結(jié)核分枝桿菌包涵體蛋白Rv3480c的克隆、表達(dá)與純化

文 強，唐明美，陳 玲，彭章麗，何月娟，唐正洪

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸二科,貴州 遵義 563099；2.山東省臨沂市人民醫(yī)院東醫(yī)療區(qū) 內(nèi)三科，山東 臨沂 276000)

臨床醫(yī)學(xué)研究

結(jié)核分枝桿菌包涵體蛋白Rv3480c的克隆、表達(dá)與純化

文 強1，2，唐明美1，陳 玲1，彭章麗1，何月娟1，唐正洪1

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸二科,貴州 遵義 563099；2.山東省臨沂市人民醫(yī)院東醫(yī)療區(qū) 內(nèi)三科，山東 臨沂 276000)

目的應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)對結(jié)核分枝桿菌重組抗原Rv3480c基因進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化。方法以結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv基因組為模板，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴增，克隆Rv3480c基因片段，產(chǎn)物經(jīng)驗證后與載體質(zhì)粒pET28a連接重組質(zhì)粒，將驗證構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入表達(dá)宿主E.coli BL21(DE3)菌體內(nèi)，經(jīng)異丙基半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，溶解包涵體，并通過多次低溫凍融、不同濃度尿素復(fù)性方法進(jìn)行包涵體蛋白質(zhì)的純化。結(jié)果擴增后基因電泳試驗及測序證實成功重組目的基因，用尿素溶液和磷酸鹽緩沖液(PBS)透析和純化重組蛋白，Western-Blot證實成功重組結(jié)核分枝桿菌抗原Rv3480c。結(jié)論應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)成功獲得結(jié)核分枝桿菌Rv3480c蛋白，為其結(jié)構(gòu)和功能的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)，并為包涵體蛋白的純化提供了新的技術(shù)思路。

結(jié)核分枝桿菌；Rv3480c；包涵體；克隆；純化

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病,是全球范圍內(nèi)單一病原體引起人類死亡人數(shù)最多的疾病之一[1]。2015年，全球估計有1040萬新發(fā)結(jié)核病患者，結(jié)核病已成為導(dǎo)致20～59歲女性死亡的五大重要原因之一，也是威脅兒童健康的重要疾病，結(jié)核病更是HIV陽性感染者死亡的主要殺手，中國是全球結(jié)核病患者比例居前六位的國家之一[2]。……