精子DNA完整率對卵胞漿內單精子注射術結局的影響

方 東

(洛陽市婦女兒童醫療保健中心生殖醫學研究所，河南 洛陽 471000)

精子DNA完整率對卵胞漿內單精子注射術結局的影響

方 東

(洛陽市婦女兒童醫療保健中心生殖醫學研究所，河南 洛陽 471000)

目的 探討精子DNA完整率對卵胞漿內單精子注射術(ICSI)結局的影響。方法 選取行ICSI治療的50對不孕不育夫妻，采用DNA吖啶橙染色法(AOT)對精子DNA完整性進行分析。以精子DNA碎片指數(DFI)<15%者為低DFI組(n=31)，DFI>30%者為高DFI組(n=19)，觀察精子DNA完整率對ICSI結局的影響。結果2組受精率比較差異無統計學意義(P>0.05)，高DFI組早期卵裂率、優質胚胎率及妊娠率顯著高于低DFI組(P<0.05)。結論 低精子DNA完整率對ICSI的早期卵裂率、胚胎發育以及妊娠率具有不良的影響，因此在行ICSI術前首先應評估精子DNA完整性。

卵胞漿內單精子注射術； 精子； DNA完整率； 胚胎質量

精子DNA損傷受多種因素影響，藥物與放化療、生殖道炎癥、睪丸部高溫以及激素水平等均是其常見因素，精子DNA損傷是導致不孕不育發生的新的影響因素[1]。卵胞漿內單精子注射術(ICSI)為患者生育帶來希望，其可通過人工受精提高受精率，使其順利妊娠，但相關研究顯示[2]，目前我國ICSI成功率僅為30%，且治療費用高，術后不良妊娠結局多，從而很大程度上限制了輔助生殖技術的應用，同時臨床僅通過常規精液分析，并不能對男性生育能力和不育原因做出判斷[3]。因此本研究主要通過ICSI治療的男方精子DNA完整性損傷及精子DNA片段指標的研究，觀察精子DNA完整率情況對ICSI結局的影響，將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年6月至2016年6月于洛陽市婦女兒童醫療保健中心行ICSI的50對不孕不育夫妻為研究對象。納入標準：1)具有不孕不育情況，男性病理檢查結果顯示少精或無精，女方經病理以及B超檢查顯示卵巢功能正常；2)女性年齡≤檢查歲；3)簽訂知情同意書并積極配合者。排除標準：1)不符合上述納入標準者；2)女方無輸卵管積水或其他影響研究結果的疾病；3)不能完整完成本研究者。根據DNA吖啶橙染色法(AOT)對患者的精子進行檢測，分析精子DNA的相關情況，以DNA碎片指數(DFI)<15%者為低DFI組(31例)；DFI>30%者為高DFI組(19例)。

1.2 治療方法

1.2.1 精子采集及完整率檢測

2組男性患者均清潔外陰并手淫取精，將精子置于無菌容器內，離心取其底部沉淀，加入COOK精子洗滌液3 mL洗滌2次并重新離心，調整精子密度涂片觀察，將數滴吖啶橙染液對玻片進行染色5 min，運用40倍熒光顯微鏡觀察精子整體情況并進行分析，正常的雙鏈DNA精子呈綠色熒光，變性或斷裂者為紅色或橙色，統計各種顏色的比例，得出DFI。

1.2.2 ICSI過程

使用促性腺激素促進女方排卵，使用后檢測卵泡發育，當卵泡直徑>18 cm時取卵并在培養箱中繼續培養。卵子成熟后進行ICSI操作：去除卵子卵丘結構，選擇MⅡ卵進行顯微注射，觀察受精卵的受精情況、卵裂情況、并選擇性移植優質胚胎，于移植半月后行尿常規檢查，結果顯示為陽性者20 d后行B超檢查，觀察子宮內是否有孕囊或胎心搏動，觀察妊娠情況。

1.2.3 觀察項目

觀察并記錄2組妊娠數、受精數、早期卵裂數以及優質胚胎數。以卵裂球數≥2為早期卵裂胚，第3天觀察胚胎，卵裂球數≥胚胎6的Ⅰ級或Ⅱ級為優質胚胎。其中受精率=受精卵數/補救ICSI卵數×100%，卵裂率=卵裂數/受精總數×100%，優質胚胎率=優質胚胎數/卵裂數×100%，妊娠率=妊娠周期數/總移植周期數×100%。

1.3 統計學方法

使用SPSS 17.0軟件進行統計、分析，計量資料采用t檢驗；計數資料采用卡方檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組一般資料對比

2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

組別n男方年齡/歲女方年齡/歲睪丸體積V/mLFSH/(U·L-1)獲卵數/個低DFI組3128.56±3.3625.85±3.0531.56±3.597.026±0.11410.15±0.171高DFI組1929.45±3.5226.16±3.1432.12±3.757.152±0.1259.462±0.158t1.2190.4350.8250.2180.587P0.2290.6650.4130.8280.560

2.2 2組ICSI相關結局比較

2組患者的受精率比較差異無統計學意義(P>0.05)，低DFI組早期卵裂率、優質胚胎率以及妊娠率顯著高于高DFI組(P<0.05)，見表2。

表2 2組ICSI相關結局比較 %(n/n)

3 討論

精子DNA損傷主要表現為DNA雙鏈斷裂以及單鏈形成，其發生機制與多種因素相關。精子發生過程中可因凋亡異常啟動異常細胞凋亡程序，或因氧自由基過多導致與DNA結合，使DNA鏈的斷裂[4]。精子DNA損傷是男性不育和女性受孕率降低的重要原因之一[5]。有研究[6]顯示，人類胚胎早期發育受父本效應影響，其機制是啟動微弱轉錄活性。ICSI主要通過將卵子吸入專業吸管中進行固定，于顯微鏡下將載有單一精子的空心針插入細胞之中并注射精子，此過程顯示精子DNA損傷對受精的影響不大，但胚胎開始發育后，胚胎碎片將增多，阻滯卵裂球發育，導致胚胎發育不佳，妊娠率較低[7]。

精子DNA完整率是生殖醫學研究領域的熱點、難點。精子完整率是評價精子功能狀態的重要指標，相比傳統的精液常規、精子形態檢查等更為穩定[8]。本研究結果顯示，2組受精率差異不大，但低DFI組早期卵裂率、優質胚胎率、妊娠率均明顯高于高DFI組(P<0.05)，提示精子DNA完整率與ICSI結局聯系密切，當DFI>30%時妊娠率將大大降低，妊娠結局也受到一定影響，提示DNA碎片可影響胚胎發育，選取DFI較低者進行人工受精，可有效提高臨床妊娠成功率。

但由于本研究受資料、地域環境、方法、操作過程等條件限制，可能會存在統計數據不準確或片面性等不足，還需進行大型專業研究來佐證。

[1] 何泳志,李大文,肖鑫,等.精子DNA完整率和精子頂體完整率及反應率對卵胞漿內單精子注射術結局的影響[J].廣東醫學,2015,53(5):729-731.

[2] 陸金春.精子DNA損傷的相關因素研究進展[J].中華男科學雜志,2015,21(8):675-680.

[3] Wu Y,Kang X,Zheng H,et al.Effect of paternal age on reproductive outcomes of intracytoplasmic sperm injection[J].PLoS One,2016,11(2):e0149867.

[4] 徐秀民,于德新,張志強,等.男性不育患者精子DNA損傷與非整倍體精子的研究[J].安徽醫科大學學報,2013,56(11):1355-1359.

[5] Ni K,Spiess A N,Schuppe H C,et al.The impact of sperm protamine deficiency and sperm DNA damage on human male fertility:a systematic review and meta-analysis[J].Andrology,2016,4(5):789-799.

[6] 何泳志,李大文,成俊萍,等.精子DNA完整率、精子頂體完整率及反應率對補救卵泡漿內單精子注射術的影響[J].南方醫科大學學報,2016,36(1):140-144.

[7] 肖鑫,李大文,馮剛,等.精子質量對不孕不育患者輔助生殖技術選擇的指導作用[J].山東醫藥,2016,60(4):19-21.[8] Razi M,Sadrkhanloo R A,Malekinejad H,et al.Varicocele time-dependently affects DNA integrity of sperm cells:evidence for lower in vitro fertilization rate in varicocele-positive rats[J].Int J Fertil Steril,2011,5(3):174-185.

(責任編輯：羅芳)

2017-01-12

R714.8

A

1009-8194(2017)07-0055-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.07.021