miR—21、miR—155、miR—210的臨床表達(dá)意義及其與淋巴瘤病理特征的相關(guān)性分析

馮曉云++++++嚴(yán)玲玲

[摘要] 目的 分析miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達(dá)意義及其與淋巴瘤病理特征的相關(guān)性。 方法 選取2014年12月～2016年12月南通市腫瘤醫(yī)院收治的62例經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的淋巴瘤患者作為研究對(duì)象，分別對(duì)淋巴瘤組織及正常淋巴組織中的miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)分析miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量與患者年齡、性別、免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。 結(jié)果 淋巴瘤組織miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量較正常淋巴組織高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。免疫分型中NK/T細(xì)胞淋巴瘤、黏膜相關(guān)淋巴瘤的miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量均高于DLBCL，MYC基因中正常排列的miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量均高于基因重排，BCL-6蛋白中表達(dá)的miR-21、miR-155表達(dá)量均低于未表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。miR-21、miR-155表達(dá)與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達(dá)有關(guān)系，miR-210表達(dá)與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有關(guān)系（P < 0.05）。 結(jié)論 miR-21、miR-155、miR-210參與淋巴瘤的發(fā)生與進(jìn)展，miR的高表達(dá)量對(duì)淋巴瘤患者預(yù)后造成一定影響，在臨床上對(duì)miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定，對(duì)后續(xù)治療及預(yù)后都具有一定的指導(dǎo)意義。

[關(guān)鍵詞] miR-21；miR-155；miR-210；淋巴瘤；病理特征

[中圖分類號(hào)] R733.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）08（b）-0084-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of miR-21， miR-155 and miR-210 and their correlation with the pathological features of lymphoma. Methods 62 cases of pathologically confirmed lymphoma patients from December 2014 to December 2016 in Nantong Tumor Hospital were chosen as the research objectes. Expression of miR-21， miR-155 and miR-210 in lymphoma tissues and normal lymph tissues was determined respectively. And the correlation of age， gender， immunophenotype， MYC gene and B cell lymphoma 6 protein （BCL-6） with miR were also analyzed. Results The miR-21， miR-155 and miR-210 in lymphoma tissues were higher than those in normal lymph tissues， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The miR-21， miR-155， miR-210 of NK/T cell lymphoma， mucosa -associated lymphoma in immunological typing were higher than those of DLBCL， miR-21， miR-155， miR-210 of normal arrangement in MYC gene were higher than those of gene rearrangement， miR-21， miR-155 of expression in BCL-6 protein were lower than those of non-expression， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The miR-21 and miR-155 were associated with immunophenotyping， MYC gene and BCL-6 protein expression in lymphoma patients， miR-210 expression was associated with immune classification and MYC gene in patients with lymphoma （P < 0.05）. Conclusion The miR-21， miR-155 and miR-210 participates in the development and progression of lymphoma， the high expression of miR may influence the prognosis of patients with lymphoma. The expression of miR-21， miR-155 and miR-210 in clinic has certain guiding significance for the follow-up treatment and prognosis.

[Key words] miR-21； miR-155； miR-210； Lymphoma； Pathological characteristicsendprint

淋巴瘤是淋巴結(jié)及淋巴細(xì)胞病變疾病，屬于一種免疫細(xì)胞惡性病變[1-3]。微小RNA（miR）由高等真核生物基因組編碼而成，miR具有與靶基因mRNA堿基定向配對(duì)的功能，因此具有引導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）將mRNA降解或阻礙mRNA翻譯的作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)，miR具有一定的特異性和時(shí)序性，其表達(dá)決定了機(jī)體組織和細(xì)胞的功能特異性，與機(jī)體生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程的多個(gè)環(huán)節(jié)存在關(guān)聯(lián)，參與機(jī)體病毒過(guò)程，且與原癌基因有一定的關(guān)聯(lián)[5]。研究發(fā)現(xiàn)，與其他惡性腫瘤相比，淋巴瘤患者體內(nèi)miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)情況存在明顯失調(diào)[6-7]。為進(jìn)一步探討分析miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達(dá)意義及其與淋巴瘤病理特征的相關(guān)性，特對(duì)62例經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的淋巴瘤患者進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2014年12月～2016年12月南通市腫瘤醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）收治的62例經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的淋巴瘤患者作為研究對(duì)象，其中男33例，女29例，年齡30～75歲，平均（58.31±13.38）歲。根據(jù)淋巴瘤患者原發(fā)部位進(jìn)行分類：原發(fā)胃腸道患者25例，原發(fā)頭頸部患者24例（鼻咽部11例、扁桃體9例、甲狀腺4例），原發(fā)其他部位患者13例。免疫分型：彌散性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）型患者14例，NK/T細(xì)胞淋巴瘤型患者20例，黏膜相關(guān)淋巴瘤型患者28例。MYC基因分類：正常排列23例，基因重排39例。B細(xì)胞淋巴瘤6（BCL-6）蛋白情況：表達(dá)39例，未表達(dá)23例。本研究經(jīng)過(guò)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)后正式實(shí)施，所有患者及其家屬均對(duì)本研究目的、檢查方法知情同意，主動(dòng)簽署了知情同意書。

1.2 方法

所有研究對(duì)象入院后抽取2 mL淋巴瘤組織及正常淋巴組織的靜脈血用樣本標(biāo)本，經(jīng)EDTA抗凝后30 min，離心加速提取血細(xì)胞，離心速度定在3000 r/min，時(shí)間為5 min，經(jīng)分離后將離心的血液標(biāo)本置于-84℃的冰箱待檢。一切準(zhǔn)備就緒后，以let-7amiRNA作為內(nèi)參基因，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）擴(kuò)增基因組RNA，采用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)基因組RNA擴(kuò)增的目標(biāo)片段，測(cè)定其進(jìn)行順序，進(jìn)而測(cè)定miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)水平；同時(shí)設(shè)計(jì)反應(yīng)引物，以miR-21、miR-155、miR-210及l(fā)et-7a頸環(huán)RT引物進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄，先于42℃的條件下進(jìn)行30 min的逆向轉(zhuǎn)錄，再將溫度升至95℃繼續(xù)進(jìn)行2 min的mRNA變性，隨后將標(biāo)本分別置于55、72、95℃的條件下分別進(jìn)行15、30、30 s的RNA反復(fù)擴(kuò)增，隨著溫度的降低將熒光信號(hào)進(jìn)行采集，并計(jì)算miR-21、miR-155、miR-210的相對(duì)表達(dá)量。基因相對(duì)表達(dá)量=目的基因/內(nèi)參基因。采用免疫組化法對(duì)淋巴瘤患者CD10、BCL-6、MUMI蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)并進(jìn)行免疫分型。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

①分別測(cè)定正常淋巴組織及淋巴瘤組織中的miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量，比較不同組織中miR的表達(dá)情況。②分析miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達(dá)與淋巴瘤病理特征的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，多因素相關(guān)性采用COX回歸分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達(dá)情況

淋巴瘤組織miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量均高于正常淋巴組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 miR-21、miR-155、miR-210的臨床表達(dá)與淋巴瘤病理特征的相關(guān)性

2.2.1 單因素相關(guān)性分析 免疫分型中NK/T細(xì)胞淋巴瘤、黏膜相關(guān)淋巴瘤的miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量均高于DLBCL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；MYC基因中正常排列的miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量均高于基因重排，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；BCL-6蛋白中表達(dá)的miR-21、miR-155表達(dá)量均低于未表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表2。

2.2.2 多因素相關(guān)性分析 經(jīng)回歸分析結(jié)果顯示，miR-21、miR-155表達(dá)與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達(dá)有關(guān)系，miR-210表達(dá)與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有關(guān)系（P < 0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

近年來(lái)，受環(huán)境改變和生活方式的影響，國(guó)內(nèi)外淋巴瘤的發(fā)病率逐年攀升。該病發(fā)病機(jī)制尚不明確，但隨著病情的進(jìn)一步發(fā)展、惡化，給疾病治愈帶來(lái)了很大程度的困難，不僅給家庭、社會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，而且患者所承受的痛苦也是難以想象[8-9]。包括淋巴瘤在內(nèi)的所有腫瘤疾病，都與原癌基因、抑癌基因及信號(hào)傳導(dǎo)通路等有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)，與其他惡性腫瘤相比，淋巴瘤患者體內(nèi)miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)情況存在明顯失調(diào)[10]。在實(shí)際臨床中對(duì)淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定，不但可以指導(dǎo)主治醫(yī)生對(duì)患者病情進(jìn)展及預(yù)后進(jìn)行相應(yīng)評(píng)估，還可以指導(dǎo)其根據(jù)患者實(shí)際情況制訂合理的治療方案[11-12]。

本研究結(jié)果顯示，淋巴瘤組織miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量明顯高于正常淋巴組織，NK/T細(xì)胞淋巴瘤及黏膜相關(guān)淋巴瘤類型的淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量明顯高于DLBCL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。DLBCL、NK/T細(xì)胞淋巴瘤及黏膜相關(guān)淋巴瘤類型的區(qū)別在于免疫組化技術(shù)檢測(cè)CD3、CD10、CD20、BCL-6、MUM-1蛋白是否有表達(dá)，NK/T細(xì)胞淋巴瘤及黏膜相關(guān)淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210的高表達(dá)量與既往研究結(jié)果一致[13-14]。另外，回歸分析結(jié)果顯示，miR-21、miR-155表達(dá)量與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達(dá)有關(guān)，miR-210表達(dá)與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。MYC基因?qū)儆诎┗虻囊环N，MYC蛋白是MYC基因編碼的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，MYC蛋白的形成密切影響著細(xì)胞周期，正常細(xì)胞處于靜止和停止分化的狀態(tài)，MYC基因無(wú)法正常表達(dá)，mRNA水平降低，導(dǎo)致MYC基因重排[15]。研究顯示，MYC基因重排與淋巴細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，且中樞系統(tǒng)并發(fā)癥較為高發(fā)，影響淋巴瘤患者的預(yù)后[16]。另一方面，miR-21、miR-155表達(dá)水平偏高時(shí)，對(duì)MYC基因的正常序列造成影響，引起基因的重排，進(jìn)而影響預(yù)后[17]。可見(jiàn)對(duì)淋巴瘤患者進(jìn)行miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)量的測(cè)定，對(duì)預(yù)測(cè)患者預(yù)后有一定的臨床意義[18]。BCL-6基因編碼的蛋白有706個(gè)氨基酸共同組成，過(guò)去的研究發(fā)現(xiàn)，大部分DLBCL患者均顯示過(guò)量表達(dá)BCL-6[19]。BCL-6通過(guò)與特異的DNA序列結(jié)合，可對(duì)B細(xì)胞發(fā)育和功能起關(guān)鍵作用的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄調(diào)控，是調(diào)節(jié)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的重要因子[20]。有研究稱，BCL-6異常表達(dá)與B細(xì)胞淋巴瘤具有一定的相關(guān)性，且與淋巴瘤的發(fā)展密切相關(guān)[21]。本研究顯示，BCL-6陰性表達(dá)的淋巴瘤患者miR-21、miR-155的表達(dá)量較BCL-6陽(yáng)性表達(dá)的淋巴瘤患者高（P < 0.05）。BCL-6與MYC基因重排存在逆相關(guān)，BCL-6的陽(yáng)性表達(dá)會(huì)引起機(jī)體內(nèi)MYC基因的重排，進(jìn)而對(duì)淋巴組織內(nèi)漿細(xì)胞的分化造成影響；當(dāng)BCL-6表達(dá)受到抑制時(shí)，細(xì)胞的增殖、分化將受到影響，細(xì)胞的凋亡機(jī)制也會(huì)發(fā)生異常，最終導(dǎo)致細(xì)胞惡質(zhì)增殖、分化，引起淋巴瘤的遠(yuǎn)傳轉(zhuǎn)移及進(jìn)展惡化[22]。本研究證實(shí)了miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)與淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達(dá)的關(guān)系，從而提示實(shí)際臨床治療中，可對(duì)淋巴瘤患者進(jìn)行miR-21、miR-155、miR-210水平的調(diào)節(jié)與控制，促進(jìn)MYC基因的重排及BCL-6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)，進(jìn)而控制淋巴瘤患者病情的進(jìn)展，保證預(yù)后的恢復(fù)。endprint

總之，miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤組織內(nèi)的表達(dá)量要高于其他淋巴組織細(xì)胞，且與淋巴瘤的發(fā)生與進(jìn)展，miR的高表達(dá)量對(duì)淋巴瘤患者預(yù)后會(huì)造成一定影響，在臨床上對(duì)miR-21、miR-155、miR-210表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定，對(duì)后續(xù)治療及預(yù)后都具有一定的指導(dǎo)意義。

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