一種神經元軸突變性的量化分析方法

李利生，陸 陽，楊斯雷，石京山

(1.遵義醫學院基礎藥理教育部重點實驗室及特色民族藥國際合作聯合實驗室，貴州 遵義 563099；2.上海交通大學醫學院藥學系 化學教研室，上海 200025；3.奧林巴斯(中國)有限公司，北京 100015)

技術與方法

一種神經元軸突變性的量化分析方法

李利生1，陸 陽2，楊斯雷3，石京山1

(1.遵義醫學院基礎藥理教育部重點實驗室及特色民族藥國際合作聯合實驗室，貴州 遵義 563099；2.上海交通大學醫學院藥學系 化學教研室，上海 200025；3.奧林巴斯(中國)有限公司，北京 100015)

目的建立一種神經元軸突變性的量化分析方法。方法采用Aβ25-35(10-7、10-6、10-5mol/L)誘導的大鼠原代海馬神經元軸突變性模型，經神經元特異性標記蛋白β Ⅲ Tubulin免疫熒光染色獲得神經元形態學熒光圖像。熒光圖像經二維消卷積和二元化處理，將熒光標記的神經元區域轉變為黑色并測量其面積，即為神經元總面積。應用ImageJ軟件的顆粒分析功能測量軸突變性產生的片段和顆粒面積，并計算其占神經元總面積的百分比，即可獲得神經元軸突變性的量化數據，命名為變性指數(degeneration index，DI)。Western blot測定突觸后致密蛋白95(postsynaptic density 95，PSD95)和突觸素( synaptophysin，SYN)蛋白變化。Pearson法分析DI與PSD95、SYN變化的相關性。結果免疫熒光染色結果顯示Aβ25-35可誘導海馬神經元軸突變性，DI顯著高于對照組并呈劑量依賴性，PSD95和SYN蛋白水平顯著降低，與DI變化呈顯著正相關。結論本方法可獲得準確的神經元軸突變性的量化數據。

神經元；軸突變性；Aβ25-35；變性指數；免疫熒光；消卷積

神經元軸突的功能是將神經沖動通過突觸傳遞到另一個神經元或所支配的細胞上，軸突結構和功能的完整性是神經系統功能的基礎。……