取卵術中不同負壓吸引對IVF-ET妊娠結局的影響

畢媛，王霞，薛偉，趙光，田琳，王麗亞，李琦，吳瑞英，鄒淑花

(青島大學附屬婦女兒童醫院，青島 266034)

取卵術中不同負壓吸引對IVF-ET妊娠結局的影響

畢媛，王霞，薛偉，趙光，田琳，王麗亞，李琦，吳瑞英*，鄒淑花

(青島大學附屬婦女兒童醫院，青島 266034)

目的探討體外受精-胚胎移植(IVF-ET)取卵術中不同負壓吸引對妊娠結局的影響。方法收集2016年3～6月在本院生殖醫學中心行常規IVF-ET治療的382個周期為研究對象。按照隨機數字表將患者隨機分為A、B、C、D 4組，設定不同的負壓吸引泵壓力：A組(100 mmHg，96個周期)，B組(120 mmHg，98個周期)，C組(140 mmHg，98個周期)，D組(160 mmHg，90個周期)。觀察各組的獲卵率、受精率、優質胚胎率及臨床妊娠率。結果各組的獲卵率、受精率、卵裂率比較無顯著性差異(P>0.05)，C組的獲卵率(88.12%)有高于其他組的趨勢；C組的優質胚胎率(69.82%)略高于其他組，顯著高于A組(64.43%)(P<0.01)。各組的平均移植胚胎數及臨床妊娠率比較無顯著性差異(P>0.05)，C組的臨床妊娠率(57.14%)有高于其他組的趨勢。結論IVF-ET治療中取卵負壓設定在100～160 mmHg時取卵操作是安全的，使用17G取卵針并設定負壓為140 mmHg時可獲得較好的卵母細胞回收率、優質胚胎率及臨床妊娠率。

體外受精-胚胎移植； 負壓吸引力； 獲卵； 優質胚胎； 臨床妊娠

體外受精-胚胎移植(IVF-ET)技術是目前治療不孕癥最有效的方法之一。在IVF-ET治療周期中，最大程度回收優質卵母細胞是治療成功的關鍵。如何在降低手術并發癥的同時獲得滿意的卵母細胞回收率和高發育潛能的卵母細胞是廣大生殖醫學工作者最關注的問題。既往使用的取卵負壓吸引力在100～200 mmHg[1-2]，范圍較大，在此壓力范圍內取卵時是否會對回收卵母細胞造成不利影響，國內張楊等[3]探討了取卵時泵的負壓對卵母細胞及妊娠結局的影響，其在研究中根據不同的取卵壓力120 mmHg和160 mmHg進行分組，對比兩組獲得的卵母細胞數量、受精率、卵裂率、優質胚胎率及臨床妊娠率。研究結果顯示受精率、可移植胚胎率、臨床妊娠率隨著取卵壓力的增加明顯降低。該報道僅對負壓在120與160 mmHg兩個壓力下的取卵及移植情況進行了分析，未對公認的壓力范圍內其他壓力及與取卵壓力相關的手術并發癥出血情況等進行探討。本研究在壓力范圍100～160 mmHg內取卵，對不同壓力是否影響卵母細胞回收及其發育潛能進行探討，為選擇取卵時的最佳負壓吸引力提供參考。

一、資料與方法

1.研究對象：收集2016年3～6月在本院生殖醫學中心進行常規IVF-ET治療的382個周期。納入標準：女方年齡≤35歲，輸卵管因素不孕，排除多囊卵巢綜合征(PCOS)者；男方精液常規檢查未見異常。剔除標準：中途不愿參加本研究，中途中止或放棄治療者。本研究經我院倫理委員會審批通過，入組時患者均自愿參加本次研究并簽署知情同意書。

按照隨機數字表將患者隨機分為A、B、C、D 4組，參照之前文獻研究[1-3]及多數生殖中心處理經驗，在取卵時負壓吸引泵設定不同的壓力：A組：設定壓力100 mmHg，96個周期；B組：設定壓力120 mmHg，98個周期；C組：設定壓力140 mmHg，98個周期；D組：設定160 mmHg，90個周期。所有患者均使用17G取卵針取卵。部分患者因預防卵巢過度刺激綜合征(OHSS)或明顯影響妊娠結局的因素行全胚凍存。

2.研究方法：采用美國COOK公司的真空負壓吸引器，使用韓國麥迪遜X4 B超儀，探頭頻率7.5 MHz，均使用英國WALLACE 公司的17G單腔針取卵。

促排卵：采用黃體期長方案促排卵，于前1個月經周期的第21天或者在排卵后7～8 d開始使用促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)降調節，達菲林(益普生，法國)0.1 mg皮下注射，1次/d，連續應用至HCG注射日。月經第3天開始使用重組人促卵泡激素(果納芬，Gonal-F，75 U/支，Serono，瑞士)皮下注射和尿促性腺激素(HMG，75 U/支，珠海麗珠)肌肉注射，150～225 U/d聯合給藥促排卵。當有1個主導卵泡直徑達到18 mm，或2個卵泡直徑達到17 mm，或3個卵泡直徑達到16 mm時，停用果納芬和達菲林。于當晚21點左右肌肉注射人絨毛膜促性腺激素(HCG，珠海麗珠)6 000～10 000 U扳機。統計HCG注射日雙側卵巢直徑≥14 mm的卵泡數目。扳機36～38 h后經陰道B超引導下穿刺取卵。

卵母細胞回收：取卵操作由固定人員完成，包括1名經驗豐富的取卵手術醫生和1名配合取卵術的護理人員，及1名經驗豐富的實驗室操作人員。取卵手術在陰道超聲診斷儀引導下進行。取卵前設定好負壓，取卵針連接完畢后啟動負壓吸引器，將針刺入卵泡并抽吸，將卵泡液收集到14 ml試管內，迅速轉入胚胎培養室進行撿卵。取卵結束后，記錄每位患者穿刺卵泡總數、獲卵數，并觀察獲得卵冠丘復合體的形態。

IVF-ET：取卵后4～6 h行常規IVF，授精后16～18 h去除卵母細胞周圍的顆粒細胞，觀察受精情況，第3天觀察胚胎卵裂情況并進行胚胎評估。采用改良Puissant評分[4-5]法評價胚胎質量，優質胚胎標準：碎片<20%，第3天6～8細胞，卵裂球均勻或略不均勻。由同1名經驗豐富的胚胎移植醫生進行操作，胚胎選擇及移植按本中心操作常規進行，移植后行常規黃體支持。記錄受精情況、胚胎評分及移植后種植情況等。

隨訪：移植后14 d查血β-HCG判斷是否生化妊娠。胚胎移植后30 d行B超檢查判斷妊娠囊位置及數目。

3.觀察指標：每組的獲卵率、受精率、卵裂率、優質胚胎率及臨床妊娠率。

二、結果

1.各組患者一般情況比較：4組患者的平均年齡、不孕年限、Gn使用劑量、HCG日血E2水平比較無顯著性差異(P>0.05)(表1)。

2.各組患者獲卵及胚胎發育情況比較：各組獲卵率、受精率、卵裂率比較無顯著性差異(P>0.05)，C組獲卵率(88.12%)略高于其他組。各組優質胚胎率比較，C組有高于其他組的趨勢，顯著高于A組(P<0.01)(表2)。A、B、C 3組患者無出血發生，D組有2例出血。由于例數較少，未做統計學分析。

3.各組患者移植日子宮內膜及臨床結局比較：各組患者移植日子宮內膜厚度、平均移植胚胎數及臨床妊娠率比較無顯著性差異(P>0.05)；C組臨床妊娠率有高于其他組的趨勢，但與其他組比較并無顯著性差異(P>0.05)(表3)。

表1 各組患者一般情況比較 (-±s)

表2 各組患者獲卵及胚胎發育情況比較 [n (%)]

注：與A組比較，*P<0.01

表3 各組患者移植日子宮內膜及臨床結局比較 [(-±s)，n (%)]

三、討論

IVF-ET中影響移植結局的因素眾多[6]，其中卵母細胞的回收率是影響IVF-ET治療成功的關鍵[7-9]。既往文獻中用于取卵時負壓壓力設定范圍為100～200 mmHg[1-2]。眾所周知，在壓力一定的情況下，面積越大，壓強越小，管道的液體流速越快。流速越快，卵冠丘復合體從卵泡壁上急速脫下迅速進入回收系統。單個卵泡穿刺持續時間較短，卵母細胞在卵泡液中停留時間較短，反之亦然。嘗試在這個壓力范圍內尋找最佳的取卵負壓壓力，以最大限度地降低對獲卵率及卵母細胞質量的影響，是輔助生殖工作者需要進一步研究的問題。

以往較多的研究局限在動物取卵術中。1996年Bols等[10]研究了負壓與取卵針的直徑對牛卵冠丘復合體的形態及發育能力的影響，結果顯示負壓越大，卵母細胞回收率越高，卵冠丘復合體完整率降低，裸卵率增加，囊胚的形成率越低。1997年Brüssow等[11]對豬排卵前卵泡進行回收，負壓設置為30、60、125、250、375 mmHg，流速分別為10、17、32、47、66 ml/min，共穿刺695個卵泡，回收卵母細胞501個。隨壓力增加卵母細胞回收率逐漸下降。當流速為17 ml/min時，卵母細胞回收率較高達77.4%，流速為66 ml/min時回收率為59.8%。流速大于47 ml/min時完整的卵冠丘復合體的比例從82.0%下降到77.0%。壓力增加，裸卵比例增加0～3%。該研究提示負壓壓力影響卵母細胞回收和卵冠丘復合體的質量，壓力在60～125 mmHg(卵泡液流速17～32 ml/min)時，對豬卵母細胞和卵冠丘回收較適合。2008年Morton等[12]對羊卵母細胞回收中負壓壓力與回收率的關系進行研究，設負壓壓力為25、50、100 mmHg，用20G、2.5 ml的注射器穿刺直徑2～4 mm卵泡，研究3組卵母細胞的成熟度、受精情況及早期胚胎發育情況等；研究結果顯示負壓為25～50 mmHg時比較合適。

本研究中，按照17G取卵針在100～160 mmHg壓力范圍內的不同負壓進行分組，結果提示負壓壓力從100 mmHg上升到120 mmHg時，優質胚胎率升高，壓力在140 mmHg時優質胚胎率最高，壓力為160 mmHg時優質胚胎率略有降低，雖然組間比較無顯著性差異(P>0.05)。考慮在140 mmHg負壓下獲得的卵母細胞質量最好因而獲得了最好的優質胚胎率，而過高的壓力可能造成卵冠丘復合體從卵泡壁上被急速撕脫，卵母細胞可能受到損傷，從而影響優質胚胎率。

關于取卵手術與出血率的研究，已有研究資料表明在人類卵母細胞回收中術后出血發生率約0.5%～8.6%[13]。本研究中由于出血例數較少，僅D組有2例患者發生術后出血，提示隨負壓壓力的增加可能導致出血率的增加，這與張合龍等[14]的報道一致。

本研究結果提示，隨著負壓壓力的增加，臨床妊娠率有逐漸升高后又有所下降的趨勢，但各組之間比較無顯著性差異(P>0.05)，這考慮與本研究樣本量較少有關。但本研究也再次證實在負壓100～160 mmHg范圍內，取卵操作是安全的；在負壓為140 mmHg時可獲得相對最高的臨床妊娠率，這與Kumaran等[15]報道一致。

綜上所述，本研究結果提示IVF-ET治療中取卵時使用17G取卵針并設定負壓吸引力為140 mmHg時可獲得較好的卵母細胞回收率、優質胚胎率及臨床妊娠率。本研究也再次證實取卵負壓在100～160 mmHg時取卵操作是安全的。但本研究所納入樣本量較少，尚需后期更大樣本量的研究探討驗證。

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[編輯：肖曉輝]

10.3969/j.issn.1004-3845.2017.09.016

2017-03-21；

2017-04-25

山東省醫藥衛生科技發展項目(2015WS0350)

畢媛，女，主管護師，本科，生殖護理專業.(*

，Email：shaying1968@126.com)