乳腺浸潤性導管癌中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達及其臨床意義

章青波， 盧玫瑰， 徐寶福， 王 拴， 趙 麗， 周巧霞， 嚴 赫， 王超群， 黃飛駿

乳腺浸潤性導管癌中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達及其臨床意義

章青波1， 盧玫瑰1， 徐寶福1， 王 拴1， 趙 麗1， 周巧霞1， 嚴 赫1， 王超群2， 黃飛駿1

目的探討PI3K-AKT信號通路分子CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其臨床意義。方法應用免疫組化EnVision兩步法檢測73例乳腺浸潤性導管癌組織中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達，分析其與臨床病理特征的關系及表達的相關性。結果CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達與患者年齡、腫瘤大小、組織學分級及淋巴結轉移無明顯相關性。CD44與TAGLN-2表達呈正相關(r=0.311，P=0.007)；TRIM24與TAGLN-2表達呈正相關(r=0.421，P=0.000)；CD44與ER表達呈負相關(r=-0.285，P=0.015)；ER與PR表達呈正相關(r=0.598，P=0.000)。CD44陽性組患者術后5年累積生存率低于CD44陰性組(P=0.002)；ER陽性組患者術后5年累積生存率高于ER陰性組(P=0.026)。結論在乳腺癌中CD44、TRIM24可能通過激活PI3K-AKT信號通路上調TAGLN-2表達，CD44可能通過激活PI3K-AKT信號通路下調ER表達。CD44、ER有望成為預測乳腺浸潤性導管癌患者預后的輔助因子，聯合檢測CD44、ER、PR的表達有助于乳腺浸潤性導管癌治療策略的選擇及優化。

乳腺腫瘤；浸潤性導管癌；CD44；TRIM24；TAGLN-2；ER；PR；臨床病理特征

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，其中70%以上為乳腺浸潤性導管癌[1]。乳腺癌的發生、發展與多種信號通路的異常激活相關，闡明這些信號通路在乳腺癌發生、發展過程中的作用，對乳腺癌的防治有重要意義[2]。PI3K-AKT信號通路與腫瘤細胞的周期、增殖、侵襲、轉移等密切相關，很多腫瘤中均檢測到PI3K編碼基因(PIK3)突變和AKT的活化[3]，其中Luminal B型乳腺癌 PIK3CA基因突變率達29%[4]。研究顯示PI3K-AKT信號通路與乳腺癌密切相關，但其作用機制尚待進一步分析。本文采用免疫組化EnVision兩步法檢測PI3K-AKT通路上游分子CD44、三重基序蛋白24(tripartite motif-containing 24, TRIM24)及下游分子轉膠蛋白-2(transgelin-2, TAGLN-2)、ER、PR在乳腺浸潤性導管癌中的表達，著重探討其與乳腺癌臨床病理特征的關系及意義，以期為乳腺癌的分子靶向治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1臨床資料收集2008年1月～10月徐州醫學院附屬醫院收治的73例乳腺浸潤性導管癌患者，所有組織均經HE染色觀察確診。73例患者均為女性，年齡27～87歲，平均52.3歲。

1.2方法將組織制作成病理組織芯片，4 μm厚切片，免疫組化采用EnVision兩步法，切片脫蠟、復水、高壓熱處理抗原修復、封閉等，具體操作按試劑盒說明書進行。兔抗人CD44單克隆抗體(1 ∶200)購自英國Abcam公司，兔抗人TRIM24單克隆抗體(1 ∶200)、兔抗人TAGLN-2單克隆抗體(1 ∶150)、兔抗人ER單克隆抗體(1 ∶200)、兔抗人PR單克隆抗體(1 ∶200)，均購自美國Proteintech公司；4 ℃孵育過夜，羊抗兔二抗(北京中杉金橋公司)37 ℃孵育1 h，經DAB顯色，蘇木精復染，脫水、透明、封固等。

1.3結果判斷免疫組化結果由兩名病理醫師共同觀察評估，每個標本選擇5個在10×40倍隨機視野下進行觀察。(1)CD44、TRIM24及TAGLN-2陽性判斷：按染色強度評分：0分為無著色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色；按癌細胞染色陽性率評分：無陽性細胞為0分、1%～10%為1分、11%～50%為2分、51%～75%為3分、76%～100%為4分；將兩項得分結果相乘：>3分者為陽性，≤3分者為陰性。(2)ER、PR陽性判斷：細胞核出現明顯的棕黃色顆粒為陽性細胞，陽性細胞率<10%為陰性，≥10%為陽性[5]。

1.4統計學分析所有數據均通過IBM SPSS Statistics 21.0軟件進行統計學分析。采用χ2檢驗分析CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR蛋白表達與乳腺浸潤性導管癌患者年齡、病理組織學分級、腫瘤大小、淋巴結轉移的相關性。采用Pearson或Spearman相關性檢驗分析以上標志物表達之間的相關性。采用Kaplan-Meier法分析CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達對患者術后5年生存率的影響。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達及與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關系73例乳腺浸潤性導管癌組織中蛋白表達：CD44主要表達于胞膜；TRIM24主要表達于胞核；TAGLN-2主要表達于胞質，部分表達于胞核；ER及PR主要表達于胞核。CD44陽性者48例(65.8%)，TRIM24陽性者60例(82.2%)，TAGLN-2陽性者67例(91.8%)，ER陽性者58例(79.5%)，PR陽性者54例(74.0%)。經統計學分析，以上5種蛋白表達在患者不同年齡、不同腫瘤大小、不同組織學分級及淋巴結有無轉移分組之間的差異均無統計學意義(P>0.05，表1)。

2.2CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達與乳腺浸潤性導管癌患者預后的關系Kaplan-Meier生存曲線顯示乳腺浸潤性導管癌組織中CD44陽性組患者術后5年累積生存率低于陰性組，兩組之間差異有統計學意義(P=0.002，圖1A)；ER陽性組患者術后5年累積生存率高于陰性組，兩組之間差異有統計學意義(P=0.026，圖1B)；PR陽性組患者術后5年累積生存率高于陰性組(P=0.091，圖1C)；TRIM24、TAGLN-2表達對不同組患者術后5年累積生存率影響差異無統計學意義(P>0.05，圖1D、E)。

2.3CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達的相關性Pearson/Spearman相關性檢驗發現，CD44與TAGLN-2表達呈正相關(r=0.311，P=0.007)，CD44與ER表達呈負相關(r=-0.285,P=0.015)；TRIM24表達與TAGLN-2表達呈正相關(r=0.421，P=0.000)；ER表達與PR表達呈正相關(r=0.598，P=0.000，表2)。

表2 乳腺浸潤性導管癌中CD44、TAGLN-2、TRIM24、ER、PR表達的相關性

3 討論

PI3K-AKT信號通路與乳腺癌發生、發展密切相關，本實驗選取PI3K-AKT信號通路上游分子CD44、TRIM24及下游分子TAGLN-2、ER及PR，采用免疫組化EnVision兩步法檢測5種蛋白在乳腺浸潤性導管癌中的表達，分析它們的相關性及臨床意義，為進一步闡明PI3K-AKT在乳腺癌發生、發展中的作用奠定理論基礎。

表1 CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達與乳腺浸潤性導管癌臨床病理特征的關系

圖1乳腺浸潤性導管癌中CD44(A)、ER(B)、PR(C)、TRIM24(D)及TAGLN-2(E)表達水平患者預后情況

CD44屬于膜表面糖蛋白，參與細胞黏附、遷移等過程，與乳腺癌淋巴結轉移相關[6]。CD44處于PI3K/AKT信號通路上游，其對腫瘤細胞活動的調節可能通過PI3K/AKT通路實現[7-8]。TRIM24是含表皮生長因子反應成分的反式激活因子，可與PI3K結合并激活PI3K/AKT通路[9]。TAGLN-2屬于骨架蛋白，PI3K-AKT激活后可增加其表達，從而提高腫瘤細胞的侵襲能力[10]。ER和(或)PR陽性乳腺癌患者對激素治療敏感性更高、預后更好，ER、PR陽性與PIK3CA基因突變相關，其中40%的ER陽性乳腺癌患者存在PIK3CA基因突變[3]。Bosch等[11]發現ER是PI3K/AKT下游分子，PI3K抑制劑可促進激素受體陽性乳腺癌患者ER的表達。

本實驗發現CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達與患者年齡、腫瘤大小、癌組織學分級、淋巴結轉移均無顯著相關性。其中CD44表達與淋巴結轉移相關性結果和以往文獻報道不一致，可能與本實驗所選乳腺癌組織皆為乳腺浸潤性導管癌有關，而以往報道包含不同組織病理類型乳腺癌，提示CD44在不同組織病理類型乳腺癌中的作用可能存在差異。本實驗還發現CD44陽性組患者術后5年累積生存率低于陰性組(P=0.002)，提示CD44高表達者預后差；ER陽性組患者術后5年累積生存率高于陰性組(P=0.026)，提示ER高表達者預后較好，該結果與Lin等[12]報道一致。

本組中CD44、TRIM24均與TAGLN-2表達呈正相關，提示CD44、TRIM24可能通過激活PI3K-AKT信號通路上調TAGLN-2的表達。此外，CD44與ER表達呈負相關(r=-0.285，P=0.015)，且與PR表達呈負相關趨勢(r=-0.219，P=0.062)；ER、PR表達呈正相關(r=0.598，P=0.000)，提示CD44可能通過激活PI3K-AKT信號通路下調ER、PR的表達，該結果從反面印證了Bosch等關于PI3K抑制劑促進ER表達的觀點，ER、PR表達的相關性與譚敏華等[13]報道一致。

綜上所述，本實驗結果表明，CD44、TRIM24可能通過PI3K-AKT信號通路上調TAGLN-2的表達，且CD44可能通過PI3K-AKT信號通路下調ER、PR的表達，其具體機制值得進一步分析。在乳腺癌治療中，可以將CD44、ER及ER作為判斷乳腺浸潤性導管癌患者預后的輔助因子，聯合檢測CD44、ER、PR對乳腺浸潤性導管癌患者的預后評估及優化治療策略具有重要的臨床意義。

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ExpressionofCD44,TRIM24,TAGLN-2,ERandPRinbreastinvasiveductalcarcinomaandtheirclinicopathologicsignificance

ZHANG Qing-bo1, LU Mei-gui1, XU Bao-fu1, WANG Shuan1, ZHAO Li1, ZHOU Qiao-xia1, YAN He1, WANG Chao-qun2, HUANG Fei-jun1

(1DepartmentofForensicPathology,WestChinaSchoolofPreclinicalandForensicMedicine,SichuanUniversity,Chengdu610041,China;2DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou221006,China)

PurposeTo study the expression of biomolecules of PI3K-AKT signaling pathway including CD44, TRIM24, TAGLN-2, ER and PR in breast invasive ductal carcinoma, and to explore their clinicopathologic significance.MethodsThe expression of CD44, TRIM24, TAGLN-2, ER and PR in 73 cases of breast invasive ductal carcinoma were detected by immunohistochemistry (IHC) technology. And the relationship between the expression of these biomarkers and the age of patients, tumor size, histological grade, lymph node metastasis was analyzed. Besides, the influence of these biomarkers on prognosis and the relationship between the expression of these biomarkers were also analyzed.ResultsThere was no significant relationship between the expression of these biomarkers and the age of patients, tumor size, histological grade, lymph node metastasis. CD44 expression was positively correlated with TAGLN-2 expression (r=0.311,P=0.007), TRIM24 expression was positively correlated with TAGLN-2 expression (r=0.421,P=0.000). CD44 expression was negatively correlated with ER expression (r=-0.285,P=0.015). ER expression was positively correlated with PR expression (r=0.598,P=0.000). The postoperative 5-year cumulative survival-rate of CD44 positive group was lower than those of CD44 negative group (P=0.002), in contrast, the postoperative 5-year survival rate of ER positive group was higher than those of ER negative group (P=0.026).ConclusionThrough PI3K-AKT signaling pathway, CD44 and TRIM24 may up- regulate TAGLN-2 expression, however, CD44 may down-regulate ER and PR expression. CD44 and ER may act an useful predictor for the prognosis of breast invasive ductal carcinoma. Combined detection of CD44, ER and PR may provide additional therapeutic information which may be useful in breast cancer treatment.

breast neoplasm; invasive ductal carcinoma； CD44； TRIM24； TAGLN-2； ER； PR； clinicopathology

時間：2017-7-18 11:51 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1151.004.html

1四川大學華西基礎醫學與法醫學院法醫病理教研室，成都 6100412徐州醫學院附屬醫院病理科，徐州 221006

章青波，男，碩士研究生。E-mail： zqb335101@163.com 黃飛駿，男，碩士，教授，通訊作者。E-mail： fjhuang60123@163.com

R 737.9

:A

:1001-7399(2017)07-0724-04

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.004

接受日期：2017-05-11