稀土離子熒光探針測定牛奶中環丙沙星的含量

劉榮利+李亮+葛維娟+韓寧娟

環丙沙星作為喹諾酮類的第三代產品，抗菌活性較強，對革蘭陽性菌與革蘭陰性菌具有良好作用，但也具有一定的副作用。近年來，人類對氟喹諾酮類藥物抗生素的不合理使用問題日益突出，這將引起氟喹諾酮類抗生素殘留量在動物性食品中的超標，如果人體長時間低劑量的攝入該類食物，不僅會導致人體對氟喹諾酮類藥物產生耐藥性，而且其藥物殘留量通過食物對人的中樞神經系統，胃腸道等器官危害較大，威脅人類的健康。因此，對于研究食品中環丙沙星的含量檢測方法具有重要的實際意義和應用價值。

實驗部分

儀器與試劑。F-180熒光分光光度計；UV-2102紫外分光光度計；TGL-16G臺式離心機；PHS-3E酸度計；離子交換純水器。

環丙沙星（中國食品藥品檢定研究院）標準溶液：稱取一定量環丙沙星，用適當濃度的鹽酸溶解，用水配制成2.00×10-3mol/L的儲備液。

Y3+儲備液：稱取一定量Y2O3（純度99.99%），逐滴加入50%鹽酸溶解，緩慢加熱使其溶解，待揮發近干，用水制成4.0×10-2mol/L的儲備液。

BR緩沖溶液：用0.02 mol/L H3PO4、H3BO3、CH3COOH與0.2 mol/L NaOH溶液按一定比例混合，配成不同pH值的緩沖溶液，經酸度計準確測定其pH值，冰箱4℃左右保存。以上儲備液與工作溶液均放在冰箱中4℃保存，使用時適當稀釋。所有試劑均為分析純，實驗用水均為離子交換純水機所純化。

實驗方法。于10mL比色管依次加入一定量環丙沙星標準溶液，一定量 6.0×10-4mol/L

Y3+和0.4mLPH=4的BR緩沖溶液，用蒸餾水定容，室溫放置5min后，分別用石英比色皿進行熒光激發和發射光譜掃描，發射光譜的強度為I。另取10mL比色管作為試劑空白，除不加環丙沙星標準品外，其他都加，靜置5min后，在相同的激發波長下，用石英比色皿進行熒光掃描，發射光譜的強度為I0，計算△IRRS，△IRRS=I-I0。

結果與討論

適宜的反應條件。（1）緩沖溶液濃度對配合物體系熒光強度的影響

取5只10mL比色管，固定其他試劑用量，按照實驗方法，分別測定了緩沖液pH=3、4、5、6、7時，環丙沙星-釔離子配合物體系及試劑空白的熒光強度，計算△IRRS 結果如表1所示。

（2）Y3+離子濃度對配合物體系熒光強度的影響

取5只10 mL比色管，固定其他試劑用量，通過改變Y3+濃度，測定了不同濃度下環丙沙星-釔離子配合物體系及試劑空白的熒光強度，計算ΔIRRS，結果如表2所示。

工作曲線。在確定的最佳反應條件下，測定不同濃度環丙沙星及試劑空白的熒光強度，計算ΔIRRS，以ΔIRRS對c環丙沙星（mol/L）繪制工作曲線。環丙沙星濃度在1.0×10-5mol/L～6.1×10-6mol/L范圍內與體系ΔIRRS呈線性關系，線性回歸方程為：ΔI= 0.6c+4203，相關系數r為 0.9976；以測定十一次空白值的標準偏差計算相應的檢出限（3σ/k）6.5×10-7mol/L。

共存離子對配合物體系的影響。按照試驗方法測定了共存物質對環丙沙星-氧化釔體系的影響，當相對誤差≤5%時，一定量的葡萄糖和常見的金屬離子（Na+、Ca2+、Cu2+、K+）等不干擾測定。

樣品分析

取純牛奶（蒙牛）10ml，40ml酸化乙腈（pH=4），振蕩搖勻，以4000r/min離心，取上清液并加入20ml石油醚，振蕩搖勻，轉移至100ml容量瓶中定容，得樣品液。

取5支10ml比色管，每只比色管中分別加入0.5mL 2×10-5mol/L的環丙沙星、1.2ml 6.0×10-4mol/L Y3+、0.4ml pH=4 的BR緩沖溶液，分別用牛奶提取液定容至刻度。按照實驗方法用標準加入法測定回收率。結果見表4。

結論

研究結果表明，在BR緩沖溶液中，質子化的環丙沙星與稀土離子釔形成二元絡合物，可以產生較明顯的共振瑞利散射光譜。研究表明，在10mL比色管中，依次加入一定量環丙沙星標準溶液，1.2mL 6.0×10-4 mol/L Y3+溶液，0.4 mL pH=4 BR緩沖溶液稀釋至刻度，室溫下反應5 min后，反應產物的共振瑞利散射強度（IRRS）在432 nm處達到最大。環丙沙星濃度在1.0×10-6mol/L～6.1×10-5mol/L范圍內具有線性關系，用該方法測量牛奶中的環丙沙星結果較為滿意。