高效液相色譜法測(cè)定義烏南棗和新疆紅棗中維生素C和蘆丁的含量

龔寧++毛蘭珍

本文采用反相高效液相色譜法測(cè)定義烏南棗及新疆不同品種紅棗中維生素C和蘆丁含量。方法采用JADE-PAKODS C18 色譜柱（250mm×4.6mm×5um），甲醇-0.02 mol/L乙酸銨（pH=4.0） （50∶50）為流動(dòng)相；流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫：35℃。上述色譜條件下義烏南棗和新疆紅棗中維生素C和蘆丁可完全分離，維生素C在13.1～262.4 mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9971，平均回收率為97.1%，RSD=1.87%（n=5）；蘆丁在1.4～69.2 mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9990，平均回收率為88.6%，RSD=3.08%（n=5）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能同時(shí)測(cè)定義烏南棗和新疆紅棗中維生素C和蘆丁的含量。

義烏大棗系在1700年前由陜西、河南等棗產(chǎn)區(qū)居民遷徙義烏定居時(shí)引進(jìn)栽培。以蘆丁為代表的總黃酮化合物具有多方面的化學(xué)活性，具有抗氧化、抗腫瘤、抗動(dòng)脈硬化以及防止冠心病等多種生理功能。棗中的維生素C具有很強(qiáng)的抗氧化能力。本實(shí)驗(yàn)在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，建立了反相高效液相色譜法測(cè)定義烏南棗中維生素C與蘆丁含量的方法，為義烏南棗保健食品的研究與開(kāi)發(fā)提供一定的參考。

試驗(yàn)部分

儀器和試劑。儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀，附SPD-20A紫外檢測(cè)器，C18色譜柱（250mm×4.6mm×5um）、Labsloustion色譜工作軟件，超聲波清洗器，高速離心機(jī)，超純水器、電子天平。

試劑：維生素C對(duì)照品（Dr.Ehrenstorfer Gmbh LOT：50720）；蘆丁對(duì)照品（上海安譜 批號(hào)：Z0810050）；甲醇（色譜純）；乙酸銨（分析純）。

儀器工作條件。JADE-PAKODS C18 0336-2546色譜柱（250mm×4.6mm×5um）；流動(dòng)相：甲醇-0.02mol/.L乙酸銨（pH=4.0） （50∶50）：流速1.0ml/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10?l；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；理論塔板數(shù)按維生素C峰計(jì)算不低于2500，；按蘆丁峰計(jì)算不低于3500，維生素C與蘆丁分離度大于15。

試驗(yàn)方法。（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)品32.8mg置25ml容量瓶中，加水10ml超聲使其溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液①；精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品17.3mg置于25ml容量瓶中，加50%甲醇10ml超聲使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液②；精密量取貯備液①和貯備液②各5ml置于50ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。（2）樣品前處理：稱取棗類樣品100g，用研磨機(jī)研碎混勻，再精密稱取樣品10.00g，加50%甲醇30ml，超聲萃取15min，入100ml容量瓶稀釋定容至刻度，混勻，靜置沉淀15min，取上清液，8000r/min離心10min，過(guò)0.45?m濾頭，取續(xù)濾液為待測(cè)液。

結(jié)果與分析

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性。流動(dòng)相的選擇，本實(shí)驗(yàn)采用乙酸與0.02mol/.L乙酸銨緩沖液按不同配比，在不同pH值進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明對(duì)兩種流動(dòng)相的選擇pH值從3.6～6.6的范圍內(nèi)，峰形由拖尾慢慢地變?yōu)閷?duì)稱，最佳pH值為4.0；甲醇-0.02mol/.L乙酸銨 （70∶30）為最佳，但在實(shí)際試驗(yàn)中，干擾物質(zhì)較多，故最終選擇甲醇-0.02mol/.L乙酸銨（pH=4.0） （50∶50）。

線性范圍及標(biāo)準(zhǔn)曲線。將兩種標(biāo)準(zhǔn)溶液混合配制成不同濃度進(jìn)行試驗(yàn)，以峰面積為橫坐標(biāo)X，以濃度為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。其中兩種標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)物的線性范圍及回歸方程，相關(guān)系數(shù)，檢出限（按儀器噪聲兩倍計(jì)算）如下。

維生素C：

線性范圍13.1～262.4?g/ml，回歸方程Y=3.207e+004-3.67e+00，相關(guān)系數(shù)為0.9986，檢出限0.0855?g/ml

蘆丁：

線性范圍1.4～69.2?g/ml，回歸方程Y=1.582e+004-3.05e+004，相關(guān)系數(shù)為0.9990，檢出限0.18?g/ml

從中所可知，該方法的線性范圍寬，一般的樣品經(jīng)過(guò)超聲提取，過(guò)濾后即可直接進(jìn)樣，操作簡(jiǎn)便。

精密度試驗(yàn)。分別對(duì)維生素C和蘆丁混合對(duì)照品重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為10?L，結(jié)果維生素C峰面積的RSD值為1.67%，蘆丁峰面積的RSD為1.93%，精密度較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液（義烏南棗），分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣10?L測(cè)定，結(jié)果維生素C峰面積的RSD值為1.09%，蘆丁峰面積的RSD為1.24%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取義烏南棗3份，按“樣品前處理”制成供試液，并在上述色譜條件測(cè)定維生素C與蘆丁的峰面積。結(jié)果樣品中維生素C峰面積的RSD值為1.53%，蘆丁峰面積的RSD為1.67%，表明實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性良好。

加標(biāo)回收率試驗(yàn)。精密稱取義烏南棗3份，每份加入濃度為1304?g/ml維生素C對(duì)照品溶液5.0ml和濃度為692?g/ml蘆丁對(duì)照品溶液0.3ml，按“樣品前處理”制成供試液，在上述色譜條件下進(jìn)樣10?L測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。試驗(yàn)表明，本方法準(zhǔn)確性較好。

樣品含量測(cè)定。供試品溶液10?l進(jìn)樣，每樣平行測(cè)定3份，計(jì)算樣品中維生素C和蘆丁的含量，結(jié)果如下：

義烏南棗：

維生素C 2.0g/kg，RSD 為1.53%；蘆丁39.9mg/kg，RSD為1.67%。

駿棗：

維生素C 1.1g/kg，RSD 為1.23%；蘆丁28.8mg/kg，RSD為1.50%。

阿克蘇灰棗

維生素C 1.4g/kg，RSD 為1.60%；蘆丁9.3mg/kg，RSD為1.55%。

本實(shí)驗(yàn)使用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定義烏南棗及紅棗中維生素C與蘆丁的含量，樣品處理快速、簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好，回收率高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，義烏南棗中維生素C與蘆丁的含量均高于駿棗和阿克蘇灰棗，有較高的食用價(jià)值，為義烏南棗保健食品的研究與開(kāi)發(fā)提供一定的參考。