溶血標本對化學發光方法檢測獻血者四項傳染病指標的影響

萬小春

【摘要】 目的 探索溶血標本對化學發光方法檢測獻血者四項傳染病指標的影響。方法 無償獻血者乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）、梅毒螺旋體抗體（抗-TP）單項檢測結果陽性標本各30份， 人類免疫缺陷病毒抗體（抗-HIV）檢驗結果陽性標本10份及隨機選取四項傳染病檢測結果均陰性的標本30份。將實驗分為4組， 分為原血清組、輕度、中度和重度溶血組。原血清組標本不做任何處理， 人為造成輕、中、重度溶血， 血紅蛋白濃度≤2 g/L為輕度溶血組， 2 g/L<血紅蛋白濃度≤4 g/L為中度溶血組， 血紅蛋白濃度﹥4 g/L為重度溶血組。在全自動免疫分析儀上進行了化學發光法檢測。結果 輕度、中度、重度溶血組HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的測定值與原血清組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。結論 溶血標本用化學發光法檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的結果沒有明顯影響， 化學發光法可用于獻血者傳染病四項篩查。

【關鍵詞】 溶血標本；化學發光法； 獻血員；傳染病檢測

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.21.113

依據《血站技術操作規程（2012 版） 》第4章節“血液檢測”所規定了的可經輸血傳播感染的檢測項目包括HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP， 檢測模式為兩種不同廠家生產的酶聯免疫吸附劑測定（ELISA）試劑進行初復檢[1]。2016年， 國家衛計委要求獻血者篩查在原來的基礎上對前三項病毒增加一次核酸檢測。ELISA檢測技術具有成本低、靈敏度和特異性相對較好而作為基本檢測方法。近年來， 化學發光法作為一種新的檢測技術， 以其敏感性高、特異性強、簡便快捷、重復性好、影響因素少等優點而廣泛應用于臨床檢測， 而標本溶血作為不可避免的現象影響實驗的準確性， 有學者認為ELISA檢測方法中標本溶血可導致假陽性結果的出現[2， 3]。為研究標本溶血對化學發光方法檢測獻血者四項傳染病指標是否有影響， 設計本實驗， 報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 收集本血站2016年5～6月無償獻血者HBsAg、抗-HCV、抗-TP單項檢測結果陽性標本各30份， 抗-HIV檢驗結果陽性標本10份及隨機選取四項傳染病檢測結果均陰性的標本30份， 采用EDTA抗凝管留取5 ml。所有收集的標本在離心后， 肉眼觀察血清無溶血、無黃疸、無混濁。

1. 2 儀器與試劑 全自動免疫分析儀（日本 SYSMEX HISCL-5000， 化學發光法）， 化學發光試劑：HISCL Anti-HBsAg、Anti-HCV、HIVAg+Ab和Anti-TP Assay Kit， 由希森美康醫用有限公司提供， 生產批號：ZS6108。

1. 3 方法 使用1.5 ml EP管將所有標本分裝為4組， 分別標為原血清組、輕度、中度、重度溶血組。對照組標本不做任何處理， 實驗組標本用竹簽攪動人為造成溶血， 離心后測量其上清液中的游離血紅蛋白濃度， 血紅蛋白濃度≤2 g/L為輕度溶血組， 2 g/L<血紅蛋白濃度≤4 g/L為中度溶血組， 血紅蛋白濃度﹥4 g/L為重度溶血組[4]。按照儀器操作說明書進行化學發光法檢測， 所有標本進行平行兩次檢測， 取其平均值， HBsAg結果以 IU/ml表示；抗-HCV、抗-TP、抗-HIV以C.O.I表示。

1. 4 統計學方法 采用SPSS16.0統計學軟件對研究數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

輕度、中度、重度溶血組HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的測定值與原血清組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。

3 討論

輸血安全是全社會廣泛關注的重要問題之一， 獻血者安全篩查方法的選擇關乎患者感染經輸血傳播疾病的風險， 因此， 國家高度重視獻血者經血源傳播性疾病的篩查， 明確規定了其檢測項目及檢測方法， ELISA仍然是此類檢查的主體方法。該方法在臨床應用已有幾十年的歷史， 具有成本低廉、穩定性較好、操作相對簡單、可實現批量自動化檢測等優點， 但文獻資料顯示也有鉤狀效應（HOOK效應）引起的假陰性、非特異反應、檢測時間長、易交叉污染引起的假陽性和靈敏度較低、檢測窗口期時間較長、容易導致假陰性等問題[5]。尤其是溶血標本對ELISA技術有明顯的影響， 主要原因是因其游離血紅蛋白（Hb）具有過氧化物酶活性， 與辣根過氧化物酶作用相似， 可以催化底物顯色導致假陽性結果[6， 7]。

化學發光法引入于20世紀90年代， 是將化學發光或生物發光體系與免疫反應相結合， 用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術。其檢測原理與放射免疫（RIA） 和酶免疫（EIA） 相似， 不同之處是借助發光底物自身的發光強度直接進行測定[8]， 測得的光量子數和待測樣本中的抗原/抗體濃度成正比， 可用于定性和定量/半定量測定， 其檢測原理上與ELISA不同， 不受游離Hb中類過氧化物酶活性的影響， 不產生顏色反應而干擾檢測結果。與ELISA 相比， 化學發光技術是異相免疫分析， 抗原抗體能夠高效結合；靈敏度可達10～22 mol/L；線性范圍寬， 其發光強度在4～6個量級之間， 與測定物質濃度間呈線性關系；分析方法簡便快速， 絕大多數分析測定均為僅需加入一種試劑（或復合試劑）的一步模式， 操作全自動化；結果穩定、誤差小， 不需要任何光源照射， 免除了各種可能因素（光源穩定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響， 使分析結果靈敏、穩定、可靠；檢測時間短、速度快、可隨時檢測， 特別適應于急診快速檢驗， 因而有取代ELISA檢測的趨勢。endprint

本次實驗研究中， 通過分析溶血標本對化學發光法檢測獻血者傳染病四項指標的實驗結果顯示， 輕度、中度、重度溶血組HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的測定值與原血清組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。表明溶血標本對化學發光法檢測上述四種傳染病檢測結果的準確性并不受影響， 與本方法檢測在理論上保持了一致性， 這在白潔等[8]所報道的相關文章中得到證實， 溶血標本中游離Hb的存在對此類檢測沒有干擾。但從具體每項檢測結果發現， 隨著溶血程度的增加， 檢測值呈現逐漸降低的趨勢， Mann-Whitney U檢驗中Z值為負值， 其差異成一定程度上的負相關， 具體原因不明， 有待進一步研究。

本實驗和文獻檢索結果顯示， 化學發光法對獻血者傳染病四項檢測更具有優勢， 是否可以建議采用化學發光法取代ELISA檢測， 或一次ELISA加一次化學發光法檢測取代現有的兩種ELISA試劑進行初復檢， 供同道們參考。

參考文獻

[1] 朱為剛， 曾勁峰， 李彤.一種化學發光檢測試劑在血液篩查中的應用評估. 中國輸血雜志， 2016， 6（29）：581-583.

[2] 高丹， 李丁. ELISA 法檢測HIV 抗體需注意的問題.中國衛生檢驗雜志， 2005， 15（1）：115.

[3] 李紅葉. ELISA 法檢測HIV 抗體的注意事項.兵團醫學， 2005， 3（1）：58-60.

[4] 賀偉.溶血標本對48項生化檢驗結果的影響.國際檢驗醫學雜志， 2016， 37（15）：2102-2104.

[5] 吳忠華， 羅鵬， 呂沁風. HIV 實驗室檢測及其研究進展.中國國境衛生檢疫雜志， 2009， 32（4）：285-292.

[6] 王雪梅， 李代渝， 江靈，等. 溶血對ELISA與化學發光免疫檢測HIV抗體的影響. 現代檢驗醫學雜志， 2014， 29（2）：94-96.

[7] 張利泉， 楊杰， 孟淑欣. 溶血對ELISA方法檢測HIV抗體的影響. 中國衛生檢驗雜志， 2008， 18（10）：2161-2162.

[8] 白潔， 何靈， 周建，等. 傳染病四項不同檢測方法的臨床應用價值對比分析. 標記免疫分析與臨床， 2016， 23（6）：688-690.

[收稿日期：2017-03-17]endprint