消化后AB-PAS染色法在黏液染色中的應用

陳敬文，張 偉，王天媧，程 俊，羅金風

消化后AB-PAS染色法在黏液染色中的應用

陳敬文1，張 偉2，王天媧1，程 俊1，羅金風1

消化后AB-PAS；黏液染色；特殊染色

AB-PAS是一種常見的特殊染色法，其能較好地顯示中性黏液和酸性黏液，但有時組織內含有的糖原也會顯示，且無法區分中性黏液，從而影響染色結果的判斷。本科室根據糖原可被淀粉酶分解破壞的原理[1]，在染色前用淀粉酶消化切片中的糖原，再進行AB-PAS染色，取得良好的效果，現介紹如下。

1 材料與方法

1.1標本來源收集深圳市人民醫院病理科已知AB-PAS染色陽性標本，每份標本石蠟切片2張，厚4 μm，分為兩組：(1)常規AB-PAS染色(對照組)，(2)消化后行AB-PAS染色(實驗組)。

1.2試劑配制(1)淀粉酶消化液：淀粉酶1 g，蒸餾水100 mL。(2)阿爾辛藍染色液：阿爾辛藍8GS 1 g，冰醋酸3 mL，蒸餾水97 mL。(3)3%醋酸溶液：冰醋酸3 mL，蒸餾水97 mL。(4)0.5%過碘酸氧化液：過碘酸0.5 g，蒸餾水100 mL。(5)Schiff染色液：堿性復紅1 g，1N鹽酸20 mL，偏重亞硫酸鈉1 g，重蒸餾水200 mL[2]。

1.3方法對照組AB-PAS染色法：(1)常規石蠟切片，脫蠟至水。(2)蒸餾水洗，3%醋酸水溶液3 min。(3)阿爾辛藍染色液30 min。(4)蒸餾水洗，過碘酸氧化10 min。(5)自來水沖洗，蒸餾水洗，Schiff染色液15 min。(6)流水沖洗2～5 min，蒸餾水洗。(7)95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固[3]。

實驗組AB-PAS染色法：(1)常規石蠟切片，脫蠟至水。(2)蒸餾水洗，淀粉酶消化液30 min。(3)蒸餾水洗，3%醋酸水溶液3 min。(4)阿爾辛藍染色液30 min。(5)蒸餾水洗，過碘酸氧化10 min。(6)自來水沖洗，蒸餾水洗，Schiff染色液15 min。(7)流水沖洗2～5 min，蒸餾水洗。(8)95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2 結果

對照組AB-PAS染色：中性黏液物質及糖原均呈紅色，酸性黏液物質呈藍色(圖1)。實驗組AB-PAS染色：中性黏液物質呈紅色，酸性黏液物質呈藍色，糖原已被完全消化(圖2)。

①②

圖1對照組AB-PAS染色：胃癌組織的中性黏液和糖原呈紅色，酸性黏液呈藍色圖2實驗組AB-PAS染色：胃癌組織的中性黏液呈紅色，酸性黏液呈藍色

3 討論

正常黏膜上皮細胞可分泌黏液，分別為中性黏液和酸性黏液，在HE染色中兩者黏液物質無法區分，常需用黏液物質染色區分；病理狀態下，結締組織、心肌、腎臟等一些實質性器官，也可出現黏液水腫、黏液變性和黏蛋白增多的現象，也需用黏液物質染色區分和證明；在一些腫瘤的診斷和研究方面，也常常需要黏液染色進行觀察和鑒別[4]。在各種黏液物質的特殊染色中，AB-PAS是一種常用的染色方法，它利用阿爾辛藍和PAS的共同反應，能較好的顯示中性黏液和酸性黏液：阿爾辛藍屬于堿性染料，染料分子中帶正電荷的鹽鍵和酸性黏液物質中帶負電荷的酸性基團結合呈藍色；中性黏液物質與過碘酸-無色品紅起反應，生成紅色復合物。但PAS在顯示中性黏液的同時，如組織內含有糖原，則糖原也會顯示出來，且和中性黏液混合在一起無法區分，影響結果判讀，有時需另加做1張消化后PAS才能加以區分和證實。本組采用消化后的AB-PAS染色，用淀粉酶或唾液來消化糖原，經兩者消化的切片染色結果并無明顯差異，具體使用哪種方法進行消化糖原，可根據自身情況進行選擇：(1)淀粉酶使用方便，效果理想，但存放過久或保存不當，導致酶的活性失活，對糖原的消化作用喪失。因此，用淀粉酶染色時均需經陽性對照試驗后才能使用。(2)唾液的消化能力較強，效果較好，但獲取過程稍嫌復雜，每次收集唾液前先用清水漱口，以清除口腔內的各種殘渣，然后用燒杯收集唾液，以玻璃棒攪拌均勻，加9倍蒸餾水稀釋，充分攪勻后使用[5]。待充分消化掉組織內的糖原后，再進行阿爾辛藍和PAS染色，這樣染色時就不會出現糖原，對中性黏液及酸性黏液能更好的顯示，不會對結果的判讀帶來影響，也無需再加做消化后的PAS加以證實和區分，既節省了試劑也提高了工作效率。

[1] 龔志錦，詹镕洲. 病理組織制片和染色技術[M].上海:科學技術出版社,1994(1):155.

[2] 梁英杰，凌啟波，張 威. 臨床病理學技術[M].北京:人民衛生出版社, 2011(1):225-230.

[3] 龔志錦，詹镕洲. 病理組織制片和染色技術[M].上海:科學技術出版社,1994(1):158-160.

[4] 祁珊珊. 過碘酸-Schiff(PAS) 染色方法的改良及其在病理診斷中的應用[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2016,32(7):825-826.

[5] 凌啟波. 實用病理特殊染色和組化技術[M]. 廣州：廣東高等教育出版社,1989(1):209.

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1深圳市人民醫院病理科 5180202廣州軍區廣州總醫院病理科，廣州 510010

陳敬文，男，主管技師。E-mail： a780916@163.com

R 446

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1001-7399(2017)07-0817-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.030

接受日期：2017-05-12