高效液相色譜法測定義烏南棗和新疆紅棗中維生素C和蘆丁的含量

龔寧++毛蘭珍

本文采用反相高效液相色譜法測定義烏南棗及新疆不同品種紅棗中維生素C和蘆丁含量。方法采用JADE-PAKODS C18 色譜柱（250mm×4.6mm×5um），甲醇-0.02 mol/L乙酸銨（pH=4.0） （50∶50）為流動相；流速1.0 ml/min；檢測波長為254 nm，柱溫：35℃。上述色譜條件下義烏南棗和新疆紅棗中維生素C和蘆丁可完全分離，維生素C在13.1～262.4 mg/L范圍內呈良好的線性關系，r=0.9971，平均回收率為97.1%，RSD=1.87%（n=5）；蘆丁在1.4～69.2 mg/L范圍內呈良好的線性關系，r=0.9990，平均回收率為88.6%，RSD=3.08%（n=5）。結論該方法簡便、準確、重復性好，能同時測定義烏南棗和新疆紅棗中維生素C和蘆丁的含量。

義烏大棗系在1700年前由陜西、河南等棗產區(qū)居民遷徙義烏定居時引進栽培。以蘆丁為代表的總黃酮化合物具有多方面的化學活性，具有抗氧化、抗腫瘤、抗動脈硬化以及防止冠心病等多種生理功能。棗中的維生素C具有很強的抗氧化能力。本實驗在參考相關文獻的基礎上，建立了反相高效液相色譜法測定義烏南棗中維生素C與蘆丁含量的方法，為義烏南棗保健食品的研究與開發(fā)提供一定的參考。

試驗部分

儀器和試劑。儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀，附SPD-20A紫外檢測器，C18色譜柱（250mm×4.6mm×5um）、Labsloustion色譜工作軟件，超聲波清洗器，高速離心機，超純水器、電子天平。

試劑：維生素C對照品（Dr.Ehrenstorfer Gmbh LOT：50720）；蘆丁對照品（上海安譜 批號：Z0810050）；甲醇（色譜純）；乙酸銨（分析純）。

儀器工作條件。JADE-PAKODS C18 0336-2546色譜柱（250mm×4.6mm×5um）；流動相：甲醇-0.02mol/.L乙酸銨（pH=4.0） （50∶50）：流速1.0ml/min；柱溫：35℃；進樣量：10?l；檢測波長：254nm；理論塔板數按維生素C峰計算不低于2500，；按蘆丁峰計算不低于3500，維生素C與蘆丁分離度大于15。

試驗方法。（1）標準溶液的制備：精密稱取維生素C標準品32.8mg置25ml容量瓶中，加水10ml超聲使其溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液①；精密稱取蘆丁標準品17.3mg置于25ml容量瓶中，加50%甲醇10ml超聲使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液②；精密量取貯備液①和貯備液②各5ml置于50ml容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合標準品溶液。（2）樣品前處理：稱取棗類樣品100g，用研磨機研碎混勻，再精密稱取樣品10.00g，加50%甲醇30ml，超聲萃取15min，入100ml容量瓶稀釋定容至刻度，混勻，靜置沉淀15min，取上清液，8000r/min離心10min，過0.45?m濾頭，取續(xù)濾液為待測液。

結果與分析

色譜條件與系統(tǒng)適應性。流動相的選擇，本實驗采用乙酸與0.02mol/.L乙酸銨緩沖液按不同配比，在不同pH值進行試驗，結果表明對兩種流動相的選擇pH值從3.6～6.6的范圍內，峰形由拖尾慢慢地變?yōu)閷ΨQ，最佳pH值為4.0；甲醇-0.02mol/.L乙酸銨 （70∶30）為最佳，但在實際試驗中，干擾物質較多，故最終選擇甲醇-0.02mol/.L乙酸銨（pH=4.0） （50∶50）。

線性范圍及標準曲線。將兩種標準溶液混合配制成不同濃度進行試驗，以峰面積為橫坐標X，以濃度為縱坐標Y，進行線性回歸，得回歸方程。其中兩種標準被測物的線性范圍及回歸方程，相關系數，檢出限（按儀器噪聲兩倍計算）如下。

維生素C：

線性范圍13.1～262.4?g/ml，回歸方程Y=3.207e+004-3.67e+00，相關系數為0.9986，檢出限0.0855?g/ml

蘆丁：

線性范圍1.4～69.2?g/ml，回歸方程Y=1.582e+004-3.05e+004，相關系數為0.9990，檢出限0.18?g/ml

從中所可知，該方法的線性范圍寬，一般的樣品經過超聲提取，過濾后即可直接進樣，操作簡便。

精密度試驗。分別對維生素C和蘆丁混合對照品重復進樣6次，進樣量為10?L，結果維生素C峰面積的RSD值為1.67%，蘆丁峰面積的RSD為1.93%，精密度較好。

穩(wěn)定性試驗。取同一供試品溶液（義烏南棗），分別于0、2、4、8、12、24h進樣10?L測定，結果維生素C峰面積的RSD值為1.09%，蘆丁峰面積的RSD為1.24%，表明供試品溶液在24h內穩(wěn)定性良好。

重復性試驗。精密稱取義烏南棗3份，按“樣品前處理”制成供試液，并在上述色譜條件測定維生素C與蘆丁的峰面積。結果樣品中維生素C峰面積的RSD值為1.53%，蘆丁峰面積的RSD為1.67%，表明實驗方法的重復性良好。

加標回收率試驗。精密稱取義烏南棗3份，每份加入濃度為1304?g/ml維生素C對照品溶液5.0ml和濃度為692?g/ml蘆丁對照品溶液0.3ml，按“樣品前處理”制成供試液，在上述色譜條件下進樣10?L測定，結果見表1。試驗表明，本方法準確性較好。

樣品含量測定。供試品溶液10?l進樣，每樣平行測定3份，計算樣品中維生素C和蘆丁的含量，結果如下：

義烏南棗：

維生素C 2.0g/kg，RSD 為1.53%；蘆丁39.9mg/kg，RSD為1.67%。

駿棗：

維生素C 1.1g/kg，RSD 為1.23%；蘆丁28.8mg/kg，RSD為1.50%。

阿克蘇灰棗

維生素C 1.4g/kg，RSD 為1.60%；蘆丁9.3mg/kg，RSD為1.55%。

本實驗使用高效液相色譜法同時測定義烏南棗及紅棗中維生素C與蘆丁的含量，樣品處理快速、簡單、重現性好，回收率高。本實驗結果顯示，義烏南棗中維生素C與蘆丁的含量均高于駿棗和阿克蘇灰棗，有較高的食用價值，為義烏南棗保健食品的研究與開發(fā)提供一定的參考。