簡易細胞塊制作法在玻璃體淀粉樣變性診斷中的應用

陳 輝，梁 艷，饒 秋，石群立，周曉軍，馬恒輝

簡易細胞塊制作法在玻璃體淀粉樣變性診斷中的應用

陳 輝，梁 艷，饒 秋，石群立，周曉軍，馬恒輝

眼球；玻璃體；淀粉樣變性；細胞塊；剛果紅；甲基紫；病理診斷

人眼球玻璃體淀粉樣變性是一種罕見的疾病，國內外文獻中僅見少數病例報道[1]。其主要癥狀是眼前黑影或羽毛狀飄動并伴有視力進行性緩慢下降直至完全喪失，眼部檢查可見玻璃體混濁，其間雜有灰色顆粒狀物，而附著于晶狀體后囊的“足盤樣”混濁有助于診斷[2]。目前醫學界認為其可能是由于分子構象異常導致難溶性的淀粉樣物質在細胞外的異常沉積所致，有些玻璃體混濁可能是全身病變的早期改變，而有些很可能是唯一癥狀[1]。對于散在、絮狀漂浮以及少量不定形的病變玻璃體，如果按照常規組織處理方法或普通細胞學方法均難以獲得滿意的病理制片效果，給病理醫師的正確診斷帶來一定的難度。為此，本科室經過簡單處理，把散在、絮狀漂浮以及少量不定形的病變玻璃體，制作成簡易細胞塊，并在此基礎上行甲基紫染色和甲醇剛果紅染色，就能很好的解決上述問題，從而為正確的病理診斷打下了良好的基礎[3]。現將玻璃體簡易細胞塊制作法介紹如下。

1 材料與方法

1.1 耗材試劑 一次性試管(50 mL)，一次性吸管(10 mL)，擦鏡紙，石蠟(熔點56～58 ℃)。10%中性福爾馬林、二甲苯、無水乙醇和95%乙醇，均為分析純，500 mL，購自南京化學試劑公司。1%甲基紫水溶液。1%醋酸水溶液。甲醇剛果紅：剛果紅0.5 g，甲醇80 mL，甘油20 mL。堿性乙醇分化液：氫氧化鉀0.2 g，80%乙醇100 mL。

1.2 儀器設備 低速離心機，LEICA ASP300S全自動脫水機，SAKURA Tissue-TeK TEC包埋機，LEICA RM2235切片機，Dako Coverstainer染色封片機。

1.3 組織標本 眼球玻璃體渾濁液及沖洗液。樣本量最好在50 mL以上。新鮮標本應立即加入樣本量5～10倍的10%中性福爾馬林中固定。

1.4 方法 將標本靜置10～20 min，經低速離心機2 000 r/min離心5 min，棄上清留沉淀物，用藥匙刮取沉淀物到經95%乙醇浸泡的顯微鏡擦鏡紙上，用顯微鏡擦鏡紙包好后在上機脫水之前先用10%中性福爾馬林預固定2 h后，再放入全自動脫水機中行后續常規脫水、透明、浸蠟處理約12 h[3-4]。脫水后浸入石蠟包埋機包埋成細胞塊，再將細胞塊切成3 μm厚的切片，65 ℃烘干1 h，防止組織脫片[5]。HE染色、甲基紫染色和甲醇剛果紅染色具體染色操作步驟均參考《臨床技術操作規范-病理學分冊》中的方法進行[6]。

2 結果

光鏡下淀粉樣物質呈淺紅色，可見片狀嗜伊紅無定形物質沉積，呈結節狀或彌散分布于結締組織內或血管周圍，界限較清楚(圖1)。甲基紫染色后淀粉樣物質呈淺紅色，其他組織呈紫色(圖2)。甲醇剛果紅染色后淀粉樣物質呈磚紅色，背景不著色，亦可略帶黃色或淡紅色，纖維排列整齊，沿一定方向走行(圖3)。在偏光鏡下觀察淀粉樣物質呈黃綠色的雙折光(圖4)。

3 討論

玻璃體位于晶狀體與視網膜之間，是由蛋白質(可能一部分是膠原)形成的小纖維網狀結構做支架，內中充以玻璃樣酸而形成的凝膠體，其具有一定的稠度和彈性，從而能保持一定的形體和某種程度的伸縮性，若是玻璃狀體因某種原因(如老年變性、視網膜疾病、葡萄膜炎等等)發生變性，導致玻璃體混濁，往往難以恢復。其主要癥狀是眼前黑影或羽毛狀飄動并伴有視力進行性緩慢下降直至完全喪失，眼部檢查可見玻璃體混濁，其間雜有灰色顆粒狀物。由于玻璃體在制作標本時高度收縮，故一般在常規取材染色后無法看到，而把它制作成簡易細胞塊就能很好的提供給我們所需要的相關病理檢查。

由于玻璃體病變的組織標本是散在、絮狀漂浮的不定形物，在制作細胞塊前一定要進行離心處理。在上機脫水之前先用10%中性福爾馬林預固定2 h，再進行常規脫水等后續處理，細胞塊浸蠟要徹底，溫度65～70 ℃，切片厚度不超過3 μm。采用上述方法制作的細胞塊更加完整貼片不易碎，染色時無背景著色，細胞清晰，使絕大多數常規細胞涂片不能解決的方法均能通過簡易細胞塊切片進行輔助診斷，有效地彌補了普通細胞涂片及常規制片的不足，為病理診斷提供了有力的保障。

①②③④

圖1 細胞塊切片：玻璃體淀粉樣變性，HE染色 圖2 細胞塊切片：玻璃體淀粉樣變性，甲基紫染色 圖3 細胞塊切片：玻璃體淀粉樣變性，甲醇剛果紅染色 圖4 淀粉樣物質呈黃綠色的雙折光，甲醇剛果紅染色(偏光鏡觀察)

[1] Doft B H, Machemer R, Skinner M,etal. Pars plana vitrectomy for vitreous amyloidosis[J]. Ophthalmology, 1987,94(6):607-611.

[2] 石一寧,胡 笳, 李 靜, 等. 家族性玻璃體淀粉樣變性患者甲狀腺激素結合蛋白基因突變研究[J]. 中華眼底病雜志, 2011,27(5):482-484.

[3] 王永生, 李玉紅, 任玉波. 介紹一種新的細胞塊制作方法[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2006,22(1):99.

[4] 馬恒輝, 周曉軍. 如何提高組織處理的技術水平[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2011,27(4):415-418.

[5] 梁英杰, 凌啟波, 張 威. 臨床病理學技術[M]. 北京: 人民衛生出版社, 2011:8-9.

[6] 中華醫學會. 臨床技術操作規范-病理學分冊[M]. 北京:人民軍醫出版社, 2012:150-151.

時間：2017-8-20 15:27 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170820.1527.027.html

解放軍南京總醫院病理科，南京 210002

陳 輝，男，技師。E-mail: 753068209@qq.com 馬恒輝，男，副主任技師，通訊作者。E-mail: mafanbushao@163.com

R 446; R 776

B

1001-7399(2017)08-0931-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.08.027

接受日期：2017-03-24