靶向Dicer的RNA干擾對卵巢癌細胞生物學功能的影響▲

何中慧 盧芳芳 徐 紅 王澤華 遲 博 況 燕*

(1 廣西醫科大學第一附屬醫院婦科，南寧市 530021；2 廣西醫科大學，南寧市530021；3 華中科技大學同濟醫學院附屬內科醫院婦產科；武漢市 430074)

靶向Dicer的RNA干擾對卵巢癌細胞生物學功能的影響▲

何中慧1盧芳芳2徐 紅1王澤華3遲 博1況 燕1*

(1 廣西醫科大學第一附屬醫院婦科，南寧市 530021；2 廣西醫科大學，南寧市530021；3 華中科技大學同濟醫學院附屬內科醫院婦產科；武漢市 430074)

目的 探討Dicer抑制對卵巢癌細胞A2780增殖和遷移能力的影響，以進一步明確Dicer在卵巢癌生物學行為中的作用。方法 合成Dicer的小干擾RNA(Dicer siRNA)轉染A2780細胞并篩選有效siRNA，實時定量PCR(RT-PCR)檢測Dicer的mRNA的表達，蛋白印跡法檢測Dicer蛋白的表達，MTT檢測細胞生長活力，Transwell小室檢測細胞遷移能力，流式細胞儀測定細胞周期。結果 與未轉染組相比，siRNA1658轉染組Dicer基因mRNA的表達最低，為(0.194±0.002)，明顯低于siRNA1897轉染組的(0.535±0.015)，差異有統計學意義(P<0.001)，但與siRNA334組的(0.251±0.014)相比，差異無統計學意義(P>0.05)。實時定量PCR結果顯示，以未轉染A2780細胞Dicer mRNA表達水平為100%，siDicer-A2780細胞Dicer的mRNA水平相對下降(0.157±0.012)，差異有統計學意義(P<0.001)。以未轉染A2780細胞Dicer的蛋白表達水平為100%，siDicer-A2780細胞Dicer的蛋白水平相對下降(0.153±0.021)，差異有統計學意義(P<0.001)。在種板后第3天、第4天、第5天，與對照組細胞比較，siDicer轉染的A2780細胞增殖能力增強(P均<0.05)。與對照組轉染siNC的細胞相比，轉染siDicer 96 h后，siDicer-A2780細胞的增殖活性平均上升了23%。細胞周期分析結果顯示siDicer-A2780細胞中G0/G1期占(44.26±0.48)%，S期占(25.05±1.20)%，G2/M期占(21.53±0.77)%；對照組siNC-A2780細胞中G0/G1期占(52.79±1.11)%，S期占(20.01±1.22)%，G2/M期占(19.80±0.24)%。siDicer-A2780細胞S期和G2/M細胞較對照組明顯增加(P均<0.05)，而G0/G1期細胞則減少(P<0.001)。與對照組siNC-A2780細胞的穿膜細胞數相比，抑制Dicer表達的siDicer-A2780 細胞的穿膜細胞數增加(3.99±0.29)倍(P<0.001)。結論 Dicer基因具有抑制卵巢癌細胞增殖和侵襲的能力。

卵巢癌；Dicer基因；細胞增殖；細胞侵襲；治療靶點

Dicer屬于核糖核酸酶III(RNaseIII)的家族成員，是微小分子RNA(miRNA)生物合成過程中的關鍵酶。作為miRNA的上游調控因子，Dicer下調可能通過降低miRNA的表達來促進細胞轉化和腫瘤的形成[1]。但目前關于Dicer對卵巢癌細胞生物學功能影響的報道甚少。為進一步明確Dicer與卵巢腫瘤生長和轉移的關系，通過靶向干擾Dicer的小干擾RNA(siRNA)沉默Dicer基因，抑制Dicer基因在卵巢癌細胞A2780中的表達，探討Dicer抑制對卵巢癌細胞生物學功能的影響。現將結果報告如下?！?br>