益氣養(yǎng)陰健脾方對急性胃潰瘍模型大鼠血清炎癥因子、行為學和表皮生長因子表達的影響

韓嘯峰

（山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東 濟南 250001）

益氣養(yǎng)陰健脾方對急性胃潰瘍模型大鼠血清炎癥因子、行為學和表皮生長因子表達的影響

韓嘯峰

（山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東 濟南 250001）

目的 觀察益氣養(yǎng)陰健脾方對急性胃潰瘍模型大鼠血清炎癥因子、行為學和表皮生長因子表達的影響。方法 30只SD大鼠隨機分為對照組、模型組、中藥組，每組10只，采用不可預知性刺激法建立急性胃潰瘍大鼠模型，對照組和模型組蒸餾水灌胃，中藥組益氣養(yǎng)陰健脾方煎煮液灌胃。觀察各組大鼠的行為學和胃組織病理學變化，比較血清白介素6（IL-6）、白介素23（IL-23）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平，免疫組化法檢測檢測胃黏膜表皮生長因子（EGF）和血管內皮生長因子（VEGF）。結果 模型組大鼠精神萎靡，扎堆睡覺，反應遲鈍，毛發(fā)不順，飲食減少，大便稀，而中藥組大鼠表現(xiàn)不明顯。與對照組比較，模型組大鼠糖水消耗、垂直運動和水平運動得分降低，強迫游泳中靜止時間增加，中藥組可增加大鼠糖水消耗、垂直運動和水平運動得分，減少強迫游泳中靜止時間（P<0.05）。與對照組比較，模型組胃黏膜缺損，炎癥細胞浸潤、纖維素滲出、部分肌質纖維溶解，中藥組潰瘍愈合，胃黏膜下肉芽組織增生，炎癥細胞浸潤減輕，毛細血管豐富。模型組血清IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著升高，中藥組血清IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著降低（P<0.05）。模型組大鼠胃黏膜EGF和VEGF顯著升高，中藥組胃黏膜EGF和VEGF顯著降低（P<0.05）。結論 益氣養(yǎng)陰健脾方可改善急性胃潰瘍模型大鼠行為學，保護胃組織，減輕炎癥反應，促進胃黏膜修復及潰瘍愈合。

益氣養(yǎng)陰健脾方 胃潰瘍 炎癥因子 表皮生長因子

臨床中急性胃潰瘍易發(fā)生多種并發(fā)癥，發(fā)病機制較復雜，與胃黏膜生長因子失衡、炎癥反應等密切相關［1-2］。 胃潰瘍屬中醫(yī)學“胃脘痛”“脅痛”范疇，因肝郁氣滯、肝胃不和，飲食不節(jié)損傷脾胃所致，治宜益氣養(yǎng)陰、健脾疏肝為主［3-4］。益氣養(yǎng)陰健脾方益氣養(yǎng)陰、健脾疏肝，可減輕急性胃潰瘍炎癥反應，提高臨床療效，但其作用機制尚不明確［5］。因此，本研究以不可預知性刺激法建立急性胃潰瘍大鼠模型大鼠，旨在探討益氣養(yǎng)陰健脾方對急性胃潰瘍模型大鼠血清炎癥因子、行為學和胃黏膜表皮生長因子表達的影響，為臨床治療提供新的參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 30只健康清潔級SD大鼠由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供 ［許可證號SCXK（京）2011-0011］，雌雄各半，體質量（250±20） g。 自然光線，以標準飼料和無菌蒸餾水喂養(yǎng)。

1.2 試藥與儀器 水合氯醛（國藥集團化學試劑有限公），益氣養(yǎng)陰健脾方（組成：黃芪 15 g，黨參 10 g，生地黃 15 g，玄參 10 g，柴胡 10 g，薏苡仁 20 g，白芍10 g，枳殼 10 g，川芎 10 g，香附 10 g，延胡索 10 g，白及10 g，甘草10 g。藥材均為本院中藥房提供，并制成1 g/mL 的煎煮液）。 白介素-6（IL-6）、白介素-23（IL-23）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒（上海生工技術有限公司），表皮生長因子（EGF）和血管內皮生長因子（VEGF）抗體（美國 Santa Cruz公司）。NI500顯微鏡（日本尼康公司），Biotek aQuant型酶標儀（上海坤肯生物化工有限公司），RM2125切片機和TPIIZO全自動封閉式組織脫水機 （德國徠卡公司），Y6-6LF生物組織包埋機 （湖北亞光易用電子技術有限公司），13R離心機［力康集團力新儀器（上海）有限公司］。

1.3 造模與分組 30只SD大鼠，隨機取10只為對照組，剩余20只SD大鼠給予多種不可預知的應激刺激制作急性胃潰瘍模型［6］。不可預知應激刺激方法有4℃冰水中游泳5 min，夾尾巴3 min，束縛制動4 h/d，電擊30次，束縛1周后，每日隨機選取3種應激刺激方法，連續(xù)刺激8 d后，20只大鼠隨機分為模型組與中藥組。對照組和模型組給予蒸餾水灌胃，中藥組給予益氣養(yǎng)陰健脾方煎煮液灌胃，10 mL/kg，每日灌胃1次，連續(xù)給藥7 d。

1.4 指標檢測 觀察各組大鼠的皮膚毛發(fā)、情緒反應、行為狀態(tài)、興奮程度、活躍狀況、飲食等一般情況。灌胃給藥7 d后，訓練大鼠適應含糖飲水，計算大鼠糖水消耗，進行曠場實驗，觀察垂直運動和水平運動，直立次數(shù)為垂直活動得分，動物穿越底面方塊數(shù)為水平活動得分，記錄5 min內大鼠靜止時間［7］。處死各組大鼠，切取胃組織標本，甲醛固定，24 h后，經酒精脫水和二甲苯透明后，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片間距5 mm，HE染色，樹膠封片后，光學顯微鏡觀察胃組織病理學變化。取血液2 mL，自然凝固后，3000 r/min離心10 min，分離血清，采用ELISA法檢測血清IL-6、IL-23和TNF-α水平，嚴格按說明書操作。采用免疫組化法檢測胃黏膜EGF和VEGF，嚴格按照說明書操作，在光學顯微鏡下EGF陽性表達為棕黃色顆粒，平均光度值反映陽性表達強度，每張隨機選取3個視野，自動計算其平均光度值和平均灰度值，進行統(tǒng)計分析。

1.5 統(tǒng)計學處理 應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s）表示，采用t檢驗比較組內和組間差異；計數(shù)資料以n（%）表示，應用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠一般狀態(tài)比較 對照組大鼠行動迅速敏捷，攝食正常，毛發(fā)整齊有光澤，大便正常；模型組精神萎靡，扎堆睡覺，反應遲鈍，毛發(fā)不順，飲食減少，大便稀，而中藥組大鼠一般狀態(tài)與對照組比較表現(xiàn)不明顯。

2.2 各組大鼠行為學比較 見表1。與對照組比較，模型組大鼠糖水消耗、垂直運動和水平運動得分降低，強迫游泳中靜止時間增加。中藥組可增加大鼠糖水消耗、垂直運動和水平運動得分，減少強迫游泳中靜止時間，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

表1 各組大鼠糖水消耗、垂直運動、水平運動和強迫游泳實驗比較

表1 各組大鼠糖水消耗、垂直運動、水平運動和強迫游泳實驗比較

與模型組比較，*P＜0.05；與對照組比較，△P＜0.05。下同。

組 別 n 糖水消耗（mL）垂直運動（分）水平運動（分）強迫游泳中靜止時間（s）對照組 10模型組 10 3.71±0.89 72.16±9.36 16.37±3.24 64.21±6.74 2.51±0.76△ 41.61±8.42△ 6.15±2.53△ 115.67±8.69△中藥組 103.16±0.91* 56.84±9.13* 11.05±3.12* 76.74±8.64*

2.3 各組大鼠病理學變化 見圖1。對照組大鼠組織結構完整，無潰瘍形成；模型組胃黏膜缺損，炎癥細胞浸潤、纖維素滲出、部分肌質纖維溶解；中藥組潰瘍愈合，有癒痕組織，胃黏膜下肉芽組織增生，炎癥細胞浸潤減輕，毛細血管豐富。

圖1各組大鼠胃組織病理學變化（HE染色，400倍）

2.4 各組大鼠炎癥因子比較 見表2。模型組血清IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著升高，中藥組血清IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

表2 各組大鼠血清炎癥因子比較

表2 各組大鼠血清炎癥因子比較

組 別 n IL-6（ng/L） IL-23（ng/L） TNF-α（μg/L）對照組 10模型組 10 100.21±16.63 53.54±3.59 0.98±0.23 175.41±21.37△ 75.17±4.31△ 1.67±0.28△中藥組 10130.52±17.61* 64.12±3.86* 1.27±0.21*

2.5 各組大鼠表皮生長因子比較 見表3。模型組大鼠胃黏膜EGF和VEGF顯著升高，中藥組胃黏膜EGF和VEGF顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

表3 各組大鼠胃黏膜EGF和VEGF比較（IOD

表3 各組大鼠胃黏膜EGF和VEGF比較（IOD

組 別 n EGF VEGF對照組 10模型組 10 0.19±0.03 0.16±0.04 0.85±0.12△ 0.76±0.09△中藥組 100.22±0.05* 0.24±0.06*

3 討 論

急性胃潰瘍患者組織局部結構與功能未完全恢復，可存在結締組織充填，黏膜層變薄，微血管結構紊亂，易并發(fā)出血穿孔，可發(fā)展為慢性胃潰瘍，嚴重影響患者的預后［8-9］。中醫(yī)學認為急性胃潰瘍與正氣不足及脾胃瘀阻，飲食不節(jié)、肝怒犯脾等致氣血失暢、胃膜受損、胃膜不生，胃潰瘍與肝脾兩臟密切相關，是多種因素所致［10-11］。多種不可預知應激法制作急性胃潰瘍模型大鼠，動物不僅不能預知刺激，避免適應現(xiàn)象的發(fā)生，也可模擬情志異常引發(fā)肝郁證的過程，符合以炎性糜爛、胃黏膜淺表性潰瘍甚至出血急性胃潰瘍病機［12］。

本研究發(fā)現(xiàn)，模型組精神萎靡，扎堆睡覺，反應遲鈍，毛發(fā)不順，飲食減少，大便稀，糖水消耗、垂直運動和水平運動得分降低，強迫游泳中靜止時間增加，胃黏膜缺損，炎癥細胞浸潤、纖維素滲出、部分肌質纖維溶解，血清IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著升高，胃黏膜EGF和VEGF顯著升高，說明不可預知性刺激法建立急性胃潰瘍大鼠模型的一般狀態(tài)、行為學、胃組織病理、炎癥因子和胃組織皮生長因子均發(fā)生了顯著的變化，所建立的急性胃潰瘍大鼠模型符合急性胃潰瘍患者的病理變化，所建立的動物模型可較好地評價藥物的干預作用和機制的研究［13］。給予益氣養(yǎng)陰健脾方煎煮液灌胃后發(fā)現(xiàn)，中藥組可顯著改善大鼠的皮膚毛發(fā)、情緒反應、行為狀態(tài)、興奮程度、活躍狀況、飲食等一般情況，增加大鼠糖水消耗、垂直運動和水平運動得分，減少強迫游泳中靜止時間，促進潰瘍愈合，胃黏膜下肉芽組織增生，炎癥細胞浸潤減輕，毛細血管豐富，血清IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著降低，胃黏膜EGF和VEGF顯著降低，提示益氣養(yǎng)陰健脾方可改善急性胃潰瘍模型大鼠行為學，保護胃組織，減輕炎癥反應，促進胃黏膜修復及潰瘍愈合。益氣養(yǎng)陰健脾方具有益氣養(yǎng)陰、健脾疏肝功效，方中黃芪健脾補中、益衛(wèi)固表，益氣升陽以治療中虛；黨參健脾補氣；生地黃滋陰降火；玄參、生地黃清熱涼血，養(yǎng)陰生津；柴胡疏散退熱、疏肝解郁、升陽舉陷，疏肝理氣；薏苡仁健脾和胃；白芍養(yǎng)肝斂陰、和胃止痛，助柴胡疏肝功效；枳殼瀉脾壅滯，調中焦運化，加強疏肝理氣、解郁之功；川芎行氣開郁、活血止痛；香附理氣和胃止痛，延胡索活血，行氣，止痛；白芍和甘草配伍緩急止痛，諸藥合用，共奏益氣養(yǎng)陰、健脾疏肝功效，對急性胃潰瘍可標本兼治。現(xiàn)代藥理學證實柴胡疏肝可改善急性應激大鼠行為學及胃組織學形態(tài)，減少潰瘍指數(shù)，提高大腦藍斑中腦腸肽含量，改善胃局部血液循環(huán)、清除氧自由基，保護胃黏膜和增強免疫力［14-15］。

綜上所述，益氣養(yǎng)陰健脾方可改善急性胃潰瘍模型大鼠行為學，保護胃組織，減輕炎癥反應，促進胃黏膜修復及潰瘍愈合。

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R285.5

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1004-745X（2017）09-1596-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.09.028

2017-05-19）