黑龍江省實驗室能力比對乳粉中阪崎腸桿菌檢驗結果分析

（黑龍江省食品藥品檢驗檢測所，哈爾濱150088）

黑龍江省實驗室能力比對乳粉中阪崎腸桿菌檢驗結果分析

田冬梅，史春輝，張肖寧

（黑龍江省食品藥品檢驗檢測所，哈爾濱150088）

通過實驗室能力比對工作，評價食品微生物實驗室的檢測能力，提高實驗室的檢測水平，保證檢測結果準確、可靠。依據CNAS-GL02《能力驗證結果的統計處理和能力評價指南》和CNAS-CL57《能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明》進行結果統計和評價。結果表明：40家參比實驗室中，4家為不滿意結果，滿意率為90%。食品微生物實驗室檢驗能力尚存在不足，檢驗能力有待提高。

阪崎腸桿菌；實驗室能力比對；結果評價

0 引言

阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii）是腸桿菌科的一種，1980年由黃色陰溝腸桿菌更名而來，是人和動物腸道內寄生的一種周身有鞭毛，兼性厭氧，無芽孢的革蘭陰性棒狀桿菌，營養要求不高，能在6～47℃寬泛的溫度下生長繁殖[1]。2008年，IVERSEN等在雜志《國際系統與進化微生物學雜志》提議將阪崎腸桿菌生物群劃分為一個新屬，即克羅諾桿菌屬（Crono?bacter spp.）[2-3]，屬內包括阪崎克羅諾桿菌（Crono?bacter sakazakii）等7個種和3個亞種[4-5]。阪崎腸桿菌主要危害免疫力低下的嬰幼兒，可引起嚴重的新生兒腦膜炎小腸結腸炎和菌血癥，嚴重者可引起神經系統后遺癥或死亡，死亡率高達50.0%以上[6]。

1 實驗室能力比對基本情況

1.1 實驗室能力比對樣品

參加比對的實驗室均收到3份樣品，其中包括3個阪崎腸桿菌樣品和3袋奶粉樣品，每個相同編號的阪崎腸桿菌樣品和奶粉樣品作為1份樣品，阪崎腸桿菌樣品為西林瓶裝的白色小球，奶粉樣品每袋質量100 g，比對樣品均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.2 參加比對的實驗室

參加黑龍江省乳粉中阪崎腸桿菌實驗室能力比對的實驗室共計40家，包括地市級食品檢驗機構4家，黑龍江省承檢機構7家，嬰配基粉生產企業29家。按照參加實驗室城市劃分，哈爾濱市、齊齊哈爾市、綏化市及大慶市為主要集中城市，共占77.5%，如圖1所示。

1.3 檢測方法

依據GB 4789.40-2010《食品安全國家標準食品微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗》[7]及作業指導書進行阪崎腸桿菌檢測。

圖1 參加實驗室比對計劃的實驗室城市分布情況

1.4 結果統計與評價

1.4.1 統計與評價依據

依據CNAS-GL02《能力驗證結果的統計處理和能力評價指南》[8]和CNAS-CL57《能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明》[9]進行結果統計和評價。

1.4.2 結果評價原則

判定不滿意的標準：實驗室上報結果中任意一份樣品與樣品實際結果不一致的，則判定結果為“不滿意”。

判定滿意的標準：實驗室上報結果與樣品實際結果完全一致；且結果提交時間在截止日期內，則判定結果為“滿意”。

2 實驗室能力比對結果分析

在上報結果的40家實驗室中，36家為滿意結果，4家為不滿意結果（具體情況如表1所示），整體滿意率為90%，不滿意結果均為嬰配基粉生產企業，占生產企業的13.8%，如圖2所示。圖2中，帶百分號的數據表示的是滿意率。析產生錯誤結果的具體原因，建議加強增菌步驟的操作，提高檢驗人員的檢測能力，加強無菌操作意識。

圖2 參加實驗室比對不滿意結果情況

3 討論

此次實驗室能力比對為黑龍江省食品藥品監督管理局首次牽頭組織的乳粉中阪崎腸桿菌檢驗，比對樣品無背景干擾菌，對實驗室檢驗能力要求不高，但通過上報結果及實驗室提供的原始記錄分析，發現食品微生物檢驗實驗室仍存在不足，應在原始記錄、檢驗能力及安全意識等方面進行提高，并加強實驗室的質量控制管理工作。

3.1 提升原始記錄書寫能力

實驗室的原始記錄是對檢測人員的檢測活動和結果數據真實性提供的關鍵證據，記錄應原始、真實、內容完整、數據無誤、結論正確、書寫清晰、整潔，應包含所有關鍵實驗操作步驟。但通過實驗室能力比對工作發現各實驗室提供的原始記錄存在最大的問題是溯源性不強，無具體的樣品處理過程、試驗步驟、菌落形態描述、培養條件、培養基配制及菌種使用等相關信息，無法通過原始記錄進行回溯，多數實驗室在對原始記錄的重要性理解不到位。實驗室原始記錄應包括以下內容[10-11]：樣品名稱、實驗日期、檢驗依據、檢驗方法、實驗參數（所用的重要設備、培養基、試劑、菌株相關信息）、培養條件、實驗結果（包括菌落形態描述）、判定標準、結論、檢驗者、復核者等。對于試驗過程的重要參數，如培養箱、滅菌器的溫度，培養基及試劑批號，菌種編號、傳代代數等均應有記錄，以滿足實驗記錄的追溯性。實驗記錄修改，應有明確要求，如記錄有誤時，應用單線劃掉并簽字或蓋章，保持原有字跡清晰可辨，原來數據不能抹去或覆蓋等，避免造假。

3.2 提高人員的檢驗能力

通過問卷調查發現，從事食品微生物檢驗的人員專科以下學歷的超過50%，本科學歷的接近30%，研究生學歷不足20%，并且研究生學歷的檢驗人員絕大多數均為剛畢業的學生，工作經驗不到3年，微生物專業領域的檢驗人員不足50%，這很大程度上說明目前食品微生物實驗室檢驗人員專業素質不高，通過不滿意實驗室結果分析，發現檢驗人員的基本無菌操作理念和方式方法仍存在較大差異性。故應加強實驗室人員專業技能培訓，提高檢驗人員的整體檢驗水平，尤其非微生物專業或工作經驗少的人員應提高對標準掌握能力，專業的檢驗能力、檢驗過程的把控及結果判斷能力，避免誤判或漏判現象。

3.3 重視安全意識

實驗室應加強生物安全管理理念，提高檢驗人員的安全意識，應嚴格按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》[12]、《病原微生物實驗室生物安全環境管理辦法》[13]、《實驗室生物安全通用要求》[14]及《生物安全實驗室建筑技術規范》[15]進行實施管理，質控用菌的管理及使用應參照《中國微生物菌種保藏管理條例》[16]及實驗室相應管理文件執行。微生物實驗室應制定適合自己的生物安全手冊，包括緊急聯系信息（電話、聯系人等）、緊急導向信息（實驗室平面圖、緊急出口、實驗室標識系統等）、應急操作（人員物品出入控制、急救處理指南等）、危險源及處理措施（生物危險、化學品安全等）及個人防護措施等。與此同時，定期對實驗室進行生物安全檢查，檢驗人員應嚴格遵守生物安全規范，經考核合格的實驗人員方可進行致病性微生物的后期鑒定工作[17]。通過提高操作規范性，加強自我防護意識，在不污染樣品的同時更應避免致病性微生物對試驗人員、實驗室的污染，避免生物安全事故的發生。

3.4 加強實驗室質量控制

實驗室質量控制是實驗室質量管理不可缺少的一部分，是保障實驗室質量安全的至關點，通過控制樣品檢驗的各個環節及影響因素，將檢驗結果的誤差控制在可控范圍內。實驗室的質量控制一般包括內部質量控制和外部質量評估。首先，實驗室應該做好實驗室內部質量控制，應盡可能覆蓋實驗室的所有檢測項目和檢測人員，定期對實驗環境的潔凈度、設備性能、培養基、關鍵試劑、生化試劑盒、菌株的活性以及人員檢驗能力、檢驗過程關鍵點進行監控[18-19]；定期對每個檢測人員進行定性或定量檢測的加標回收試驗、科室內部人員比對、儀器比對等質控活動，檢驗過程還應考慮到平行樣、空白對照及陽性對照等，降低檢驗過程對結果的影響。除此之外，實驗室還應積極參加檢測范圍相關的國家能力驗證或有關政府部門、國際組織、專業技術評價機構組織開展的檢驗檢測機構能力驗證或者檢驗檢測機構間比對，提高檢驗人員的技術水平，確定實驗室的檢測能力，證實實驗室對檢驗程序、方法等有效控制[20]。

[1]曲春波.嬰兒奶粉中阪崎腸桿菌的檢測[J].農產品加工（學刊），2013（7）：64-66.

[2]WHO[World Health Organization].Enterobacter sakazakii（Cronobacter spp.）in powdered follow-up formulae：meeting report，2008.MRA Series15[R].www.who.int/entity/food-safety/publications/micro/ MRA_followup.pdf.

[3]趙貴明，袁飛，楊海榮，等.阪崎腸桿菌的分類變化及新種屬生物學特性[J].衛生研究，2011，39（2）：248-250.

[4]董曉輝，李程思，吳清平，等.食品污染克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）的分離鑒定[J].微生物學報，2013，53（5）：429-436.

[5]田雪，綜述，王娉，等.克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）分子分型技術研究進展[J].衛生研究，2014，43（5）：862-865.

[6]The Centers for Disease Control and Prevention US.Enterobacter sakazakii infect ions associated with the use of powdered infant fomu?la-Tennessee 2001[J].MMWR，2002，51（14）：298-300.

[7]國家衛生和計劃生育委員會.GB 4789.40-2010食品安全國家標準食品微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗[S].2010.

[8]中國合格評定國家認可委員會.CNAS-GL02能力驗證結果的統計處理和能力評價指南[S].2014.

[9]中國合格評定國家認可委員會.CNAS-CL57能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明[S].2015.

[10]蘇德模，胡昌勤，曹曉云.藥品檢驗所微生物實驗室質量管理規范問題的淺見[J].中國藥品標準，2003，3（4）：8-10.

[11]李秋菲，王小亮，繩金房.現行版美國藥典微生物實驗室質量管理規范譯介[J].中國藥事，2010，18（19）：4-5.

[12]中華人民共和國國務院.國務院令第424號病原微生物實驗室生物安全管理條例[S].2004.

[13]國家環境保護總局.國家環境保護總局令第32號病原微生物實驗室生物安全環境管理辦法[S].2006.

[14]中國國家標準化管理委員會.GB 19489-2008實驗室生物安全通用要求[S].2008.

[15]中華人民共和國住房和城鄉建設部.GB 50346-2011生物安全實驗室建筑技術規范[S].2011.

[16]衛生部菌種管理委員會.中國醫學微生物菌種保藏管理辦法[S]. 1985：03-23.

[17]蔡雪鳳，侯翠艷.淺談食品微生物實驗室全面質量管理[J].中國衛生檢驗雜志，2014，24（13）：1969-1971.

[18]劉銳萍，王峰，劉珊珊，等.食品、藥品微生物檢測實驗室質量控制方法分析[J].中國微生態學雜志，2013，25（07）：847-850.

[19]任軍霞.2011年微生物實驗室質控盲樣結果分析[J].醫學動物防制，2012，28（12）：1401-1402.

[20]毛歆，項新華，肖鏡，等.2013年食品藥品系統實驗室能力驗證結果分析[J].中國藥事，2015，29（11）：1145-1150.

Result analysis of the laboratory proficiency comparison in HeiLongjiang prov?ince:Enterobacter Sakazakii examination in the milk powder

TIAN Dongmei,SHI Chunhui,ZHANG Xiaoning
（Heilongjiang Institute for Food and Drug Control，Harbin 150088，China）

To assess and evaluate the testing proficiency of the food microbiology laboratory by the laboratory proficiency comparison,im?prove the level of laboratory testing,and ensure the accuracy and reliability of testing result.Statistics and evaluate the results according to CNAS-GL02“guidance on statistic treatment of proficiency testing results and performance evaluation”and CNAS-CL57“guidance on the application of accreditation criteria for proficiency testing providers in the field of microbiology”.There were four laboratories that were un?satisfied results in 40 laboratories,satisfaction rate was 90%.The testing proficiency of the food microbiology laboratory is insufficient,and needs to improve.

Enterobacter sakazakii；laboratory proficiency testing；results evaluation

TS252.7

：A

：1001-2230（2017）07-0045-03

2016-11-25

田冬梅（1980-）女，主管藥師，研究方向為食品、藥品、醫療器械等微生物檢驗。

張肖寧