切割方式和滅菌時間對野生百合生長的影響

任 歡，韋海忠，周嘉玲，陳律呈，劉澤偉

(臺州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 臺州 318020)

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切割方式和滅菌時間對野生百合生長的影響

任 歡，韋海忠*，周嘉玲，陳律呈，劉澤偉

(臺州科技職業(yè)學(xué)院，浙江 臺州 318020)

野生百合品種相思在不同切割方式及升汞不同滅菌時間處理下，在MS培養(yǎng)基中的生長觀察研究發(fā)現(xiàn)，在0.5 cm × 0.5 cm的切割方式和在0.2%升汞中滅菌4 min+0.1%升汞中滅菌4 min的處理方案為最佳。

野生百合； MS培養(yǎng)基； 升汞滅菌時間； 切割方式； 生長

百合是多年生球根花卉，其種球含豐富淀粉質(zhì)，部分品種可作蔬菜食用；還可制成百合干、百合粉，在國際市場上價格很高，是中成藥中常用藥材。百合莖直立，不分枝，草綠色，莖稈基部帶紅色或紫褐色斑點(diǎn)；地下具鱗莖，由闊卵形或披針形、白色或淡黃色、直徑6～8 cm的肉質(zhì)鱗片抱合成球形，外有膜質(zhì)層。多數(shù)須根生于球基部。單葉，互生，狹線形，無葉柄，直接包生于莖稈上，葉脈平行。有的品種在葉腋間生出紫色或綠色顆粒狀珠芽，其珠芽可繁殖成小植株；花著生于莖稈頂端，呈總狀花序，簇生或單生，花冠較大，花筒較長，呈漏斗形喇叭狀，六裂無萼片，因莖稈纖細(xì)，花朵大，開放時常下垂或平伸；花色因品種不同而色彩多樣。

百合繁殖主要用子鱗莖繁殖，采收時選個大、鱗片抱合緊密、色白形正、無損傷、無病蟲的子鱗莖作種。在田間種植時需要大量的子鱗莖，再加上田間種植所需的人力、財(cái)力、時間，以及相對較復(fù)雜的田間管理，造成種植成本大大增加，種質(zhì)資源浪費(fèi)，使生產(chǎn)者失去對種植百合的信心。百合的組織培養(yǎng)育苗具有繁殖周期短、繁殖系數(shù)高、成苗快、階段發(fā)育快和保持母本優(yōu)良性狀的特點(diǎn)。通過組培的方法可對野生百合進(jìn)行種質(zhì)資源的提純、復(fù)壯及保存，研究篩選出最佳升汞處理時間和切割方式等，為百合苗繁育及推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試材料為浙江省臺州市椒江區(qū)百合基地提供的野生百合品種相思。挑選組織培養(yǎng)用的母本百合時應(yīng)注意要選擇健壯無病鱗莖，所有材料的生長勢和大小一致。試驗(yàn)地點(diǎn)選擇在臺州科技職業(yè)學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院的植物組培中心進(jìn)行。

1.2 處理設(shè)計(jì)

將野生百合鱗片用肥皂水沖刷干凈，采用0.6%GA3對野生百合進(jìn)行25 min的浸泡以打破休眠，再用70%的酒精進(jìn)行初步滅菌，之后用無菌水洗凈，然后在0.2%的升汞加吐溫溶液中搖晃殺菌，用無菌水沖洗干凈，再用0.1%的升汞加吐溫溶液進(jìn)行滅菌，用無菌水沖洗干凈，以無菌濾紙吸去鱗片表面水分。

外植體接種時，進(jìn)行3種切割方式處理，分別是在與培養(yǎng)基接觸的百合部位進(jìn)行背部劃傷(A)、切割成0.5 cm×0.5 cm小塊(B)和不進(jìn)行切割(CK)，切割處理后在陰涼無菌處晾干。設(shè)3個滅菌時間處理，分別為3 min(Ⅰ)、4 min(Ⅱ)和5 min(Ⅲ)。3種不同切割方式以及3個不同滅菌時間共9個處理。外植體接種到相同濃度激素培養(yǎng)基上培養(yǎng)，室溫控制在(23±2)℃，光照為2 000 lx，光照時數(shù)為12 h/d，記錄并觀察其生長情況。

試驗(yàn)設(shè)計(jì)各個試驗(yàn)組合的樣本數(shù)為30瓶，大樣本為180瓶，進(jìn)行隨機(jī)的組合擺放，以降低試驗(yàn)的偶然性。

1.3 調(diào)查及數(shù)據(jù)處理

各處理百合在接種處理完畢后進(jìn)行登記，并進(jìn)行隨機(jī)擺放，每周觀察記錄各樣本的污染數(shù)、株高、葉片數(shù)、葉片厚度、根長，并分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對百合生長的影響

2.1.1 株高

由表1可見，各處理對百合株高影響效果均較好。其中以處理BⅡ、BⅢ、AⅡ?yàn)檩^高，CKⅠ、CKⅢ、CKⅡ的株高為較低。處理BⅠ、AⅠ分別比CKⅠ高7.8和5.5 cm；處理BⅡ、AⅡ分別比CKⅡ高13.9和7.5 cm；處理BⅢ、AⅢ分別比CKⅢ高11.0和4.6 cm。結(jié)果表明，試驗(yàn)組合BⅠ、BⅡ、BⅢ的株高最明顯，其中以BⅡ的效果對野生百合株高的影響最明顯。

表1 各處理對百合生長的影響

2.1.2 葉片數(shù)

由表1可知，BⅡ葉片數(shù)最多，達(dá)21.2張，而CKⅢ的葉片數(shù)為最少，僅4.2張，差異明顯。BⅡ、AⅡ的葉片數(shù)分別為21.2和16.4張，比對照CKⅡ分別多出14.4和9.6張；BⅢ、AⅢ的葉片數(shù)分別比CKⅢ的葉片數(shù)要多出13.2和8.0張；BⅠ、AⅠ分別比CKⅠ的葉片數(shù)要多出15.2和10.2張。綜合得到，處理組合BⅠ、BⅡ、BⅢ對野生百合葉片的生長影響效果較好，其中以BⅡ最佳。

2.1.3 葉片厚度

由表1表明，所有處理組合中，BⅠ的葉片厚度0.7 mm，CKⅠ、AⅠ、CKⅢ、AⅢ的葉片厚度均為0.5 mm。BⅡ、AⅡ的葉片厚度分別為0.9、0.6 mm。從數(shù)據(jù)中分析得到，處理組合BⅢ、BⅡ、BⅠ對百合葉片的生長影響效果較好，尤其是BⅡ處理效果對相思百合最佳。

2.1.4 根系生長

由表1得出，所有處理中，BⅡ根長為6.1 cm，大大超出其他所有處理組合；AⅢ根長僅為2.0 cm。AⅠ、BⅠ與CKⅠ的根長分別相差0、2.6 cm；AⅡ、BⅡ與CKⅡ分別相差0.4、2.9 cm；所有處理組合中最差的為CKⅢ，僅1.9 cm，分別比AⅢ、BⅢ相差0.1和2.6 cm。由此說明，在升汞滅菌時間4 min時，BⅢ、BⅡ、BⅠ以0.5 cm×0.5 cm的切割方式效果最優(yōu)，其中又以BⅡ?qū)σ吧俸细L的效果最佳。

2.2 對百合污染率的影響

由表2可見，所有處理組合中，BⅡ污染率最低，僅為3瓶；最高的是CKⅠ，達(dá)15瓶。AⅠ、BⅠ污染瓶數(shù)分別比CKⅠ污染瓶數(shù)少4和7瓶；AⅡ、BⅡ分別比CKⅡ少2和5瓶；AⅢ、BⅢ分別比CKⅢ少2和4瓶；綜合來看，處理組合BⅡ的污染率最低，效果最佳。

表2 各處理組合對相思百合污染率的影響

3 小結(jié)與討論

通過對不同切割方式和升汞滅菌時間對野生百合生長的影響試驗(yàn)得出，將百合外植體切割成0.5 cm×0.5 cm小塊，用0.2%升汞處理4 min，并在0.1%升汞浸泡4 min的處理下，相思百合成活率最高，污染率最低，百合組培苗的株高、葉片數(shù)、葉片厚度、根長的效果最佳。這主要是因?yàn)閷俸削[莖切割為小塊能使百合傷口經(jīng)脫分化形成愈傷組織，從而使組培百合小苗能更好地進(jìn)行分化和生根。野生百合外植體的滅菌在初步清洗干凈后再進(jìn)行深一步的滅菌，先用0.2%升汞溶液加植物清潔劑進(jìn)行滅菌，期間4 min不停搖晃的目的是讓鱗莖充分滅菌；其次是用0.1%升汞溶液進(jìn)行滅菌，采用同樣的滅菌方式，滅菌時間定為4 min，是因?yàn)樵谠囼?yàn)過程中低于和高于4 min的試驗(yàn)的結(jié)果顯示其污染量高。采用不同切割方式和升汞的滅菌時間相結(jié)合成的試驗(yàn)方案使百合在組織培養(yǎng)過程中在產(chǎn)量和成本、時間上有明顯的提升和縮短。

但組織培養(yǎng)常會因?yàn)榘俸系耐庵搀w處理不干凈致使污染狀況相對較嚴(yán)重。因此在本試驗(yàn)中外植體的處理過程為重中之重，在外植體處理過程中，要確保處理過程中的細(xì)節(jié)，不能出一點(diǎn)差錯。最好的方法是將百合表面的污垢處理干凈，用75%的酒精浸泡5 s，再用無菌水洗凈，用升汞和植物清潔劑滅菌，最后用無菌水洗凈備用。本試驗(yàn)中，切割方式與浸泡時間對其生長有很大影響。因此，組培百合鱗莖時，除要保證適當(dāng)?shù)臏囟取⑺帧⒐庹胀猓€應(yīng)采取相應(yīng)的滅菌方式和GA3的浸泡時間，以便提高百合分化和生根的水平。

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(責(zé)任編輯：張瑞麟)

2017-03-06

浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新項(xiàng)目(2016R463001)

任 歡，園藝專業(yè)在校學(xué)生。

韋海忠(1968—)，浙江東陽人，副教授，碩士，研究方向?yàn)閳@藝作物設(shè)施栽培與生理，E-mail：hzwei910@126.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170745

S681

B

0528-9017(2017)07-1235-02

文獻(xiàn)著錄格式：任歡，韋海忠，周嘉玲，等. 切割方式和滅菌時間對野生百合生長的影響[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(7)：1235-1236，1241.