紅原牦牛乳制品中苯甲酸溯源分析

章唯++李江

當前，牦牛乳的加工環境，由于經濟落后的原因，主要是以自給自足的方式進行生產一直處于初級階段。手工采集、清洗的不達標、較差的衛生環境、質量的不穩定、加上工業化程度的不足，使牦牛乳一直沒有登上乳制品的主流銷售渠道。牦牛作為高原地區的特殊群種，其特殊的經濟效益是值得我們研究的。

紅原牦牛乳業有限公司是專注于牦牛奶粉的一家企業，但是由于其苯甲酸的含量過高，一直被受限于局部地區的銷售。本次研究的主要目的是為了追溯其苯甲酸的來源，建立了乳產品中苯甲酸超標控制方案，使其產生更加廣闊的經濟效益。

高效液相色譜法檢測苯甲酸馬尿酸

試劑與儀器。（1）主要儀器與試劑

高效液相色譜儀（AgiLent-1220）；色譜柱（迪馬公司C18柱，250×2.6mm）；超聲波清洗器（Multiwave PRO公司）；甲醇（色譜純，Fisher Chemicl公司）； 0.4%乙酸（抽濾）；乙酸鋅（183 g/L）；亞鐵氰化鉀（92 g/L）；苯甲酸、馬尿酸混合標準液（0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、50μg/ml，上海源葉生物科技有限公司）（2）樣品紅原牦牛乳奶粉；紅原牦牛發酵乳；紅原源頭奶（經過8小時運輸24小時4℃冰箱儲存）。

樣品均由紅原牦牛乳業有限責任公司提供。

實驗方法。

（1）HPLC參考條件

色譜柱：C18柱，250×2.6mm，粒徑5μm

流動性：甲醇+0.4%乙酸溶液（抽濾）=50+50

流速：1mL/min

柱溫：35℃

檢測波長：235nm

進樣量：20μL

進樣時間：15min

（2）苯甲酸馬尿酸標準曲線建立

出峰時間：馬尿酸于7.9分鐘出峰，苯甲酸于10.7分鐘出峰。兩者出峰時間不同，馬尿酸、苯甲酸得到了很好的分離。

建立線性方程：

馬尿酸：Y= 68.17743X - 20.70608，R2= 0.99961

苯甲酸：Y= 108.65547X - 4.57035，R2= 0.99920

（3）樣品預處理

準確稱量約2g試樣于50mL離心管中，加入超純水25mL并混勻，于50℃水浴超聲20min。冷卻后，加入亞鐵氰化鉀溶液4mL與乙酸鋅溶液4mL，震蕩混勻，于5000r/min離心機，離心20min。將離心后樣品中的水相轉移至50mL容量瓶中，用超純水定容至刻度。經過0.45μm的濾膜，樣品瓶分裝后，用高效液相色譜測定。

數據與分析。

對進行預處理的樣品用HPLC進行，再根據GB5009.28-2016中的公式，可以得試樣中苯甲酸、馬尿酸的含量。通過測量可以得出紅原牦牛乳中馬尿酸含量為17.627mg/kg，苯甲酸的含量為17.139mg/kg；發酵乳中馬尿酸的含量為0mg/kg，苯甲酸的含量為29.656mg/kg；奶粉中馬尿酸的含量為85.259mg/kg，苯甲酸的含量為118.986mg/kg。

由此可以發現，本來存在于牛乳中的馬尿酸，到了發酵乳中就消失了。而發酵乳中的苯甲酸含量也上升了。根據此趨勢，實驗可得馬尿酸的確轉化為了苯甲酸。而乳粉，也因為加工工藝中的冷凍濃縮，苯甲酸產生了富集而有著較高的含量。因此控制原料乳中的苯甲酸便可以控制紅原乳制品中苯甲酸的含量。

回收率實驗。取牛奶樣品，做空白對照組。樣品按預處理后，分別取苯甲酸馬尿酸5μg/ml，10μg/ml2個水平2個平行做回收率實驗，并用高效液相色譜進行測定。

本文采用苯甲酸、馬尿酸的混合標準溶液加標5μg/ml，10μg/ml回收率分別為：94.64%，89.57%，82.55%，94.89%。馬尿酸、苯甲酸平均回收率為88.60%和92.23%，大于80%，可得該方法有著較高的可行度。

結果與分析

紅原牦牛乳目前存在問題。

（1）采集環境：牦牛乳目前的都是采用傳統的牧民手工采集然后奶站收購的方式，既沒有機械的工業化，也沒有奶牛的乳頭藥浴技術。不規范的采集方式與惡劣的采集環境，對牦牛乳中微生物的數目有著較大影響。而微生物的數目也直接影響了馬尿酸的轉化。

（2）溫度：高原的晝夜有著較大的溫差，中午的高溫會導致微生物的迭代生長。

（3）儲存環境：牧民將采集了的牦牛乳，并不會直接送向移動收奶站，待儲存一定時間后才會進行回收。期間的不規范儲存也會導致微生物的生長。

紅原牦牛乳中苯甲酸的控制措施。控制苯甲酸的含量，我對此提出了2點控制措施：一方面是采集的規范化：環境衛生的控制、規范的擠奶操作、牦牛乳原料乳儲存與運輸的質量控制等方法都對控制牦牛原料乳中的質量都有著明顯的效果。優良的環境可以減少微生物的菌落總數，對苯甲酸的含量進行了一定程度上的控制。一方面是保存的質量提高：牧民可以利用高溫殺菌；加入41. 47mmol/L 濃度二氧化碳的碳酸水；低溫的保存環境；添加30～50IU/ mL的Nisin等方法，提高牦牛乳在牧民中的保存質量，之后再將牛乳運輸至移動奶站進行系統的工業加工，得到較高質量的牦牛乳。