飲料中合成著色劑檢測方法的驗證

吳建明

摘 要：飲料通過酸性條件下聚酰胺粉吸附和堿性條件下無水乙醇-氨水-水解吸的處理，采用高效液相色譜法分離，可變波長檢測器檢測，外標法定量。驗證結果表明方法線性方程相關系數均大于0.999， 平均回收率在90 %～110%之間，該檢測方法快速、靈敏、準確。

關鍵詞：飲料；合成著色劑；高效液相法

1 試劑

乙酸；甲醇；聚酰胺粉（過200目篩）；乙酸銨；甲醇-甲酸溶液（6：4）；無水乙醇-氨水-水溶液（350：2：150）；pH4的水（檸檬酸溶液調pH到4）。

2 標準物質

準確稱取檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、新紅、靛藍、亮藍各10mg，分別置10mL容量瓶中，加水到刻度，配成標準貯備液。分別一定量的各個標準貯備液標準儲備液混合至10mL容量瓶，用水定容至刻度為標準工作液。

3 儀器與設備

高效液相色譜儀帶二極管陣列檢測器；電子天平；恒溫水浴鍋或超聲儀；G3垂融漏斗。

4 分析步驟

4.1 試樣處理

稱取20g菊花茶飲料，放入100mL燒杯中，超聲驅除二氧化碳。樣品溶液加檸檬酸溶液調pH到6，將1g聚酰胺粉加入到樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用pH為4的水洗滌3次～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3次～5次再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發至近干，加水溶解，定容至10mL，待測。

4.2 標準曲線的制備

分別量取0.10mL，0.20mL，0.40mL，0.60mL，0.80 mL，1.00 mL標準工作液于10mL容量瓶中，用水定容，按標準儲備液溶度折算出各個濃度點的具體濃度。

4.3 色譜條件

色譜柱：C18柱4.6×250mm，5μm；進樣量：10μL；流速：1.0mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長： 二極管陣列檢測器波長范圍：190nm～800nm；流動相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液，按以下梯度洗脫表見表1。

5 方法驗證

5.1 波長選擇

樣品在254nm波長下在5min中出現明顯雜質峰與在4.7min的檸檬黃和在5.2min的新紅有明顯干擾，而樣品在檸檬黃最大吸收波長425nm和新紅最大波長505nm處均無雜質峰干擾，故檸檬黃采用425nm波長下測定，新紅采用505nm測定；其次因為亮藍在254nm波長的響應值小，容易引入較大偏差，在波長603nm處有較大吸收峰，所以亮藍選擇603nm波長下測定。最后因為莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃采用254nm均有較理想的響應值和無明顯干擾峰，所以均采用254nm測定。

5.2 線性范圍

按照4.2配置各合成著色劑標準曲線，依次進高效液相色譜儀測定，以峰面積為縱坐標，以濃度為橫坐標建立曲線圖，讀出其線性相關系數。

從表2數據可得出合成著色劑（檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃和亮藍）線性擬合相關系數均大于0.999，滿足方法要求。

5.3 樣品精密度實驗

取20g的樣品，按照方法規定處理樣品，配制成樣品溶液，進行測試。注：經測定樣品中只含有檸檬黃，本次只針對檸檬黃的含量精密度進行實驗。

從表3數據分析得出，測得樣品中檸檬黃結果含量為0.44mg/kg，RSD%為1.9%，滿足《GB/T 27404-2008實驗室質量控制規范 食品理化檢測》標準要求，重復性良好。

5.4 準確度實驗

取20g的樣品兩份，加入0.2mL標準工作液按照方法規定處理樣品，配制成樣品溶液，進行測試分別計算單個回收率和平均回收率。

從表4數據可得出各種色素的回收率在90%～110%內，均滿足《GB/T 27404-2008實驗室質量控制規范 食品理化檢測》標準中回收率要求。

6 驗證結果及評價

針對產品的特性，通過實驗建立了菊花茶飲料中合成著色劑含量測定的方法，并對方法進行了該方法進行了驗證，驗證結果較令人滿意，合成著色劑各色素在相應吸收波長下線性相關系數均大于0.999，相對標準偏差小于10%，回收率達到90%～110%，均能達到方法的要求。

參考文獻

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