厄洛替尼減輕STZ誘導的糖尿病腎病模型大鼠的腎損傷

黃 恬， 蔡 稀， 鐘 玲

(重慶醫科大學附屬第二醫院腎內科， 重慶 400010)

厄洛替尼減輕STZ誘導的糖尿病腎病模型大鼠的腎損傷

黃 恬， 蔡 稀， 鐘 玲△

(重慶醫科大學附屬第二醫院腎內科， 重慶 400010)

目的： 研究表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑厄洛替尼(erlotinib)對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用及機制。方法: 采用大劑量(55 mg/kg)鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射誘導大鼠糖尿病腎病模型，以1周后血糖值>16.7 mmol/L的大鼠為造模成功的標準。將糖尿病大鼠隨機分為2組[STZ組和STZ+erlotinib(100 mg·kg-1·d-1)組]，并以正常大鼠為對照組 (control 組)。Erlotinib處理4周后，檢測大鼠空腹血糖、血清肌酐和24 h尿蛋白含量的變化；HE染色和Masson染色觀察腎臟組織病理學改變；Western blot檢測各組腎臟組織中EGFR、p-EGFR、轉化生長因子β1(TGFβ1)、Smad2/3、p-Smad2/3、Ⅳ型膠原蛋白(ColⅣ)和纖連蛋白(fibronectin)的蛋白水平；活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)試劑盒分別檢測各組腎臟組織中ROS和MDA水平。結果: 與control組相比，STZ組血糖、24 h尿蛋白和血清肌酐水平均顯著升高(P<0.01)，腎組織形態學出現異常變化；與STZ組相比，STZ+erlotinib組的血糖、24 h尿蛋白水平和血清肌酐水平顯著降低(P<0.05)，腎小球結構恢復正常，腎小球系膜細胞增生程度明顯減弱。厄洛替尼明顯抑制了STZ大鼠腎組織中p-EGFR、TGFβ1、p-Smad2/3、ColⅣ和fibronectin蛋白水平，也明顯抑制了STZ大鼠腎組織中ROS和MDA水平。結論: 厄洛替尼可能通過抑制EGFR/TGFβ1-Smad2/3信號通路的激活來抑制糖尿病腎病腎組織的纖維化和氧化應激反應，從而減輕腎損傷。

糖尿病腎病； 厄洛替尼； 表皮生長因子受體； 轉化生長因子β1

糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是Ⅰ型或Ⅱ型糖尿病的主要并發癥，繼發于糖尿病并呈進行性加重，是糖尿病患者的主要死因[1]，也是導致腎臟相關疾病發病率及死亡率升高的主要原因[2]。糖尿病腎病的主要病理特征表現為腎小管及腎小球基底膜增厚、腎小管腎小球肥大、系膜區細胞外基質進行性聚集和腎小管間質纖維化等[2]。臨床上DN初期表現為腎小球濾過率減小，后期出現蛋白尿、動脈血壓升高、體液潴留等，最終導致腎功能衰竭[3]。目前，我國糖尿病發病率快速增長，隨之而來的社會問題也日趨嚴重。因此，探索糖尿病腎病的發病機制，尋求防治措施，顯得尤為迫切。

表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)屬于受體酪氨酸激酶ErB家族成員之一，包含一個細胞外的配體結合區、一個跨膜區、一個細胞質蛋白酪氨酸激酶區以及一個具有多個磷酸化結合位點的C末端。EGFR廣泛表達于哺乳動物腎臟組織中，包括腎小球、腎小管、腎皮質及腎髓質集合管等[4]。越來越多的研究表明EGFR是細胞增殖、分化、遷移及死亡等細胞生理病理變化的重要調節因子[5-6]。也有研究證實EGFR活化與轉化生長因子β(transforming growth factor，TGFβ)信號通路相互作用是腎組織纖維化的關鍵環節，TGFβ信號通路的激活能促進膠原蛋白、纖連蛋白和層黏連蛋白的形成，并且能抑制由基質金屬蛋白酶介導的細胞外基質的降解，導致細胞外基質的積累增加，從而促進了糖尿病腎病的進展[4,7-9]。此外，TGFβ信號通路的激活可促進氧化應激反應，而氧化應激是糖尿病腎損傷的重要原因之一[10]。因此，在糖尿病腎病進展過程中調控EGFR的活性具有重要的意義。厄洛替尼(erlotinib)是一種新型的表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑，通過競爭性結合酪氨酸激酶催化區結合位點來阻斷表皮生長因子受體酪氨酸激酶的信號轉導途徑。有文獻報道在糖尿病腎病模型中EGFR處于活化狀態，EGFR抑制劑厄洛替尼能夠激活AMPK、抑制mTOR信號通路，而mTOR信號通路的抑制則增加了自噬反應，減弱了內質網應激，最終減慢了糖尿病腎病的發展[11]。然而該報道未闡明厄洛替尼對與EGFR活化密切相關的TGFβ信號通路及氧化應激反應的影響。

本研究通過對糖尿病腎病模型大鼠進行厄洛替尼干預，從生化指標、腎臟病理水平來證實其對糖尿病腎病模型大鼠腎臟的保護作用，并通過闡明厄洛替尼對TGFβ信號通路的影響解析其發揮保護作用的分子機制，以初步探討厄洛替尼治療糖尿病腎病的臨床應用價值。

材 料 和 方 法

1 實驗動物、試劑和儀器

46只健康成年SD大鼠，體重200～220 g，購自第三軍醫大學，合格證號為0020392。

鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)購于Sigma；厄洛替尼購自Selleck；尿蛋白定量測試盒、血清肌酐(serum creatinine，Scr)測定試劑盒、活性氧簇(reactive oxygen species，ROS) 檢測試劑盒和丙二醛(malondialdehyde，MDA)檢測試劑盒購于南京建成生物工程研究所；抗EGFR抗體、抗p-EGFR抗體、抗TGFβ1抗體、抗Ⅳ型膠原蛋白(collagen Ⅳ，ColⅣ)抗體、抗纖連蛋白(fibronectin)抗體和抗β-actin抗體均購于Bioworld；抗Smad2/3和抗p-Smad2/3抗體購于Cell Signaling Technology；抗兔Ⅱ抗購于中衫金橋公司。

激光掃描共聚焦顯微鏡(Leica)；照相系統(OLYMPUS)；分光光度計(Thermo)；TC2323型恒溫箱(SHEL LAB)；高速臺式離心機(Beckman)；血糖儀及配套試紙(愛樂芬)。

2 主要方法

2.1 動物模型的建立及分組 46只健康SD大鼠給予普通飼料適應性喂養2周后，尾靜脈取血測定血糖未見異常(第0周)。選取40只大鼠禁食后，給予大劑量(55 mg/kg)STZ腹腔注射，1周后(第1周末)，禁食3 h，血糖值>16.7 mmol/L的大鼠視為糖尿病模型建模成功。選擇18只造模成功的大鼠，隨機分為6組，灌胃給予厄洛替尼，每組劑量分別為0、25、50、75、100和125 mg·kg-1·d-1，連續灌胃3周(第2～4周)后檢測空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)水平，以空腹血糖水平下降最明顯時的厄洛替尼劑量(100 mg·kg-1·d-1)為實驗處理劑量。另選取6只糖尿病大鼠設為厄洛替尼組(STZ+erlotinib組)，通過灌胃給予厄洛替尼(100 mg·kg-1·d-1)，連續給藥4周(第5～8周)；同時，分別選取6只健康大鼠設為對照組(control組)和6只糖尿病大鼠設為STZ組，灌胃給予等體積生理鹽水。

2.2 生化指標檢測 采用愛樂芬血糖儀及配套試紙測定大鼠FBG水平，記錄各組大鼠的血糖變化。第0周、第4周、第6周、第8周末，將大鼠放入代謝籠中，收集24 h尿標本，離心取上清，測定尿蛋白含量；同時于相同時點收集大鼠血液測定各組大鼠血肌酐的含量。

2.3 收集腎組織標本 采用頸椎脫臼法處死各組大鼠，解剖、分離出雙側腎臟，去除包膜，用生理鹽水沖洗后，液氮保存，備用。

2.4 HE染色 取實驗大鼠腎臟組織，置于冰臺用 PBS 沖洗干凈，除去包膜，濾紙吸干，取左腎沿冠狀面剖開，置于4%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，常規HE染色，中性樹膠封固。光學顯微鏡400倍下觀察大鼠腎組織腎小球、腎小管、間質等的形態結構變化，并進行圖像采集。

2.5 Masson染色觀察腎臟纖維化 腎臟組織切片經蘇木精染色1 min，沖洗液沖洗30 s；麗春紅酸性品紅液染色30～60 s，沖洗液清洗30 s；磷鉬酸分色6～8 min，棄分色液；亮綠藍染色5 min，用無水乙醇清洗；無水乙醇基本揮發完后加入中性樹脂封片，光學顯微鏡400倍下觀察，對腎臟膠原纖維的分布和纖維化程度進行分析。

2.6 Western blot檢測蛋白水平 取米粒大小的腎臟組織于流式管中，加入1 mL 含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解緩沖液，用組織勻漿機破碎組織，后將流式管置于冰中15 min，轉移樣本至EP管中，16 000 ×g離心5 min，吸取上清，用BCA法測定蛋白濃度。取30 μg蛋白上樣，SDS-PAGE分離蛋白后，轉移蛋白至NC膜，5%脫脂牛奶封閉1 h，稀釋 I 抗(抗EGFR抗體1∶1 000、抗p-EGFR抗體1∶800、抗TGFβ1抗體 1∶1 000、抗Smad2/3、p-Smad2/3抗體 1∶2 000、抗ColⅣ抗體1∶500、抗fibronectin抗體1∶500、抗β-actin抗體1∶2 000)，4 ℃搖床中孵育過夜，Ⅱ抗室溫下搖床孵育2 h，ECL顯影。以β-actin為內參照。

2.7 活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)水平的檢測 準確稱取大鼠腎臟組織，按重量(g)∶體積(mL)=1∶20的比例加入勻漿介質(100 mmol/L PBS緩沖液)，用組織勻漿機破碎組織， 1 000×g離心10 min，取上清待測，另取部分上清用BCA法測定蛋白濃度。配制1 mmol/L DCFH-DA工作液，在10 μL樣本中加入190 μL DCFH-DA工作液作為測定孔，在10 μL PBS中加入190 μL DCFH-DA工作液作為對照孔，混勻后，37 ℃孵育30 min，于熒光顯微鏡下(激發波長500 nm，發射波長535 nm)觀察測量熒光強度，計算每毫克蛋白熒光強度和熒光強度的百分比。

2.8 丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的檢測 按2.7所述方法獲得腎臟組織勻漿，BCA法測定蛋白濃度，按照試劑盒說明書加入待測樣本、標準品及試劑，混勻后95 ℃沸水浴40 min， 4 000 r/min離心10 min，取上清于532 nm處讀取各標本吸光度，根據說明書上MDA含量計算公式計算每毫克蛋白中MDA的含量。

3 統計學處理

使用SPSS 19.0統計軟件對實驗結果進行統計學分析，所得數據采用均數±標準差(mean±SD)表示，多組間均數比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Bonferroni校正的t檢驗， 以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 不同劑量厄洛替尼作用效果檢測

不同劑量的厄洛替尼均能降低STZ大鼠的空腹血糖水平，其中100 mg·kg-1·d-1和125 mg·kg-1·d-1灌胃劑量的作用效果最明顯，見圖1。因此后續我們選擇100 mg·kg-1·d-1作為厄洛替尼的實驗劑量。

Figure 1.The STZ-induced DN rats were treated by different doses of erlotinib for 3 weeks, and then FBG levels were measured by glucometer. Mean±SD.n= 3.*P<0.05,**P<0.01vs0 mg·kg-1·d-1group.

圖1 不同劑量厄洛替尼處理DN大鼠3周后的FBG水平

2 厄洛替尼對STZ誘導糖尿病腎病模型大鼠血糖的影響

我們檢測了經STZ造模及erlotinib (100 mg·kg-1·d-1)處理的大鼠空腹血糖水平，結果顯示STZ誘導的第6周和第8周，STZ組空腹血糖水平均顯著高于control組，差異具有統計學意義(P<0.01)；而STZ+erlotinib組空腹血糖水平與STZ組相比明顯下降，差異具有統計學意義(P<0.01)，見表1。說明erlotinib能明顯改善糖尿病腎病大鼠的血糖水平。

3 厄洛替尼對STZ誘導糖尿病腎病模型大鼠24 h尿蛋白和血清肌酐的影響

表1 厄洛替尼(100 mg·kg-1·d-1)處理DN大鼠后各組FBG水平

**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsSTZ group. Week 0 was the time at the beginning of STZ treatment.

我們也檢測了經STZ造模及erlotinib (100 mg·kg-1·d-1)處理的大鼠尿24 h蛋白含量，結果顯示STZ誘導的第6周和第8周，STZ組24 h尿蛋白水平明顯較control組升高，差異具有統計學意義(P<0.01)；而相比于STZ組，STZ+erlotinib組尿蛋白水平明顯下降(P<0.01)，見表2。另外，在第STZ誘導的6周和第8周檢測大鼠血清肌酐水平發現，相比于control組，STZ組血清肌酐明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)；而相比于STZ組，STZ+erloti-nib組血清肌酐明顯下降(P<0.05)，見表3。這說明erlotinib能明顯降低糖尿病腎病大鼠的24 h尿蛋白含量及血清肌酐濃度。

表2 厄洛替尼(100 mg·kg-1·d-1)處理DN大鼠后各組24 h尿蛋白水平

Table 2.The 24 h urine protein levels in DN rats treated with erlotinib were measured by automatic biochemical analyzer (mg. Mean±SD.n=6)

GroupWeek0Week4Week6Week8Control5．13±1．115．05±1．085．27±1．335．33±1．35STZ5．25±1．5222．37±3．91??23．10±5．20??22．88±6．10??STZ+erlotinib5．40±1．4223．89±4．7915．78±1．83##8．38±1．67##

**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsSTZ group. Week 0 was the time at the beginning of STZ treatment.

表3 厄洛替尼(100 mg·kg-1·d-1)處理DN大鼠后各組血清肌酐水平

Table 3.The serum creatinine levels in DN rats treated with erlotinib were measured by automatic biochemical analyzer (μmol/L. Mean±SD.n=6)

GroupWeek0Week4Week6 Week8Control74．49±6．4475．08±5．0877．32±10．9976．61±8．78STZ69．36±7．33210．33±33．49??208．02±35．85??213．87±55．42??STZ+erlotinib72．53±8．91205．53±38．63168．21±13．80#138．86±16．53#

*P<0.01vscontrol group;#P<0.05vsSTZ group. Week 0 was the time at the beginning of STZ treatment.

4 厄洛替尼對STZ誘導糖尿病腎病模型大鼠腎臟組織病理學變化的影響

在erlotinib處理4周后(即STZ誘導第8周)，HE染色結果顯示，control組腎小球結構正常，上皮細胞排列整齊，結構清楚，小管間質、腎血管未見明顯異常，而STZ組出現腎小球系膜細胞增多，毛細血管基底膜增厚，上皮細胞排列不整齊，結構紊亂，提示STZ誘導大鼠腎臟組織出現了病理性損傷。STZ+erlotinib組較STZ組比，大鼠腎臟病理改變程度明顯減輕，見圖2。

另外，Masson染色結果顯示，control組大鼠腎小球僅基底膜及腎小管間質可見少量的膠原纖維(藍色)，而STZ組大鼠腎小球和腎小管間質中可見大量藍色深染的膠原纖維，并且明顯多于control組，說明有膠原纖維沉積。而STZ+erlotinib組大鼠腎小球和腎小管間質中膠原纖維較STZ組明顯減少，見圖2。以上研究結果說明erlotinib可明顯減輕糖尿病腎病大鼠的腎損傷。

5 厄洛替尼對糖尿病腎病大鼠腎組織中EGFR蛋白水平及磷酸化的影響

Western blot檢測結果顯示control組、STZ組和STZ+erlotinib組大鼠腎組織中EGFR的蛋白水平沒有明顯差異；而與control組相比，STZ組大鼠腎組織中EGFR的磷酸化水平明顯升高(P<0.01)；STZ+erlotinib組與STZ組相比，大鼠腎組織中EGFR的磷酸化水平顯著降低(P<0.01)，見圖3。這一結果說明厄洛替尼抑制了STZ誘導的DN大鼠腎組織中EGFR的激活。

6 厄洛替尼對糖尿病腎病大鼠腎組織中TGFβ信號通路的影響

我們也檢測了control組、STZ組和STZ+erlotinib組大鼠腎組織中TGFβ信號分子及其下游信號分子水平的差異。與control組相比，STZ組大鼠腎組織中TGFβ1和p-Smad2/3的蛋白水平明顯升高(P<0.01)；STZ+erlotinib組與STZ組相比，大鼠腎組織中TGFβ1和p-Smad2/3的蛋白水平顯著降低(P<0.01)；而各組大鼠腎組織中Smad2/3的蛋白水平無明顯差異。此外，與control組相比，STZ組大鼠腎組織中Ⅳ型膠原蛋白和纖連蛋白的水平明顯升高(P<0.01)；STZ+erlotinib組與STZ組相比，大鼠腎組織中Ⅳ型膠原蛋白和纖連蛋白的表達水平顯著降低(P<0.01)。以上結果說明厄洛替尼抑制了STZ組腎組織中TGFβ1-Smad2/3信號通路的激活，從而減少了腎組織中Ⅳ型膠原蛋白和纖連蛋白的產生，減輕了腎損傷，見圖4。

Figure 2.The DN rats were treated with erlotinib (100 mg·kg-1·d-1) for 4 weeks, and then the renal tissues in all groups were stained by HE and Masson staining (×400).

圖2 厄洛替尼處理DN大鼠4周后腎組織的HE和Masson染色結果

Figure 3.The DN rats were treated with erlotinib (100 mg·kg-1·d-1) for 4 weeks, and then the EGFR and p-EGFR levels in rat kidney tissues were measured by Western blot.**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsSTZ group.

圖3 厄洛替尼處理DN大鼠4周后各組大鼠腎組織中EGFR和p-EGFR的水平

7 厄洛替尼對糖尿病腎病大鼠腎組織中氧化應激水平的影響

與control組相比，STZ組大鼠腎組織中ROS的水平明顯升高，而STZ+erlotinib組大鼠腎組織中ROS的水平相比于STZ組明顯降低(P<0.01)。此外，與control組相比，STZ組大鼠腎組織中的MDA含量明顯升高，而STZ+erlotinib組大鼠腎組織中的MDA含量相比于模型組明顯降低(P<0.05)，見圖5。

討 論

糖尿病腎病是威脅人類生命的糖尿病并發癥之一，盡管已有較多的手段用于控制糖尿病腎病的發生發展，然而許多糖尿病患者仍然有較高的風險進展為糖尿病腎病。因此，鑒定糖尿病腎病的危險因子，闡明其抑制因素在糖尿病腎病發生過程中的作用具有重要的意義。研究發現在糖尿病腎病腎組織中EGFR的活化水平較高，抑制EGFR信號通路的活化具有潛在的治療糖尿病腎病的作用[11-12]。Erlotinib是EGFR的抑制劑，目前較少的研究關注其是否對糖尿病腎病腎組織具有保護作用。在本研究中，我們成功構建了STZ誘導的大鼠糖尿病腎病模型，STZ組大鼠血糖、24 h尿蛋白、血清肌酐水平均顯著升高，并且出現異常的腎臟組織病理形態學變化，膠原纖維的產生也明顯增多。而erlotinib作用后，大鼠的血糖、24 h尿蛋白、血清肌酐水平均明顯降低，腎臟組織的病理形態學異常變化明顯改善，膠原纖維的產生也明顯減少，表明腎組織的損傷程度明顯減輕，揭示erlotinib對糖尿病腎病腎組織具有保護作用。

Figure 4.The DN rats were treated with erlotinib (100 mg·kg-1·d-1) for 4 weeks, and then the TGF β1, Smad2/3, p-Smad2/3, ColⅣ and fibronectin levels in rat kidney tissues were measured by Western blot.**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsSTZ group.

圖4 厄洛替尼處理DN大鼠4周后各組大鼠腎組織中TGFβ1、Smad2/3、p-Smad2/3、ColⅣ和fibronectin的水平

Figure 5.The DN rats were treated with erlotinib (100 mg·kg-1·d-1) for 4 weeks, and then the levels of ROS and MDA in the rats kidney tissues of each group were detected by ROS assay and MDA assay, respectively. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsSTZ group.

圖5 厄洛替尼處理DN大鼠4周后各組大鼠腎組織中的ROS水平和MDA水平

TGFβ1是導致纖維化的關鍵細胞因子，其通過增加細胞外基質的形成，促進了糖尿病腎病的腎小球硬化和腎小管間質纖維化過程[13-15]，TGFβ1-Smad2/3信號通路的活化能夠明顯促進細胞外基質膠原和纖連蛋白的產生[16-17]。而EGFR的活化能介導TGFβ1-Smad2/3信號通路的激活[4, 18]。本課題組研究證實，STZ組大鼠腎組織中EGFR的活化水及TGFβ1的蛋白水平明顯增高，Smad2/3的磷酸化水平也顯著增加，表明EGFR的活化介導了TGFβ1-Smad2/3信號通路的激活。進一步的研究證實TGFβ1-Smad2/3信號通路的激活導致了STZ組大鼠腎組織中膠原和纖連蛋白水平增加。與STZ組相比，STZ+erlotinib組大鼠腎組織中EGFR和TGFβ1-Smad2/3信號通路的活化水平明顯降低，膠原和纖連蛋白的表達水平也顯著降低，揭示erlotinib通過抑制EGFR/TGFβ1-Smad2/3信號通路的活化減弱了糖尿病腎病腎組織的纖維化過程。

據文獻報道，ROS水平的增加是糖尿病腎病腎組織損傷的重要原因[19]，并且EGFR的活化及TGF β1信號通路的激活均能促進ROS水平的增加[10,20]。在本研究中也發現STZ組大鼠腎組織中的ROS及MDA水平顯著升高，而與STZ組相比，STZ+erlotinib組大鼠腎組織中的ROS及MDA水平明顯降低，表明erlotinib減弱了糖尿病腎病腎組織中的氧化應激反應。

綜上所述，erlotinib通過抑制STZ所誘導的糖尿病腎病腎組織EGFR/TGFβ1-Smad2/3信號通路的激活，減弱了腎組織的纖維化和氧化應激反應，減輕了腎損傷，揭示了其保護糖尿病腎病大鼠腎組織的作用。本研究的發現為將erlotinib用于臨床治療糖尿病腎病提供了初步的理論依據。

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(責任編輯： 盧 萍， 余小慧)

Effect of erlotinib on renal injury in rats with STZ-induced diabetic nephropathy

HUANG Tian, CAI Xi, ZHONG Ling

(DepartmentofNephrology,TheSecondAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400010,China.E-mail: 536576113@qq.com)

AIM: To investigate the effect of epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitor erlotinib on kidney injury in diabetic nephropathy (DN) rat and the underlying mechanism. METHODS: The rat model of DN was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) at dose of 55 mg/kg. One week after STZ injection, the rats with blood glucose level exceeding 16.7 mmol/L were identified as diabetic. Diabetic rats were randomly divided into 2 groups: STZ group and STZ+erlotinib group. In addition, the normal rats were used as control group. The rats in STZ+erlotinib group were treated with erlotinib at 100 mg·kg-1·d-1for 4 weeks(5th～8th week). The fasting blood glucose (FBG), serum creatinine (SCr) and 24 h urine protein were measured. The pathological changes of the kidney were observed by HE staining and Masson staining. The protein levels of EGFR, p-EGFR, transforming growth factor β1 (TGFβ1), Smad2/3, p-Smad2/3, collagen Ⅳ (ColⅣ) and fibronectin in the kidney tissues were determined by Western blot. The reactive oxygen species (ROS) level and malondialdehyde (MDA) content in the renal tissues were futher analyzed. RESULTS: Compared with control group, the levels of FBG, 24 h urine protein and Scr were significantly increased in STZ group (P<0.01). Compared with STZ group, the levels of FBG, 24 h urine protein and SCr in STZ+erlotinib group were markedly decreased (P<0.05). In additon, the glomerular structure was restored to normal, the proliferative degree of mesangial cells markedly attenuated, and the epithelial cells were in alignment in STZ+erlotinib group. Moreover, erlotinib significantly inhibited the protein levels of p-EGFR, TGFβ1, p-Smad2/3, ColⅣ and fibronectin in the kidney tissues of STZ rats. In addition, erlotinib also significantly inhibited the levels of ROS and MDA in the kidney tissues of STZ rats. CONCLUSION: Erlotinib ameliorates STZ-induced diabetic nephropathy possibly through inhibiting the activation of EGFR/TGFβ1-Smad2/3 signaling pathway in association with suppression of fibrosis and oxidative stress.

Diabetic nephropathy; Erlotinib; Epidermal growth factor receptor; Transforming growth factor β1

1000- 4718(2017)08- 1460- 07

2016- 12- 12

2017- 04- 01

R587.1； R965

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.08.019

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