月經(jīng)周期中內(nèi)源性大麻素與性激素和促性腺激素的相關(guān)性研究分析

崔娜，王露凝，王麗麗，趙志明，王瑋，郝桂敏

(河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院生殖醫(yī)學科，石家莊 050000)

月經(jīng)周期中內(nèi)源性大麻素與性激素和促性腺激素的相關(guān)性研究分析

崔娜，王露凝#，王麗麗，趙志明，王瑋，郝桂敏*

(河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院生殖醫(yī)學科，石家莊 050000)

目的分析月經(jīng)周期中不同時期正常女性血漿中N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)的水平變化及其與性激素和促性腺激素的相關(guān)性。方法選擇2015年5～10月因輸卵管梗阻或男方因素到本院生殖醫(yī)學科就診并欲行IVF助孕、月經(jīng)周期和排卵正常的育齡婦女為研究對象。根據(jù)實驗目的分為橫斷面研究組(79例)和縱向研究組(10例)，檢測AEA在兩組女性月經(jīng)周期中不同時期的變化，以及AEA與FSH、LH、E2、P之間的相關(guān)性。結(jié)果橫斷面研究組中早卵泡期、晚卵泡期、排卵期和黃體期AEA水平分別為(9.71±0.86)ng/ml、(10.61±1.05)ng/ml、(12.24±0.73)ng/ml和(7.46±0.71)ng/ml。排卵期AEA水平最高，黃體期最低(P<0.05)。縱向研究組4個時期AEA水平分別(8.76±0.91)ng/ml、(11.61±1.28)ng/ml、(13.85±1.18)ng/ml、(8.50±1.08)ng/ml，排卵期AEA水平最高，黃體期最低(P<0.05)。橫斷面研究組和縱向研究組各個時期的AEA水平比較均無顯著性差異(P>0.05)。AEA與FSH、LH、E2之間存在顯著的正相關(guān)(P<0.05)，與P水平則無顯著相關(guān)性(P=0.067)。結(jié)論正常女性血漿內(nèi)AEA的濃度隨月經(jīng)周期的變化而變化，且與性激素和促性腺激素呈明顯相關(guān)。但AEA與FSH、LH、E2、P之間的具體作用機制，有待進一步研究。

內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)； 花生四烯酸乙胺醇； 月經(jīng)周期； 性激素； 促性腺激素

(JReprodMed2017，26(9)：902-906)

內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)(ECS)主要分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在女性生殖系統(tǒng)中通過下丘腦-垂體-卵巢軸參與生殖功能調(diào)節(jié)，近年來ECS對女性生殖功能的影響越來越被人們關(guān)注[1]。ECS影響一系列的生理和病理過程。研究發(fā)現(xiàn)在雌性嚙齒類動物中ECS在蛻膜化、植入和胚胎發(fā)育等過程中起重要作用[2-4]。ECS主要組成部分包括內(nèi)源性大麻素及其類似物、特異性的受體和與其相關(guān)的多種酶類。N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)作為第1種被確定的內(nèi)源性大麻素樣物質(zhì)，1992年被首次從豬腦中提取出[5-6]。N-酰基磷脂酰乙醇胺磷脂酶D(NAPE-PLD)和脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)通過合成和降解途徑調(diào)控AEA在生物體內(nèi)的含量[7]。有研究顯示，此時孕酮(P)和雌二醇(E2)均參與維持生物體中內(nèi)源性大麻素水平：P能提高淋巴細胞FAAH活性進而降低AEA水平[8]；E2通過激活NAPE-PLD進一步抑制FAAH活性，使內(nèi)皮細胞釋放AEA[9-10]。目前，關(guān)于內(nèi)源性大麻素物質(zhì)在女性月經(jīng)周期中變化的研究較為匱乏。本研究通過觀察女性月經(jīng)周期中4個時期AEA的變化，及AEA與FSH、LH、E2、P之間的相關(guān)性，旨在了解正常女性月經(jīng)周期中AEA的變化趨勢，及其與性激素和促性腺激素的關(guān)系，探討ECS與女性生殖系統(tǒng)的關(guān)系，為深入研究女性不孕的機制及不孕治療提出新方向，為相關(guān)新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。

材料與方法

一、研究對象及分組

選擇2015年5～10月因輸卵管梗阻或男方因素到本院生殖醫(yī)學科就診并欲行IVF助孕、月經(jīng)周期和排卵正常的育齡婦女89例為研究對象。根據(jù)前瞻性研究的實驗目的，在充分征求患者意愿后將實驗分為兩組：橫斷面研究組為79例受試者，按月經(jīng)周期分為4組：早卵泡期組(21例)、晚卵泡期組(16例)、排卵期組(21例)、黃體期組(21例)，檢測月經(jīng)周期中不同時期血漿中AEA的濃度變化。縱向研究組為10例志愿者，在月經(jīng)周期的4個時期分別采血取血漿，檢測每個人月經(jīng)周期中各時期AEA、FSH、LH、E2和P的濃度變化。所有標本采集均經(jīng)醫(yī)學倫理會認可，研究對象均為自愿參加并簽署知情同意書。

所有受試者入組標準：(1)年齡20～38歲；(2)月經(jīng)周期26～32 d，可自發(fā)排卵；(3)體重指數(shù)(BMI)19～25 kg/m2；(4)基礎(chǔ)內(nèi)分泌正常；(5)近3個月未使用過性激素類藥物；(6)排除免疫性不孕；(7)排除合并多囊卵巢綜合征、子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥等疾病；(8)非吸煙者。

橫斷面研究組和縱向研究組均根據(jù)正常生理月經(jīng)周期中性激素和促性腺激素水平的變化將月經(jīng)周期分為4個時期：早卵泡期(月經(jīng)2～6 d)、晚卵泡期(月經(jīng)8～12 d)、排卵期(月經(jīng)13～16 d)、黃體期(月經(jīng)18～23 d)。

二、標本采集和檢測

1.橫斷面研究組：依據(jù)上個月月經(jīng)天數(shù)并輔助B超監(jiān)測判斷月經(jīng)時期。于早卵泡期、晚卵泡期、排卵期和黃體期抽取前臂靜脈血5 ml。采血時間均為早8：00至10：00。超聲檢測：無囊腫及其它卵巢疾病。其中早卵泡期21例：卵泡直徑<6 mm；晚卵泡期16例：卵泡直徑≤15 mm；排卵期21例：卵泡直徑>16 mm；黃體期21例：超聲檢測可見黃體樣回聲。

2.縱向研究組：方法同橫斷面研究組。10名志愿者同橫斷面一致，分別于月經(jīng)周期4個時期抽取前臂靜脈血10 ml檢測。

采用UPLC-MS/MS分析方法測量血漿AEA水平，采用美國貝克曼庫爾特公司供給的全自動微粒子化學發(fā)光系統(tǒng)和試劑盒測量血清中FSH、LH、E2、P水平。

三、統(tǒng)計學處理

結(jié) 果

一、基本資料

橫斷面研究組與縱向研究組的BMI[(21.82±0.20)kg/m2vs.(21.81±0.20) kg/m2]、年齡[(29.43±0.43)歲vs.(29.57±0.57)歲]比較無顯著性差異(P>0.05)。

二、不同月經(jīng)時期血漿中AEA水平

橫斷面研究組中早卵泡期、晚卵泡期、排卵期和黃體期期AEA水平分別為(9.71±0.86)ng/ml、(10.61±1.05)ng/ml、(12.24±0.73)ng/ml和(7.46±0.71)ng/ml。排卵期AEA水平最高，顯著高于早卵泡期和黃體期AEA水平(P<0.05)。黃體期的AEA水平在4個時期中處于最低，顯著低于其他各時期(P<0.05)(圖1)。

縱向研究組月經(jīng)周期中4個時期AEA水平亦具有明顯的變化趨勢，從早卵泡期、晚卵泡期上升到排卵期達到最高，之后到黃體期降為最低，AEA水平分別為(8.76±0.91)ng/ml、(11.61±1.28)ng/ml、(13.85±1.18)ng/ml和(8.50±1.08)ng/ml。排卵期AEA水平顯著高于早卵泡期和黃體期水平(P<0.05)(圖1)。

橫斷面研究組和縱向研究組各個時期的AEA水平比較均無顯著性差異(P>0.05)(圖 1)。

注：與同組早卵泡期、黃體期比較，*P<0.05；與橫斷面研究組其他時期比較，#P<0.05圖1 兩組不同月經(jīng)時期血漿中AEA的濃度比較

三、性激素與AEA的關(guān)系

檢測結(jié)果顯示，兩組對象中血清FSH、LH、E2、P水平在月經(jīng)周期4個時期的變化符合正常月經(jīng)周期中性激素和促性腺激素的變化趨勢。AEA與FSH、LH、E2之間存在顯著的正相關(guān)(P<0.05)，與P水平則無顯著相關(guān)性(P=0.067)(圖2，表1)。

圖2 AEA濃度變化隨FSH、LH、E2、P濃度變化的散點圖

表1 血漿中AEA濃度與 FSH、LH、E2、P濃度的相關(guān)性

注：*P<0.05

討 論

目前，國內(nèi)研究女性月經(jīng)周期中內(nèi)源性大麻素物質(zhì)變化的相關(guān)報道尚少。國外報道雌孕激素對內(nèi)源性大麻素的影響在人體中的研究也少，動物實驗較多[11-12]，本文研究了在正常育齡期婦女月經(jīng)周期中各個時期內(nèi)源性大麻素樣物質(zhì)AEA水平的變化趨勢及其與性激素、促性腺激素變化的相關(guān)性，旨在為今后內(nèi)源性大麻素在女性生殖系統(tǒng)疾病中的研究提供理論依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示月經(jīng)周期中AEA水平會發(fā)生周期性變化，且兩組中AEA的變化趨勢十分相似，均是由早卵泡期上升至排卵期達到峰值，且說明個體差異可能并不影響月經(jīng)周期中不同時期AEA的水平。有文獻報道，AEA水平與卵泡大小相關(guān)[13-15]，小卵泡液中AEA的濃度高于大卵泡液，可能是由于高濃度AEA促進卵泡發(fā)育，隨著卵泡發(fā)育，卵泡液體積逐漸增大，AEA濃度減小，卵泡發(fā)育減緩，直至排卵，卵泡液釋放。有研究顯示，IVF/ICSI助孕的女性促排卵后，取卵日提取卵泡液檢測其中AEA濃度與自然周期排卵期取出的卵泡液中AEA濃度相近[16]。本研究結(jié)果顯示月經(jīng)周期中排卵期血漿中AEA水平最高的結(jié)果與其相一致，說明AEA可能是由體內(nèi)與卵泡發(fā)育和排卵關(guān)系密切的組織產(chǎn)生或者是由卵巢內(nèi)卵泡局部產(chǎn)生，其濃度可能與排卵有關(guān)。

黃體期正是胚胎著床的“窗口期”，此時期子宮內(nèi)膜容受性最佳，如果子宮內(nèi)膜調(diào)節(jié)出現(xiàn)異常將導致子宮內(nèi)膜容受性下降，可能是反復植入失敗的原因之一[17]。曾有實驗表明黃體期血漿中低水平AEA有利于胚胎著床[4，18-19]。本研究結(jié)果顯示黃體期AEA水平明顯下降，符合這一觀點，提示在黃體期血漿中低AEA水平可能對胚胎成功著床和后續(xù)妊娠維持起著十分重要的作用。

Lazzarin等[20]發(fā)現(xiàn)在“窗口期”外周血中由單核細胞產(chǎn)生的AEA降解酶FAAH增多，并且FAAH的活性增強。有研究報道黃體期P水平升高，且P能增加FAAH的活性[8]。本研究結(jié)果顯示在正常月經(jīng)周期中AEA和P沒有明顯相關(guān)性，提示P可能并不是影響正常月經(jīng)周期中AEA水平的主要因素。本研究結(jié)果顯示血清E2水平與AEA有明顯的正相關(guān)，提示在月經(jīng)周期中E2可能影響AEA水平，這與之前Maccarrone等[10]提出E2刺激子宮內(nèi)膜產(chǎn)生AEA的結(jié)論一致。El-Talatini等[21]于2009年，對IVF/ICSI-ET的患者進行前瞻性病例對照研究顯示，妊娠組患者取卵日到移植日血漿AEA水平顯著下降，血漿AEA水平和β-HCG、P、E2沒有明顯相關(guān)性；但在妊娠組患者早期(超聲確認妊娠6周時抽取血清)AEA水平有所升高，血漿AEA同E2水平具有顯著性相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)育齡婦女血漿中AEA與血清FSH、LH、和E2呈正相關(guān)，提示性激素和促性腺激素的生成與代謝可能和AEA的生成與代謝之間存在一定的相互作用關(guān)系。月經(jīng)周期中促性腺激素和E2對AEA水平的影響可能是分別起作用，也可能為聯(lián)合起作用。本研究初步了解了內(nèi)源性大麻素在人類月經(jīng)周期中的變化規(guī)律，為以后進一步研究其在卵泡發(fā)育、排卵和胚胎著床等機制調(diào)控中的作用提供了參考。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示正常女性血漿內(nèi)AEA的濃度隨月經(jīng)周期的變化而變化，且與性激素和促性腺激素呈明顯相關(guān)性，提示性激素和促性腺激素可能參與調(diào)節(jié)體內(nèi)AEA水平。ECS與女性生殖之間具有緊密關(guān)系，本研究可能為不孕癥治療和新藥研發(fā)提供理論基礎(chǔ)，但AEA與FSH、LH、E2、P之間的具體作用機制，有待進一步研究。

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[編輯：谷炤]

Correlationamongendocannabinoid，sexsteroidshormoneandgonadotrophininplasmaduringmenstrualcycle

CUI Na，WANG Lu-ning#，WANG Li-li，ZHAO Zhi-ming，WANG Wei，HAO Gui-min*

DepartmentofReproductiveMedicine，theSecondHospitalofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050000

Objective： To study plasma anandamide (AEA) level changes and the correlation among AEA，sex hormone and gonadotropin during menstrual cycle in normal women，and further explore whether AEA involves in the regulation of menstrual cycle and human fertility.

Methods： The infertile patients with childbearing age and normal ovulation and menstrual cycle who underwent IVF due to fallopian tube obstruction or male factors in the reproductive medicine center from May to October 2015 were recruited in this study.According to the investigation purpose，the patients were divided into cross-sectional study group (79 patients) and longitudinal study group (10 patients) to examine plasma AEA changes during the menstrual cycle and the correlation among AEA and FSH，LH，E2，and progesterone.

Results： In the cross-sectional study，the plasma AEA levels in the early follicular phase，late follicular phase，ovulation and luteal phase were (9.71±0.86)，(10.61±1.05)，(12.24±0.73) and (7.46±0.71) ng/ml respectively.The AEA level in ovulation phase was significantly higher than that in the early follicular phase and luteal phase (P<0.05).In the longitudinal study，the plasma AEA level in four phases of menstrual cycle was (8.76±0.91)，(11.61±1.28)，(13.85±1.18) and (8.50±1.08) ng/ml respectively.The AEA level in ovulation phase was also significantly higher than the early follicular phase and luteal phase (P<0.05).There was no significant difference in the AEA level between the cross-sectional study group and the longitudinal study group (P>0.05).There were significant positive correlations between plasma AEA level and serum LH，F(xiàn)SH and E2level (P<0.05)，but not with progesterone level (P=0.067).

Conclusions： The plasma levels of AEA in normal women are changed during menstrual cycle，and were significantly correlated with sex hormones and gonadotropins.However，the specific interaction mechanism between AEA and FSH，LH，E2，progesterone needs to be further studied.

Endocannabinoid； Anandamide； Menstrual cycle； Sex steroid hormones； Gonadotrophin

10.3969/j.issn.1004-3845.2017.09.010

2017-02-22；

2017-04-01

河北省衛(wèi)計委醫(yī)學科學研究重點課題計劃(指令項目)(20150236)

崔娜，女，河北人，博士，副主任醫(yī)師，生殖醫(yī)學專業(yè)；王露凝，女，遼寧人，碩士，醫(yī)師.(#共同第一作者；*

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