獸醫實驗診斷的發展歷程及診斷技術綜述

華彩麗，楊紅玉

（1.舞陽縣畜牧局，河南舞陽462400；2.南陽農業職業學院）

獸醫實驗診斷的發展歷程及診斷技術綜述

華彩麗1，楊紅玉2

（1.舞陽縣畜牧局，河南舞陽462400；2.南陽農業職業學院）

診斷是獸醫工作的首要任務之一，診斷一詞來自希臘文，是辨認和判斷的意思。獸醫通過詢問病史，了解病情，臨床檢查以及實驗室檢查，來判斷動物所患疾病。通過前期收集的各種資料和數據，進行科學辨證的分析，以期得到盡可能符合疾病本質的結論，這就是一個診斷疾病的過程。這個過程無論對獸醫還是對患病畜禽都是十分重要的。正確的早期診斷能使患病畜禽得到及時有效治療，早日恢復健康，反之，錯誤的診斷會導致病情惡化，甚至危及生命。

1 獸醫實驗診斷的作用

在現代獸醫學中，實驗室的檢查在診斷工作中起著重要作用，提供重要的客觀診斷依據。例如在進行大腸桿菌病的診斷時，實驗室的檢查既明確了疾病的病原，為進一步的藥敏試驗提供了依據，又為患病畜禽的治療提出明確的辦法。

實驗室診斷在疾病預防中的作用尤為明顯。這是因為疾病早期往往缺乏明顯癥狀和體征，很難引起注意，只有通過實驗室檢查確診，才能得到及時的治療。正是由于實驗室檢查在診斷工作中的重要性，才從診斷學中逐步獨立出一門新的學科——實驗診斷學或臨床實驗診斷學。

2 獸醫實驗診斷的發展歷程

隨著現代獸醫學的發展，獸醫開始借助一些實驗室檢查對患病畜禽進行診斷。18世紀，主要儀器是顯微鏡，除血液檢查外還開展了對尿、糞、痰的檢查，逐步形成了以血、尿、便三大常規為主要檢驗項目的實驗室。從19世紀末開始，在用顯微鏡檢查各種染色涂片中細菌的同時，還發展了各種細菌培養技術，這就構成現代獸醫院實驗室的雛形。

實驗診斷學是與多種專業學科相關的一門邊緣學科，也是應用基礎獸醫學的理論和技術為臨床獸醫學服務的學科。它的基本任務是通過生物、微生物、血清、化學、生物物理、細胞或其他檢驗以獲取病原體、病理變化和臟器功能狀態等資料，與其他檢查相配合以確定患病畜禽的診斷。實際上不僅在疾病診斷上，患病畜禽治療也有很多地方需要實驗室的配合，有時甚至起著至關重要的作用。同樣在判斷疾病預后，治療療效時，實驗室檢查常是較好的客觀指標。

3 獸醫實驗診斷的方法

實驗室診斷是疫病確診的主要手段，同時也是流行病學監測的重要方法。通過實驗室診斷可以發現傳染源、確定各種傳播因素和易感動物，在疫病預防和撲滅過程中具有重要意義。常見的獸醫實驗診斷方法如下。

3.1 微生物學診斷

運用獸醫微生物學的方法進行病原學檢查是診斷動物疫病的重要方法之一。

3.1.1 病料的采集

正確采集病料是微生物學診斷的首要環節。病料力求新鮮，最好能在畜禽瀕死時或死后數小時內采取，要求盡量減少雜菌污染，用具器皿應盡可能嚴格消毒。通常可根據所懷疑病的類型和特性來決定采取哪些器官或組織。原則上要求采取病原微生物含量多、病變明顯的部位，同時易于采取，易于保存和運送。如果缺乏臨床資料，剖檢時又難于分析診斷可能為何種病時，應比較全面地取材，例如血液、肝、脾、肺、腎、腦和淋巴結等，同時要注意采取帶有病變的部分。如懷疑炭疽，則非必要時不準做尸體剖檢，只割取一塊耳朵即可。

3.1.2 涂片

鏡檢通常選擇有明顯病變的不同組織器官的不同部位進行涂片、染色鏡檢。此法對于一些具有特殊形態的病原微生物（如炭疽桿菌、巴氏桿菌等）引起的疫病可以迅速做出診斷，但對大多數疫病來說，僅能提供微生物學診斷的初步依據。

3.1.3 分離培養和鑒定

用人工培養的方法將病原微生物從病料中分離出來，然后再進行形態學、培養特性、動物接種及免疫學試驗等作出鑒定。

3.1.4 動物接種試驗

主要用于病原體致病力檢測，通常選擇對該種病原微生物最敏感的實驗動物，如家兔、小鼠、豚鼠、倉鼠、家禽、鴿子等進行人工感染試驗。將病料用適當的方法處理后人工接種實驗動物，當實驗動物死亡或經一定時間剖檢后，觀察病理變化，并采取病料進行涂片檢查和分離鑒定。從病料中分離出病原微生物，雖是確診的重要依據，但也應注意動物的“健康帶菌”現象，其結果還需與臨床診斷結合起來進行分析，有時即使沒有發現病原微生物，也不能完全否定該種疫病的可能性。

3.2 血清學診斷

血清學診斷是疫病診斷和檢疫中常用的方法，是利用抗原和抗體特異性結合的免疫學反應進行診斷。可以用已知抗原來測定被檢動物血清中的特異性抗體，也可以用已知的抗體（免疫血清）來測定被檢病料中的抗原。常用的血清學試驗有中和試驗（毒素抗毒素中和試驗、病毒cfl試驗等）、凝集試驗（直接凝集試驗、間接凝集試驗、間接血凝試驗、SPA協同凝集試驗、乳膠凝集試驗、血凝和血凝抑制試驗）、沉淀試驗（環狀沉淀試驗、瓊膠擴散沉淀試驗和免疫電泳等）、溶細胞試驗（溶菌試驗、溶血試驗）、補體結合試驗以及免疫熒光技術、酶聯免疫吸附試驗、免疫酶技術、放射免疫分析等。近年來由于與現代科學技術相結合，血清學試驗在方法上日新月異，發展很快，其應用也越來越廣，已成為疫病快速診斷的重要工具。以豬瘟血清學診斷方法為例，分為以下幾種。

3.2.1 間接血凝試驗

間接血凝試驗是用已知血凝抗原檢測未知血清抗體的試驗，稱為正向間接血凝試驗（IHA）抗原，與其對應的抗體相遇，在一定條件下會形成抗原抗體復合物，單這種復合物的分子團很小，肉眼看不見。若將抗原吸附（致敏）在經過特殊處理的紅細胞表面，只需少量抗原就能大大提高抗原和抗體的反應靈敏性。這種經過豬瘟純化抗原致敏的紅細胞與豬瘟抗體相遇，紅細胞便出現清晰可見的凝集現象。間接血凝試驗操作簡單，易制定，既可檢測抗原，也可檢測抗體，可以有效監測豬瘟免疫抗體水平。

3.2.2 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

豬瘟弱毒單抗純化酶聯抗原和豬瘟強毒單抗純化酶聯抗原，分別供檢測經豬瘟弱毒疫苗免疫后產生的抗體和感染豬瘟強毒后產生的抗體之用。

3.2.3 反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）

PCR技術是以待擴增的兩條DNA為模板，在一對人工合成的寡核苷酸引物的介導下，通過耐高溫DNA聚合酶的酶促作用，快速特異地增出特定的DNA片段。廣泛用于豬瘟病毒感染和豬瘟的診斷。

3.2.4 間接免疫熒光試驗

一般是采用發病動物器官的冰凍組織切片直接進行熒光抗體試驗，許多國家和地區已將該法作為法定診斷方法，在我國的應用也較為廣泛。此法操作簡便、結果可靠，可在2 h內完成。檢查器官可以是扁桃體、脾、腎等，以扁桃體為最佳。也可將病料乳劑接種細胞培養物，隨后再用熒光抗體檢出感染細胞，這樣可提高敏感性。

3.2.5 其他血清學診斷技術

除上述幾種常用的血清學診斷方法以外，還有一些其他的診斷技術，其中包括動物試驗、病毒分離、血清中和試驗、骨髓細胞學檢查法、核酸探針雜交試驗等多種方法。

3.3 免疫膠體金技術

免疫膠體金技術是目前較為普遍使用的一種快速診斷技術，主要通過以膠體金富集物的顯色作為指示的一種直觀、快速的技術。膠體金通過正負電荷相互吸引與大蛋白分子聚合在一起，當膠體金富集到一定程度時便會顯出顏色信號，以此來診斷特異性抗原或抗體的存在。該檢測技術具有高效、準確、簡便、敏感度高等特點。

3.4 分子生物學診斷方法

3.4.1 PCR

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種最為常見的分子生物學診斷技術，該方法同樣被應用到多種傳染病病原的檢測中。有學者還設計引物創建了套式RT-PCR方法并應用于PRRSV抗原檢測，這種方法可以靈敏地區分不同來源的PRRSV毒株。

3.4.2 基因芯片

隨著人類基因組測序的完成，新技術的不斷完善和發展，一批新興的高通量基因檢測技術被發展起來，其中就包括基因芯片技術。大量臨床樣品的采集，勢必需要高通量的檢測方法，在這種趨勢的催生下，基因芯片技術也應用到PRRS及其他傳染性疾病的診斷當中。我國學者高淑霞等對PRRSV、豬偽狂犬病毒、豬細小病毒、豬圓環病毒2型、日本乙型腦炎病毒和豬瘟6種病毒進行基因芯片檢測，應用不同病毒的特異性探針檢測不同的信號，經過一次操作同時獲得6種病毒抗原的檢測結果。該方法具有高效、便捷、同時檢測多種疾病的優點，但因其成本相對較高，技術要求高，未能普及應用，但隨著該技術的不斷發展及檢測成本的降低，相信這種高通量、高效率的檢測方法肯定能夠獲得普遍認可及應用。□

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1004-5090（2017）07-0043-02