壯藥扁擔(dān)藤薄層色譜鑒別研究

甄漢深 蔣蘭蘭 丘 琴 陳明偉 許玉華

廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001

壯藥扁擔(dān)藤薄層色譜鑒別研究

甄漢深 蔣蘭蘭 丘 琴*陳明偉 許玉華

廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001

目的：建立壯藥扁擔(dān)藤的薄層色譜定性鑒別方法。方法：采用薄層色譜法，分別對(duì)壯藥扁擔(dān)藤藥材根、莖、葉部位的粉末進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。結(jié)果：在相同的提取和鑒別條件下，壯藥扁擔(dān)藤的薄層色譜鑒別分離效果良好。結(jié)論：該方法可用于壯藥扁擔(dān)藤的鑒別。

壯藥扁擔(dān)藤；薄層色譜；鑒別

壯藥扁擔(dān)藤來源于葡萄科崖爬藤屬植物扁擔(dān)藤Tetrastigmaplanicaule(Hook.f.)Gagnep.，為藤本植物[1-2]，全株均可藥用。其主要分布在廣西等地，在廣西壯族民間常用于臨床。其味辛、酸，性平，歸肝經(jīng)，主要用于治療風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、腰肌勞損、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥[1-7]；壯醫(yī)認(rèn)為其具有祛風(fēng)毒、除濕毒、通龍路、火路之功效，用于治療發(fā)旺(痹病)、兵吟(筋病)、林得叮相(跌打損傷)、麻邦(半身不遂)等癥[1]。對(duì)于扁擔(dān)藤生藥學(xué)的研究，筆者已有研究報(bào)道[3]。本文對(duì)扁擔(dān)藤薄層色譜鑒別進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 紫外燈(力揚(yáng)企業(yè)有限公司)。

1.2 材料 薄層層析硅膠G(青島海洋化工廠)；所用試劑均為分析純。原兒茶酸(批號(hào)：110809-201205，中國食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，純度98%)；香草酸(批號(hào)：110776-200402，中國食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，純度98%)。

實(shí)驗(yàn)所采用藥材均為廣西境內(nèi)10個(gè)不同地區(qū)的扁擔(dān)藤藥材，經(jīng)廣西一心藥業(yè)馬利飛副主任中藥師鑒定均為葡萄科崖爬藤屬植物扁擔(dān)藤Tetrastigmaplanicaule(Hook. f.)Gagnep.，見表1。分別研成粉末，干燥后備用。

表1 不同產(chǎn)地的扁擔(dān)藤藥材

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備 取1號(hào)扁擔(dān)藤莖藥材粉末約3g，加入30mL甲醇-0.5%冰醋酸溶液(75:25)回流提取2h，過濾，濾液蒸干至無醇味，用乙酸乙酯溶液萃取5次(10mL每次)，將乙酸乙酯萃取的溶液合并，蒸干，最后用甲醇溶液定容至2mL，作為供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液制備 文獻(xiàn)記載，扁擔(dān)藤中含有原兒茶酸和香草酸這兩種成分，且與臨床應(yīng)用中抗炎作用有關(guān)[2,4]。取原兒茶酸、香草酸對(duì)照品各0.55mg置于5mL的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度線，制成每1mL含0.11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 薄層板的點(diǎn)樣及展開方法 用玻璃毛細(xì)管吸取純甲醇試劑做空白樣品1號(hào)，再吸取供試品及對(duì)照品溶液各8μL和2μL于同一塊硅膠G薄層板(按照2010年《中華人民共和國藥典》中記錄的方法鋪板)上，待溶劑揮干后用相宜的展開劑系統(tǒng)進(jìn)行展開30min，自然晾干，用相應(yīng)的顯色劑進(jìn)行顯色即可。

2.4 顯色劑的選擇 通過比較碘顯色、10%硫酸乙醇顯色、溴甲酚綠顯色、2%鐵氰化鉀-1%三氯化鐵(均按照2010年《中華人民共和國藥典》中的標(biāo)準(zhǔn)配制)等顯色劑，結(jié)果顯示2%鐵氰化鉀-1%三氯化鐵顯色的薄層板的斑點(diǎn)清晰，無邊緣效應(yīng)及拖尾現(xiàn)象，因此選擇2%鐵氰化鉀-1%三氯化鐵顯色效果最好。見圖1-4。

2.5 展開劑系統(tǒng)的選擇 根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010年版一部(附錄VIB)薄層色譜法，可知吸取供試品溶液8μL，對(duì)照品溶液2μL點(diǎn)于硅膠G薄層板上，分別以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(12：6：1)、氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)、氯仿-甲醇-甲酸(12：2：1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(12：6：1)、甲苯-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(16：1：4：1.5)等多個(gè)展開劑系統(tǒng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)為展開劑時(shí)，分離效果好，斑點(diǎn)圓整，Rf值適合。見圖5-9。

2.6 薄層色譜條件的確定 用硅膠G薄層板(20cm×10cm)，分別吸取供試品溶液8μL，對(duì)照品溶液2μL點(diǎn)于此板上，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)為展開劑，飽和15分鐘后進(jìn)行展開30min，再用2%鐵氰化鉀-1%三氯化鐵為顯色劑。薄層板展開后自然晾干、顯色，斑點(diǎn)在日光下可見。

3 扁擔(dān)藤根、莖和葉藥材的薄層鑒別

按照2.1項(xiàng)下的方法，分別制備根、莖、葉3個(gè)部位10個(gè)不同的樣品，得30份供試品溶液，再根據(jù)2.6項(xiàng)下所得出的薄層色譜條件進(jìn)行展開，得圖10 至12。

4 討論

4.1 展開系統(tǒng)選擇 壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(第二卷)中記載了薄層鑒別的展開劑系統(tǒng)為二甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20：4：0.5)和提取方法[1]。在實(shí)驗(yàn)中采用后分離效果不好，尤其是香草酸基本無法分離，后將二甲苯更換成了甲苯，實(shí)驗(yàn)結(jié)果依然不理想。繼而將甲酸變?yōu)楸姿岵⒄{(diào)整了比例，仍然無法分離且冰醋酸使得斑點(diǎn)的拖尾增加。因此，將甲苯換成氯仿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明此展開劑不適用于扁擔(dān)藤根、莖、葉藥材的薄層分離，為此又進(jìn)行了比例的調(diào)整，最終找出了最佳展開劑比例為氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)，其對(duì)扁擔(dān)藤根、莖、葉藥材中的原兒茶酸和香草酸的薄層分離效果好。

4.2 試劑的配制 在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，不同試劑極性大小差異，要考慮其相似相容性的原理，因此要注意試劑配制的先后問題，否則會(huì)出現(xiàn)分層、拖尾、分離度差、邊緣效應(yīng)等現(xiàn)象，將會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)中極性大的溶劑先配制，酸溶劑后配制，揮發(fā)性強(qiáng)的溶劑后配制，將所有試劑依次加入，待飽和后無分層、無顏色變化、無化學(xué)反應(yīng)為最佳展開溶劑，故本實(shí)驗(yàn)的配制順序是乙酸乙酯、甲酸、丙酮、氯仿。另外，展開劑系統(tǒng)飽和時(shí)間的長短及展開時(shí)間的長短也會(huì)影響分離效果、拖尾、Rf值大小及邊緣效應(yīng)等，對(duì)實(shí)驗(yàn)中正確的展開劑系統(tǒng)的選擇影響較大，因此必須要固定其二者的時(shí)間為15min和30min才可以進(jìn)行展開劑系統(tǒng)、顯色劑的選擇。另外，有強(qiáng)酸性的甲酸留在板上，會(huì)破壞其顯色劑。綜上，待板可自然晾干或者暖風(fēng)吹干，所有的殘留溶劑均揮發(fā)后，再進(jìn)行顯色為最佳。

[1]廣西壯族自治區(qū)食品監(jiān)督管理局編.壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(第二卷)[M].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2011:226.[2]邵加春，何翠紅，雷婷，等.瑤藥扁擔(dān)藤化學(xué)成分的研究[J].中國藥學(xué)雜志，2010,21(45):1615-1617.

[3]甄漢深，梁曉樂，丘琴，等.壯藥扁擔(dān)藤的性狀及顯微鑒別[J].中藥材，2013，36(6)：900-902.

[4]覃迅云，羅金裕，高志剛，中國瑤藥學(xué)[M].北京：民族出版社，2002: 141.

[5]李經(jīng)緯，余瀛鰲，歐永欣，等.中醫(yī)大辭典[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1995:1343.

[6]賈敏如，李星煒.中國民族藥志要[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005:398.

[7]《中藥辭海》編寫組.中藥辭海(第二卷)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1996:1840.

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3.本刊誠征民族醫(yī)藥、中醫(yī)藥、中西醫(yī)結(jié)合相關(guān)研究文章。

Study on Identification of Thin Layer Chromatography ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep

ZHEN Hanshen JANG Lanlan QIU Qing*CHEN Mingwei XU Yuhua

Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001，China

Objective The method of qualitative identification of thin layer chromatography ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep. Methods The powder of root, stem and leaf was tested by thin layer chromatography, respectively, ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep. Results Under the same extraction and identification conditions, the thin layer chromatography ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep.was effective.Conclusion There are significant differences in the content ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep.

Tetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep;TLC; Identification

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項(xiàng)(GZBZ14-07)、壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心(桂教科研[2013]20號(hào))、廣西壯瑤藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(桂科基字[2014]32號(hào))、廣西重點(diǎn)學(xué)科壯藥學(xué)(桂教科研[2013]16號(hào))、廣西八桂學(xué)者中藥創(chuàng)新理論與藥效研究(J13162)的項(xiàng)目資助。

甄漢深(1959-)，男，博士生導(dǎo)師，教授，研究方向?yàn)樗帉W(xué)和中藥學(xué)的教學(xué)和科研工作。E-mail：8zhen@163.com

丘琴(1983-)，女，博士研究生，副教授，研究方向?yàn)樗帉W(xué)和中藥學(xué)的教學(xué)和科研工作。E-mail：12031983@163.com

R284.1

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1007-8517(2017)15-0027-03

2017-05-25 編輯：程鵬飛)