因子可能在一些炎癥相關(guān)的疾病中具有潛在的靶點。目前已發(fā)現(xiàn)，IL-35的EB13亞基在頸動脈粥樣硬化易損斑塊中大量表達[5]，研究發(fā)現(xiàn)IL-35不僅與冠心病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，且與冠心病患者的預(yù)后密切相關(guān)[14]。最新的研究顯示IL-35在吉蘭-巴雷患者血清的表達下降，表明IL-35與吉蘭-巴雷的炎性發(fā)病機制有關(guān)[15]。但IL-35作為新發(fā)現(xiàn)的抗炎因子，其與動脈粥樣硬化性腦梗死的發(fā)病是否相關(guān)，目前尚未見報道。本研究通過對急性腦梗死患者血清IL-35水平和頸動脈斑塊的檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者易損斑塊組血清IL-35水平比穩(wěn)定斑塊組明顯升高，而且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示IL-35 可能與動脈粥樣硬化進程和斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)，對頸動脈斑塊的穩(wěn)定性可能具有保護作用。盡管如此，從結(jié)果中我們明顯看出腦梗死后MMP-9仍相對被過度激活，其增高表達的程度顯著高于IL-35，表明了不穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊的形成存在促炎因子和抗炎因子之間的平衡失調(diào)。結(jié)合我們的研究結(jié)果，推測在急性腦梗死發(fā)生過程中，動脈粥樣硬化易損斑塊的脫落可能同時存在促炎因子和抗炎因子兩個活化過程，促炎因子活性占優(yōu)勢，由此觸發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，最終誘發(fā)缺血性炎性損傷。

綜上，本研究結(jié)果提示急性腦梗死患者血清IL-35和MMP-9水平可能與頸動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)，血清IL-35和MMP-9可能共同參與了動脈粥樣硬化的形成過程，血清IL-35和MMP-9表達升高對頸動脈斑塊的穩(wěn)定性可能有一定的提示作用，IL-35可能是預(yù)示頸動脈斑塊穩(wěn)定性的一種新的標(biāo)志物。但IL-35作為新型的抗炎因子與MMP-9之間有何聯(lián)系，它們是否作用于同一基因位點，機制如何，這有待進一步的動物實驗和臨床數(shù)據(jù)證實。

[1]Leng XY，Chen XY，Chook P，et al. Correlation of large artery intracranial occlusive disease with carotid intra-media thickness and presence of carotid plaque[J]. Stroke，2013，44(1)：68-72.

[2]Niedbala W，Wei XQ，Cai B，et al. IL-35 is a novel cytokine with therapeutic effects against collagen-induced arthritis through the expansion of regulatory T cells and suppression of Th17 cells[J]. Eur J Immunol，2007，37(11)：3021-3029.

[3]Collison LW，Workman CJ，Kuo TT，et al. The inhibitory cytokine IL-35 contributes to regulatory T-cell function[J]. Nature，2007，450(7169)：566-569.

[4]Song M，Ma XJ. The immunobiology of Interleukin-35 and its regulation and gene expression[J]. Advances Exp Med Biol，2016，941(13)：213-225.

[5]Kempe S，Heinz P，Kokai E，et al. Epstein-barr virusinduced gene-3 is expressed in human atheroma plagues[J]. Am J Pathol，2009，175(1)：440-447.

[6]中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會腦血管學(xué)組急性缺血性腦卒中診治指南撰寫組. 中國急性缺血性腦卒中診治指南 2010 [J]. 中華神經(jīng)科雜志，2010，43：146-148.

[7]Mathiedsen EB，Bonaa KH，Joakimsen O，et al. Echolcent plaques are associated with high risk of ischemic cerebrovascular events in carotid stenosis，the tromso study [J]. J Circulation，2001，103(1)：2171.

[8]岳蘊華，白旭東，張小寧，等. 血清基質(zhì)金屬蛋白酶9水平及其基因C1562T多態(tài)性與維族腦梗死患者頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系[J]. 臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2014，27(2)：97-100.

[9]Page-Mccaw A，Ewald AJ，Werb Z. Matrix metalloproteinases and the regulation of tissue remodelling[J]. Nat Rev Mol Cell Biol，2007，8：221.

[10]Ulrich NH，Dehmel T，Wittsack HJ，et al. Peripheral blood levels of matrix metalloproteinase-9 predict lesion volume in acute stroke[J]. Neurol Sci，2013，34：379.

[11]Chaturvedi V，Collison LW，Guy CS，et al. Cutting edge：Human reguiatory T cells reguire IL-35 to mediate suppression and infectious tolerance[J]. J Immunol，2011，186(12)：6661-6666.

[12]Wirtz S，Billmeier U，Mchedlidze T，et al. Interleukin-35 mediates mucosal immune responses that protect against T-cell-dependent colitis[J]. Gastroenterology，2011，141(5)：1875-1886.

[13]Huang CH，Loo EX，Kuo IC，et al. Airway inflammation and IgE production induced by dust mite allergen-specific memory/effector Th2 cell line can be effectively attenuated by IL-35[J]. J Immunol，2011，187(1)：462-471.

[14]Lin YZ，Huang Y，Lu ZD，et al. Decreased plasma IL-35 levels are related to the left ventricular ejection fraction in coronary artery diseases[J]. PloS One，2012，7(12)：e52490.

[15]Zhang LJ，Guo HY，Zhang DQ，et al. Analysis of serum Interleukin-27 and Interleukin-35 concentration in patients with Guillain-Barre syndrome[J]. Clinica Chimica Acta，2017，468(3)：5-9.

Relationship between the levels of serum IL-35，MMP-9 and the stability of carotid arteriosclerotic plaque in acute cerebral infarction

LIYanhua，F(xiàn)ANBinglin，WEIJunjie，etal.

(DepartmentofNeurology，thePeople’sHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion，Nanning530021，China)

Objective To investigate the relationship between the levels of serum IL-35，MMP-9 and the stability of carotid arteriosclerotic plaque in acute cerebral infarction. Methods Carotid arteriosclerotic plaque was measured by color Doppler ultrasonography in 89 patients with acute cerebral infarction. They were divided into vulnerable plaque group and stable plaque group according to the carotid arteriosclerotic plaque stability. The serum levels of IL-35 and MMP-9 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results There were 41 cases in vulnerable plaque group and 49 cases in stable plaque group. The serum level of IL-35 in vulnerable plaque group(17.89±7.21 ng/ml)was significantly higher than that in stable plaque group(9.08±3.45 ng/ml)(P<0.05)，and the serum level of MMP-9 in vulnerable plaque group(430.36±72.78 ng/ml)was significantly higher than that in stable plaque group(305.16±45.63 ng/ml)(P<0.01). Conclusion The serum level of IL-35、MMP-9 may be correlated with the stability of carotid arteriosclerotic plaque in acute cerebral infarction.

Cerebral infarction； IL-35； MMP-9； Carotid arteriosclerotic plaque

1003-2754(2017)07-0597-03

2017-03-26；

2017-06-20

國家自然科學(xué)基金資助項目(No. 81560210)；廣西衛(wèi)計委資助項目(No. Z2015304)

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣西 南寧 530021) 通訊作者：李燕華，E-mail：lyhuaqq@163.com

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