濾過膜與擦鏡紙雙層包埋法在細胞塊制作中應用

程新宇，周成美，趙天翔，孫 虓，欒 嵐，吳 非，王翠芳

濾過膜與擦鏡紙雙層包埋法在細胞塊制作中應用

程新宇1，周成美2，趙天翔3，孫 虓1，欒 嵐1，吳 非1，王翠芳1

濾過膜；雙層包埋；細胞塊

隨著分子生物學飛速發(fā)展，靶向治療在腫瘤治療中被廣泛應用。傳統(tǒng)脫落細胞學制作方法，不能滿足臨床需求。如何在量少的標本中盡可能大量收集細胞，減少細胞丟失在細胞塊制作中顯得尤為重要。本科室在實踐工作中將膜式液基薄層制作過濾器上的濾過膜(簡稱濾過膜)用刀裁剪，放在包埋時裁好的擦鏡紙上，對收集的細胞沉淀物進行雙層包埋，形成細胞塊。該方法操作簡便，最大限度收集細胞，有利于惡性腫瘤類型的鑒別及靶向治療的開展，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1標本與材料 收集沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院病理科2013～2016年各臨床科室送檢的脫落細胞學標本，包括胸水、腹水、心包積液及各種沖洗液。

1.1.2試劑與儀器 單克隆抗體一抗(即用型)CK7購自福州邁新公司，所有標本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定。濾過膜，中佳SC-3612低速離心機，Leica-Asp300s全自動脫水機，Leica-HM315R石蠟切片機，Leica-G-1140(C)石蠟包埋機，VENTANA-BenchMark XT全自動免疫組化儀。

1.2方法

1.2.1傳統(tǒng)方法離心 將送檢標本室溫靜置15 min，取底部液體200 mL，分別裝入50 mL塑料尖底離心管4瓶，以800g離心10 min，棄去上清液，留下細胞沉淀物。在其中1瓶50 mL塑料尖底離心管底部取2滴細胞沉淀物，制備2張細胞傳統(tǒng)涂片，HE染色。

1.2.2乙醇固定單層包埋法 (1)傳統(tǒng)方法得到的細胞沉淀物，用95%乙醇10 mL固定6 h，入離心機800g離心10 min，吸去上清，留下細胞沉淀物；(2)用吸管挑出細胞沉淀物，放入裁好擦鏡紙上，將擦鏡紙對折包裹，入包埋盒；(3)按常規(guī)組織塊處理，固定、脫水、浸蠟、包埋、切片、HE染色及免疫組化SP法染色

1.2.3濾過膜雙層包埋法 (1)傳統(tǒng)方法得到的細胞沉淀物，經(jīng)10%中性福爾馬林3 mL固定1 h，入離心機800g離心10 min，吸去上清，留下細胞沉淀物；(2)用刀將濾過膜裁下，對折壓緊后再對折壓緊，形成一個敞口錐形，放在包埋盒的擦鏡紙上(圖1)；(3)將準備好的細胞沉淀物用吸管挑出，放在敞口錐形濾過膜錐底，再用裁好擦鏡紙包裹，放入包埋盒中(圖2)；(4)按常規(guī)組織塊處理，固定、脫水、浸蠟、包埋、切片、HE染色及免疫組化SP法染色。

2 結果

乙醇固定單層包埋法，細胞分散，背景干凈(圖3)；濾過膜雙層包埋法，細胞量較多，細胞聚集，免疫組化SP法染色顯示CK7陽性結果定位準確，背景清晰，易于診斷(圖4)。

①②③④

圖1濾過膜雙層包埋法制作流程圖2細胞沉淀物用吸管挑出，放在敞口錐形濾過膜錐底，再用裁好擦鏡紙包裹圖3乙醇固定單層包埋法(胸水)，細胞分散，惡性圖4濾過膜雙層包埋法(胸水)，細胞量較多，CK7呈陽性，惡性，SP法

3 討論

隨著分子生物學飛速發(fā)展，臨床個體化治療備受患者重視。傳統(tǒng)涂片制作方法的癌細胞檢出率低，重復性差，不能滿足臨床需求。近年脫落細胞學細胞塊制作備受推崇，有報道采用2%～4%瓊脂糖凝膠、石蠟雙重包埋法[1]等制作，終因制作方法復雜難以推廣。如何能最大限度保留細胞，并使散在分布細胞聚集成團，防止細胞沉淀物丟失且操作簡便的制作方法，是病理技術人員探索細胞塊制作的關鍵[2]。

濾過膜原本是膜式液基薄層制作中過濾器的一部分，過濾器直徑2 cm藍色管狀，一端敞口，一端有濾過膜，膜的過濾孔徑0.5 μm，功能是過濾器一端敞口套在機器負壓口吸引帶有保存液的液體標本，液體標本通過濾過孔徑0.5 μm濾過膜時，將液體標本中細胞，收集在濾過膜內、外兩側，解除負壓后制成液基薄片。

本實驗組將過濾器上有濾過功能、濾過孔徑0.5 μm濾過膜，沿直徑2 cm藍色管口裁剪下來，形成直徑為2 cm的濾過膜，對折壓緊后再對折壓緊，形成敞口錐形，放在包埋的擦鏡紙上，離心后得到的細胞沉淀物入敞口錐形濾過膜錐形底，進行雙層包埋。該方法是病理技術上的創(chuàng)新，國內尚未見文獻報道。

在制作細胞塊實驗過程中，推薦使用乙醇固定單層包埋法。但此方法也有不足之處——細胞沉淀物經(jīng)乙醇固定，再用裁好擦鏡紙對折包好，入包埋盒，經(jīng)過固定、脫水、透明、浸蠟，包埋時易與薄薄的擦鏡紙粘在一起，需有經(jīng)驗技術人員細心打開，耗費一定時間。若擦鏡紙質量差，擦鏡紙打開過程中碎裂，導致細胞塊制作失敗。另外，細胞沉淀物大多呈灰白色，與擦鏡紙顏色基本一致，分辨有一定難度，通常會丟失一部分細胞。因此，我們尋找既能與細胞沉淀物一同固定脫水浸蠟，又能使包埋方法簡便，還能防止細胞沉淀物不丟失的新材料。濾過膜高溫塑料材質，過濾孔徑0.5 μm能使液體通過，并能與細胞沉淀物一起固定脫水透明浸蠟，形成蠟塊。濾過膜有韌性，對折壓緊再對折壓緊后，在包埋的擦鏡紙上，會形成敞口錐形，細胞沉淀物放入敞口錐形濾過膜錐形底，起到網(wǎng)住細胞沉淀物作用，防止細胞沉淀物丟失。內層敞口錐形濾過膜是細胞沉淀物的第一道防線，外層包埋的擦鏡紙遇水緊緊粘在一起，是細胞沉淀物的第二道防線。包埋時病理技術人員直接用鑷子撕開擦鏡紙，露出濾過膜，灰白色細胞沉淀物在敞口錐形濾過膜錐形底中，使細胞沉淀物易于尋找收集。該方法簡便且包埋節(jié)省時間，脫落細胞沉淀物得到最大限度收集，易于操作和推廣。

日常工作中將該方法用在膜式液基薄層制作后，臨床再次要求細胞塊制作收到良好效果。在乙醇固定單層包埋法中，我們將乙醇固定細胞沉淀物6 h，改為采用10%中性福爾馬林3 mL固定1 h，節(jié)省制作細胞塊時間。將該方法運用到胃鏡、細針穿刺小標本活檢包埋中，其方法簡便安全且提高了工作效率，有效防止小標本的丟失。

總之，在細胞塊制作中采用濾過膜與擦鏡紙雙層包埋法值得進一步推廣應用。

[1] 黃雅萍，蔡路兵，翟梅娟，等. 胸腹水細胞沉渣包埋技術及應用[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2004,20(1):112-113.

[2] 張 洋，車千紅， 閆祿春. TCT細胞標本保存液及其濾過膜管在胸腹水細胞沉渣提取中的應用[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2004,20(1):1410.

時間：2017-7-18 11:52 網(wǎng)絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1152.031.html

1沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽 1100242錦州醫(yī)科大學第三臨床學院2015級臨床醫(yī)學17班，錦州 1210003沈陽醫(yī)學院基礎醫(yī)學院2013級醫(yī)學檢驗技術專業(yè)1班，沈陽 110020

程新宇，女，碩士，主任技師。Tel：(024)85715736，E-mail：cxy6816@126.com 王翠芳，女，碩士生導師，主任醫(yī)師，教授，通訊作者。 E-mail：1310214448@qq.com

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1001-7399(2017)07-0818-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.031

接受日期：2017-05-20